高效液相法分析諾氟沙星膠囊的溶出度

李倩

摘要：目的 采用HPLC法測定諾氟沙星膠囊溶出度。方法 選擇色譜柱為Agilent HC-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為：磷酸-三乙胺緩沖液∶水∶乙腈（60∶28∶12），流速為1.0 ml/min，檢測波長為277 nm，柱溫25 ℃，按照藥典中漿法測定諾氟沙星膠囊溶出度。結果 HPLC法中諾氟沙星膠囊在2.03～50.95 μg/ml范圍內線性關系良好，回歸方程Y=634.4X-543.1，加樣回收率平均值為100.23%，RSD 1.7%；諾氟沙星膠囊在醋酸緩沖液介質中溶出度均值為91.37%，符合藥典標準。結論 高效液相法測定諾氟沙星膠囊準確、可靠，可以作為溶出度檢測的參考方法。

關鍵詞：高效液相法；諾氟沙星膠囊；溶出度

諾氟沙星屬第三代喹諾酮類抗菌藥，具有抗菌作用強、抗菌譜廣、不良反應發生率低等特點，目前已有注射劑、滴眼劑、膠囊劑等多種劑型，且以膠囊劑較為多見[1]。近年來溶出度試驗已成為評價制劑質量及生產工藝的指標之一，也已列入藥典考察指標中。諾氟沙星含量測定方法目前有高效液相色譜法、紫外分光光度法等，2015版藥典中對于諾氟沙星膠囊劑考察為紫外分光光度法[2]，但有報道指出，諾氟沙星所用膠囊在對應波長下存在一定吸收[3]，進而可能干擾檢測結果，本文由此出發，考察高效液相法測定諾氟沙星的可行性。

1資料與方法

1.1儀器與試藥 島津 LC-2010CHT型高效液相色譜儀；瑞士梅特勒XS205DU型電子天平；乙腈、甲醇均由霍尼韋爾貿易（上海）有限公司提供，為色譜醇；冰醋酸、氫氧化鈉、磷酸、三乙胺均為分析純；諾氟沙星對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：130450-201206，含量：99.5%）；諾氟沙星片（浙江萬邦藥業股份有限公司）。

1.2方法

1.2.1高效液相法

1.2.1.1色譜條件 色譜柱選擇Agilent HC-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：磷酸-三乙胺緩沖液（磷酸4 ml與三乙胺7 ml，加50%甲醇稀釋至1000 ml）∶水∶乙腈（60∶28∶12），檢測波長277 nm，進樣量10 μl，流速1.0 ml/min，柱溫為室溫（25℃）。

1.2.1.2溶液的制備

①供試品溶液的制備 精密稱取20粒諾氟沙星膠囊，傾出全部內容物后，研細，混合均勻，精密稱取上述供試品50 mg置于50 ml容量瓶中，加入0.1 mol/L鹽酸適量溶解并定量稀釋至刻度，取上述溶液5 ml于50 ml容量瓶中，加入0.1 mol/L鹽酸稀釋并定容，取適量溶液經微孔濾膜（0.45um）過濾，取續濾液待用。

②對照品溶液的制備 采用十萬分之一天平稱取諾氟沙星對照品10.19 mg于100 ml容量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸適量稀釋至刻度，搖勻即得。

1.2.1.3方法學考察

①精密度試驗 在“1.2.1.1”項色譜條件下，對照品溶液過0.45 μm濾膜后重復進樣6次，10 μl/次，分別測定峰面積，并計算6組數據所得的相對標準偏差RSD，結果為 1.6%<2.0%，符合藥典規定，提示本組方法精密度良好。

②重復性試驗 選擇同批號諾氟沙星膠囊6份，精密稱定后，根據供試品“1.2.1.2①”項操作制備供試品溶液，采用“1.2.1.1”項色譜條件，進樣10 μl，采集6份樣品的色譜圖，計算溶液的相對標準偏差RSD=1.4%（n=6）<2.0%，符合標準規定，提示本組方法具有較好的重復性。

③穩定性試驗 于2 h、4 h、8 h、12 h、24 h取供試品溶液，采用相同色譜條件，進樣10 μl，根據測得的色譜峰面積，供試品組RSD為1.3%<2.0%，提示供試品溶液在24 h內較為穩定。

④回收率考察 精密移取“1.2.1.2①”項供試液2 ml于10 ml容量瓶中，保存至3個錐形瓶內，依次加諾氟沙星對照品溶液1 ml、2 ml和3 ml，加0.1 mol/L鹽酸定容至刻度，過0.45 μm微孔濾膜后取續濾液，進樣10 μl，對峰面積進行測定，得到回收率分別為100.18、100.25%和100.20%，平均100.23%，RSD 1.7%，與藥典標準相符。

1.2.1.4線性關系考察 采用移液管精密移取“1.2.1.2②”下對照品溶液0.20 ml、0.50 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml于10 ml容量瓶中，使用0.1 mol/L鹽酸稀釋至刻度，澄清后，采用0.45 μm微孔濾膜過濾，得到系列標準溶液。結合對應色譜條件，進樣10 μl，測定樣品色譜峰面積，以峰面積和濃度為坐標，建立標準曲線，得到方程為：Y=634.4X-543.1（r=0.9992），提示，諾氟沙星濃度在2.03～50.95 μg/ml范圍內與峰面積存在良好的線性關系。

1.2.2溶出度考察[3] 按照藥典中溶出度與釋放度測定法，配置醋酸緩沖液（取冰醋酸2.86 ml與50%氫氧化鈉溶液1 ml，加水900 ml，振搖，測定pH并結合所測pH用冰醋酸或50% 氫氧化鈉溶液調節至4.0，加水至1000 ml）1000 ml作為溶出介質，調節溶出儀，設定轉速50 r/min，取本品，依法操作，30 min后吸取溶液適量，經0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液，用溶出介質稀釋至約5 μg/ml，為供試品，根據“1.2.1.1”項色譜條件進行測定，并通過“1.2.1.4”標準曲線計算樣品濃度，結合稀釋倍數計算樣品含量m測，結合膠囊標示量m標，計算30 min溶出度=（m測/m標）×100%。

2結果

高效液相法測定的諾氟沙星膠囊平均溶出度（與標識量比較）為91.37%，各自單獨溶出度及平均溶出度均高于75%，符合藥典要求，見表1。

3討論

早期諾氟沙星HPLC法測定多以磷酸-乙腈系統為主，在實驗過程中曾以此法進行檢測，發現峰形拖尾嚴重，柱效低，保留時間過長，故舍棄該法，后查閱到文獻[4]中提到三乙胺的加入可有效改善峰形，經摸索，選擇磷酸-三乙胺緩沖液∶水∶乙腈（60∶28∶12）作為本次研究所用流動相。由本文結果可知，高效液相法測定諾氟沙星含量的方法準確性高、精密度好、重現性均符合相關要求，同時針對相關文獻中提及的空膠囊殼本身存在吸收干擾，故而不利于紫外分光光度的準確性，采用高效液相法通過色譜柱的分離作用，將諾氟沙星制備過程中的有關物質、雜質等干擾有效分離，進而可提高其檢測準確性[5]。

綜上所述，高效液相法測定諾氟沙星膠囊準確、可靠，可以作為溶出度檢測的參考方法。

參考文獻：

[1]吳燕紅，梁權輝，謝加庭，等.不同廠家諾氟沙星膠囊含量及其溶出度的觀察[J].中國處方藥，2016，14（11）：18-19.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].北京：化學工業出版社，2015：1198-1199.

[3]楊亮，蔣玲，李劍，等.口服諾氟沙星膠囊致多形紅斑1例[J].中國醫院用藥評價與分析，2017（1）：143-144.

[4]陳珊珊，蔡建華，許巧云.諾氟沙星膠囊溶出度的研究[J].海峽藥學，2010，22（10）：66-68.

[5]楊靜，徐軼飛，苗愛東.諾氟沙星膠囊含量測定的不確定度評估[J].白求恩醫學雜志，2015，13（6）：593-595.

編輯/王海靜