水通道蛋白1在妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中的表達情況分析

吳美富 王燕(通訊作者)

100191北京大學公共衛生學院

水通道蛋白1在妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中的表達情況分析

吳美富 王燕(通訊作者)

100191北京大學公共衛生學院

目的：探討妊娠期高血壓患者胎盤組織中水通道蛋白1的表達情況。方法：收治妊娠期高血壓患者60例為研究組，以同期正常足月剖宮產孕婦60例為對照組。結果：各組孕婦胎盤組織中均有AQP1的表達；AQP1陽性表達率：重度子癇前期組＞輕度子癇前期組＞妊娠期高血壓組＞對照組(P＜0.05)。結論：AQP1在胎盤組織中的表達與妊娠期高血壓疾病的發生及病情輕重程度有關。

水通道蛋白1；胎盤；高血壓；妊娠期

妊娠期高血壓是妊娠期特有的并發癥，常發生在妊娠20周后，孕婦出現高血壓、蛋白尿、水腫，嚴重者出現以溶血(H)、肝酶升高(EL)和血小板減少(LP)為特點的HELLP綜合征，這是導致孕產婦和圍產兒死亡的重要原因[1]。水通道蛋白1(AQP1)是水通道蛋白(AQPs)家族中唯一在內皮細胞表達的蛋白，參與跨細胞膜轉運水。有學者認為胎盤血管內皮細胞、合體滋養細胞、胎膜的羊膜上皮細胞及平滑絨毛膜的滋養細胞是表達AQP1的主要細胞[2]。劉慧姝等運用RT-PCR法、Western印跡和免疫組織化學方法檢測的結果與上述結果一致[3]，并提示AQP1在胎盤和胎膜中的表達對母胎液體交換及羊水平衡發揮重要的作用。目前關于AQP1與妊娠期高血壓疾病的相關性研究，國內外只有少量報道。Aralla等認為AQP1在胎盤和胎膜組織中的表達水平可能是影響妊娠期高血壓病情的因素之一[4]，可能在妊娠期高血壓的發生、發展過程中發揮作用。本研究通過分析、比較妊娠期高血壓產婦與正常妊娠產婦的胎盤組織中AQP1的表達情況，探討其與妊娠期高血壓疾病的關系。

資料與方法

納入標準：單胎、孕婦無煙酒嗜好、無其他妊娠合并癥(研究組患妊娠期高血壓疾病)。排除孕前急慢性病史者。且此次妊娠無藥物服用史及縮宮素引產史。研究組：選取2013年1月-2014年1月在北京大興部分醫院產科定期產檢檢出患有妊娠期高血壓疾病的孕婦，且最終在該院產科住院，經解痙治療后病情控制仍不滿意，最終行剖宮產分娩的產婦60例作為研究組，其中妊娠期高血壓21例、重度子癇前期20例、輕度子癇前期19例。依據《婦產科學》第7版中妊娠期高血壓診斷標準：①妊娠期高血壓：血壓≥140/90 mmHg，妊娠期首次出現，并于產后12周血壓恢復正常；尿蛋白(-)；可伴有上腹部不適或血小板減少，產后方可確診。②重度子癇前期：血壓≥160/110 mmHg；尿蛋白≥2.0 g/24 h或(++)；血肌酐＞106 μmol/L；血小板＜100×109/L；微血管病性溶血(血LDH升高)；血清ALT或AST升高；持續頭痛、其他腦神經或視覺障礙；持續性上腹不適。③輕度子癇前期：孕20周后出現血壓≥140/90 mmHg；尿蛋白≥300 mg/24 h或(+)；可伴有上腹不適、頭痛等癥狀。對照組：選取同期正常足月妊娠，因頭盆不稱、漏斗骨盆、胎兒窘迫等因素行剖宮產分娩的產婦，并經產婦和家屬知情同意，納入60例為對照組。

標本采集：在產婦胎盤娩出后30 min內剪取胎盤組織，應避開梗死、出血及鈣化區，生理鹽水漂洗去除血液，10%的中性福爾馬林固定24～48 h以上，石蠟包埋用于免疫組化檢測。

實驗方法：采用免疫組化SP法對胎盤組織中的AQP1的表達進行檢測，一抗為濃縮型兔抗人AQP1多克隆抗體。切片脫蠟入水，組織抗原微波修復，先中高火7 min，停3 min，再中高火7 min，停5 min；PBS 5 min，2次；3%H2O2阻斷過氧化物酶活性10 min；PBS 3 min，3次；用正常山羊血清于室溫下孵育10 min；相應的一抗4℃過夜，PBS 5 min，3次；生物素標記二抗室溫孵育30 min，PBS 3 min，3次；DAB顯色，顯微鏡觀察，水洗終止；蘇木素復染1 min；梯度酒精脫水各3 min；透明二甲苯各5 min；中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。

結果判定：評分標準參照Fromowitz等的綜合計分法進行分析，細胞膜或細胞質無著色或與背景顏色一致的為陰性細胞，被染呈棕黃色為陽性細胞。染色強度評分標準：深棕褐色3分，棕褐色2分，淺棕褐色1分，不著色0分。每張切片隨機觀察10個視野，高倍鏡下計數細胞總數和陽性細胞數。陽性細胞數：＞50%為3分，26%～49%為2分，6%～25%為1分，＜5%為0分。陽性細胞數和強度相加得出的結果：0～1分為(-)，2.0分為(+)，3～4分為(++)，5～6分為(+++)，將(+)、(++)、(+++)視為陽性。

統計學方法：本研究所獲得的數據資料采用SPSS 13.0軟件進行處理和分析。用(±s)描述研究對象的年齡、孕期、胎次，采用趨勢χ2檢驗比較對照組、妊娠期高血壓組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組4組中AQP1的表達陽性比例是否呈線性變化。檢驗水準為α=0.05，P＜0.05表示差異具有統計學意義。

表1 兩組研究對象一般臨床資料比較(±s)

表1 兩組研究對象一般臨床資料比較(±s)

項目對照組研究組FP例數6060年齡(歲)27.7±2.728.5±2.40.6390.108孕期(d)268.0±10.2259.0±9.52.2600.135產次1.57±0.71.63±0.70.8200.620

表2 兩組之間AQP1陽性率表達情況的比較(n)

結果

一般情況：研究組平均年齡(28.5± 2.4)歲，平均孕期(259.0±9.5)d，平均孕次(1.63±0.7)。對照組平均年齡(27.7± 2.7)歲，平均孕期(268.0±10.2)d，平均孕次(1.57±0.7)。比較兩組產婦的年齡、孕期和產次，經統計學檢驗，差異不具有統計學意義(P＞0.05)。見表1。

AQP1分布及表達情況：AQP1主要分布于細胞膜或細胞質內，在胎盤絨毛滋養細胞、血管內皮細胞、細胞滋養細胞中表達。且正常產婦胎盤組織的胎盤絨毛滋養細胞正常，血管及毛細血管部分內皮細胞的胞膜及胞質中可見淺棕黃色染色，而重度子癇前期的胎盤絨毛滋養細胞增生，血管及毛細血管內皮細胞的胞膜和胞質呈深棕黃染色，見圖1和圖2。

研究組AQP1的陽性表達率高于對照組。進一步分析表明，各子組胎盤組織中AQP1的陽性表達率：重度子癇前期組＞輕度子癇前期組＞妊娠期高血壓組＞對照組，χ2=27.233，P＜0.05，差異具有統計學意義，見表2。

圖1 AQP1在正常產婦胎盤組織中的表達(SP染色×200)

圖2 AQP1在重度子癇前期產婦胎盤組織中的表達(SP染色×200)

討論

胎盤是維持妊娠和促進胎兒生長發育的重要器官，能夠分泌多種激素，進行母體和胎體之間的物質交換。而構成胎盤的主要細胞是滋養細胞，維持胎盤的正常妊娠功能。胎盤功能異常會引發自然流產、妊娠期高血壓及胎兒生長受限等[5]。妊娠期高血壓在產婦分娩后癥狀消失，提示胎盤與妊娠期高血壓存在關聯，但目前其病理機制尚不清楚，有待于進一步研究。

AQPs是細胞膜或細胞內囊泡中具有透水功能的蛋白分子，其表達或功能不僅對妊娠期母胎之間的液體交換及羊水的生成和代謝密切相關水分子的傳輸產生影響，而且許多疾病如高血壓、心腎功能衰竭、腦水腫、肺水腫及視網膜水腫等均可能與AQPs功能異常或調節失控有關。

目前共發現了13種AQPs，即AQP0-AQP12[6，7]；在胎盤組織中已發現有表達的AQPs包括：AQP1、3、4、8、9，但是胎盤血管內皮細胞只能表達AQP1。

本研究采用形同的方式(免疫組化法)檢測兩組孕婦妊娠期AQP1的表達水平，檢測結果顯示，與正常妊娠孕婦組相比，妊娠期高血壓組孕婦胎盤組織具有更高的AQP1陽性表達率，并且在研究組的3個子組中，發現隨著病情的加重，AQP1的陽性表達率呈逐漸增強的趨勢，重度子癇前期組AQP1的陽性表達率最高，與國內學者Chen等的研究結果相一致[8]；并同時應用趨勢χ2檢驗，差異具有統計學意義。說明AQP1在胎盤組織中的表達情況與妊娠期高血壓相關。提示AQP1可能在妊娠期高血壓疾病的發生、發展中起了重要作用。推測可能的發病機制：①在妊娠期高血壓疾病中，隨著病情的加重，AQP1表達增高，導致胎盤局部組織缺血缺氧，降低胎盤抗凋亡基因表達，引起滋養細胞凋亡，導致胎盤血管生理性重鑄障礙，引發妊娠期高血壓；②AQP1的表達升高導致血管內皮生長因子減少，損傷血管內膜完整性，從而抑制內皮細胞生長和分化，減少胎盤血管生成，導致胎盤血流灌注不足，血管舒縮因子失衡，引起子宮動脈痙攣，引發妊娠期高血壓。

綜上所述，妊娠期高血壓患者胎盤組織中AQP1表達異常，可能與妊娠期高血壓疾病的發生、發展有關，但有待于進一步深入的研究證實，以探索妊娠期高血壓疾病的防治新方法，這對減少圍產期母兒死亡有重要意義。

[1]樂杰.婦產科學[M].北京:人民衛生出版社, 2008:92-99.

[2]Zhu XQ,Jiang SS,Zhu XJ,et al.Expression of aquaporin 1 and aquaporin 3 in fetal membranes and placenta in human term pregnancies with oligohydramnios[J].Placenta,2009, 30(8):670-676.

[3]陳利瓊,安慧敏,朱雪瓊.AQP1和AQP3在子癇前期患者胎盤和胎膜上的表達及意義[J].醫學研究雜志,2012,41(5):94-96.

[4]劉慧姝,宋曉飛,郝榮增.水通道蛋白1在人胎盤和胎膜中的表達[J].南方醫科大學學報,2008,28(3):99-101.

[5]Eide IP,Isaksen CV,Salvesen KA,et al. growth restriction is associated with reduced FasL expression by decidual cells[J].J Reprod Immunol,2007,74(2):7-14.

[6]Damiano AE.Review:water channel proteins in the human placenta and fetal membranes [J].Placenta,2011,32(2):207-211.

[7]Skowronski MT,Skowronska A,Nielsen S. Fluctuation of aquaporin 1,5,and 9 expression in the pig oviduct during the estrous cycle and early pregnancy[J].J Histochem Cytochem,2011,59(4):419.

[8]Aralla M,Mobasheri A,Groppetti D,et al.Expression of aquaporin water channels in canine fetal adnexa in respect to the regulation of amniotic fluid production and absorption [J].Placenta,2012,33(6):502-510.

Clinical analysis of AQP1 expression in placenta of the patients with hypertensive disorder complicating pregnancy

Wu Meifu,Wang Yan(Corresponding author)
School of Public Health of Peking University 100191

Objective:To investigate the expression of aquaporin 1(AQP1)in placenta tissue from the patients with different subsets of gestational hypertension.Methods:60 pregnant women who were diagnosed as gestational hypertension were enrolled in the study group,and 60 cases of the normal full-term cesarean section at the same period as the control group.Results:The expression of AQP1 in placental tissue of pregnant women in each group;the positive rate of AQP1 expression:the severe preeclampsia group＞mild preeclampsia group＞gestational hypertension group＞the control group(P＜0.05).Conclusion:The expression of AQP1 in placenta related to the incidence and severity of hypertensive disorder complicating pregnancy.

Aquaporin 1;Placenta;Hypertension;Gestation period

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.13.54