化療與生物免疫療法治療胃癌的療效及對循環腫瘤細胞（CTC）的影響

翟軍厚　陳鳳軍

[摘要] 目的 探討化療與生物免疫療法治療胃癌的療效及對循環腫瘤細胞（CTC）的影響。 方法 將80例胃癌患者分為對照組與觀察組，對照組僅采用化療，觀察組聯合DC-CIK生物免疫療法進行治療。比較兩組的療效及兩組治療前后的CTC水平。 結果 （1）觀察組治療后的臨床總緩解率顯著高于對照組（P<0.05）；（2）觀察組治療后的CTC檢出率均顯著低于治療前及對照組（P<0.05）。 結論 化療聯合生物免疫治療胃癌臨床療效顯著，可有效降低CTC水平，值得臨床推廣和應用。

[關鍵詞] 胃癌；化療；DC-CIK細胞；循環腫瘤細胞

[中圖分類號] R735 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2017）12-0025-03

[Abstract] Objective To investigate the effect of chemotherapy and bioimmune therapy on gastric cancer and its effect on circulating tumor cells（CTC）. Methods Eighty patients with gastric cancer diagnosed by postoperative pathology were divided into control group and observation group. The control group was treated with chemotherapy only. The observation group was treated with DC-CIK biological immunotherapy. The effect and the CTC levels of two groups before and after treatment were compared. Results （1）The total clinical remission rate in the observation group was significantly higher than that in the control group（P<0.05）； （2）The detection rate of CTC in the observation group was significantly lower than that before treatment and the control group（P<0.05）. Conclusion The clinical effect of chemotherapy combined with biological immunotherapy for gastric cancer is significant， can reduce the CTC level， and should be popularized in clinical practice.

[Key words] Gastric cancer； Chemotherapy； DC-CIK cells； Circulating tumor cells

胃癌早期臨床診斷率較低，常無任何癥狀或癥狀輕微，確診時多為晚期[1]。化療為常用治療胃癌的方法之一，可以顯著改善患者的預后[2]。近年來，生物免疫治療已經逐漸發展成為臨床治療惡性腫瘤的主要方法之一，研究證實，生物免疫療法能夠顯著增強患者的機體免疫力及抑制腫瘤細胞的繁殖，降低化療毒副反應的發生率[3]。本研究主要采用化療聯合生物免疫治療方法即樹突狀細胞（DC）、細胞因子誘導殺傷細胞（CIK）治療胃癌，探討該方案治療的療效及其對CTC水平的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2012年1月～2016年12月期間入住本院的80例胃癌患者隨機分為對照組與觀察組，每組各40例。對照組：男23例，女17例；年齡54～79歲，平均（67.92±10.21）歲；TNM分期：Ⅲ B期25例，Ⅳ期15例；病理類型：低分化腺癌、管狀腺癌、黏液腺癌及印戒細胞癌分別為12例、9例、11例及8例。觀察組：男25例，女15例；年齡56～78歲，平均（67.10±10.18）歲；TNM分期：ⅢB期27例，Ⅳ期13例；病理類型：低分化腺癌、管狀腺癌、黏液腺癌及印戒細胞癌分別為11例、11例、10例及8例。兩組患者的性別、年齡、TNM分期及病理類型等基線資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 治療方法

兩組患者均實施常規手術治療。術后第3周，對照組采用奧沙利鉑（L-OHP）+亞葉酸鈣A及氟尿嘧啶（5-FU）組成的FOLFOX化療方案。觀察組患者在上述治療基礎上聯合生物免疫療法進行治療：采血分離，抽血前皮下注射150 μg的GM-CSF，將PBMC與GM-CSF、IL-4混合置于溫度條件為37℃的恒溫箱之中培育，3 d后完成抗原沖擊培育，2 d后生成成熟的致敏DC，經2周后再將其回輸；在外周血液之中將單個核細胞分離之后，對CIK細胞進行常規培育，1周后再經細胞培育呈陰性，再使用0.9%的NaCl溶液洗滌2～3次，同rhIL-2一起加入自身血漿之中，于2 h以內進行回輸。上述生物制劑每個療程回輸2次，每隔5天后進行化療。

1.3 臨床療效評價

參考世界衛生組織關于癌癥患者臨床療效評價標準，主要分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、無變化（NC）及進展（PD）。臨床總緩解率（%）=（CR例數+PR例數）/總例數×100%[4]。

1.4 CTC檢測

（1）主要材料 激光共聚焦掃描顯微鏡（Laser scanning confocal microscope，LSC）（美國CompuCyte公司），濾器（德國SARTORIUS公司），8 μm孔徑的聚碳酸酯濾膜（英國Whatman公司），異硫氰酸熒光素-兔抗人細胞角蛋白抗體（英國Abcam公司）、藻紅蛋白（PE）-鼠抗人CD45抗體（美國e-Bioscience公司），CK8抗體（上海瑞齊生物科技有限公司）；4，6-二米基苯基吲哚（DAPI），MCF-7胃癌細胞株（中科院上海細胞研究所）。

（2）標本采集 首先將標本采集裝置進行嚴格的消毒處理，使用真空采血針采集受檢者肘靜脈血10 mL，將穿刺后的2 mL肘靜脈血棄去。肝素抗凝，4℃中保存，待檢。選擇SGC-7901人胃癌細胞株構建模擬胃癌患者血樣，這樣做的目的就是為了與上述采集標本進行對照，使用膜濾過的方法對腫瘤細胞進行富集。

（3）LSC自動掃描和形態學觀察 以CK8抗體（上海瑞齊生物科技有限公司）和CD45分別對SGC-7901進行篩選，陽性細胞為CK8（+）CD45（-）。經LSC掃描計數腫瘤細胞水平。

（4）典型CTC判定標準 ①CTC細胞體積比周圍白細胞大；②CTC細胞核經DAPI染色，比較明亮，細胞核較大，核漿所占比例較大，核分裂程度較大，且呈病理性核分裂；③經標志物熒光染色，胞漿抗CK19（+）與CD45（-），顯示存在較為明顯的細胞形態，且具有較為清楚的細胞界限；④細胞核面積與相應胞漿抗原染色部位面積接近。本研究中，將CK19（+）以及細胞數大于1個視為CTC陽性[5]。

1.5 統計學方法

采用SPSS19.0軟件對數據進行統計分析，計量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料采用χ2檢驗，P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組臨床療效比較

經治療后，觀察組CR、PR、NC及PD例數分別為5例、13例、15例及7例，臨床總緩解率為45.00%（18/40）；對照組分別為1例、10例、12例及17例，臨床總緩解率為27.50%（11/40）。觀察組臨床總緩解率顯著高于對照組，差異具有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 兩組患者治療前后CTC檢測結果比較

觀察組治療后CTC檢出率顯著低于治療前及對照組治療后，差異具有統計學意義（P<0.05），見表2。

3 討論

胃癌是我國最為常見的一種惡性腫瘤，早期診斷率非常低，大部分患者確診時已為晚期，失去了手術根治的良好機會，即使可以采取手術治療，但是其術后復發率也非常高[6-8]。因此，對于晚期胃癌患者而言，選擇藥物治療非常關鍵。臨床治療胃癌的主要方法有外科手術、放化療等，但是上述幾種常見治療方法療效并不十分理想。隨著臨床治療胃癌的技術手段的不斷更新與變革，生物免疫治療技術越來越多地應用于臨床疾病的治療之中，取得了非常理想的效果[9-10]。對于腫瘤的治療而言，近年來也開始越來越多地將該新型技術用于臨床治療各種類型的腫瘤，該方法治療腫瘤的重要原理為對機體免疫功能加以調節，不斷增強患者機體免疫力，從而殺死腫瘤細胞。

目前，臨床上常采用化療方法對胃癌患者進行治療，然而化療治療存在著諸多缺陷，如患者耐受度差、不良反應發生率高以及終止治療率較高等方面的缺點，對臨床療效產生極大的影響。此外，化療在遏制腫瘤細胞生長的情況下，會對機體的免疫功能產生抑制性作用，降低機體自身對腫瘤細胞的殺傷力，同時普通化療方案只對部分腫瘤細胞具有殺傷性作用，對微小病灶的殺傷，卻需要機體自身免疫力來完成。對此，僅憑單純的化療方案對胃癌患者實施治療，其療效無法達到滿意程度。本研究觀察組在化療的基礎上采用生物免疫治療[11-13]。在生物免疫治療方案中，DC細胞是目前已知的抗原提呈細胞中功能最強大，且能夠激活處于靜止狀態的T淋巴細胞，并促使免疫應答反應得以最大程度啟動，其在機體免疫反應之中具有非常明顯的調節效果。通過將DC對抗原的攝取能力制作疫苗在體外負載腫瘤相關抗原，疫苗回輸時可將腫瘤抗原帶回至機體之中，從而激活自身的免疫系統，從而有效提高了抗腫瘤及提高免疫水平的作用。近年來，DC細胞生物治療已在臨床腫瘤治療中得到了較為廣泛的應用，然而也存在著一定的問題，如具體的培養過程、培養劑量、接種方法以及疫苗培養時機等方面，均存在較大的爭議。CIK細胞屬于一種全新的非主要組織相容性復合物免疫活性細胞，其繁殖能力以及細胞殺傷活性水平均較高，是該細胞與諸多細胞因子共同在機體之外進行培養而獲取的異質性細胞，不會被T細胞受體所限制，所以其臨床抗腫瘤的優點十分顯著[14]。本研究觀察組采用DC-CIK生物免疫治療方案對患者進行治療，效果十分明顯，觀察組的臨床總緩解率顯著高于對照組（P<0.05）；觀察組治療后CTC檢出率均顯著低于治療前及對照組（P<0.05）。

CTC檢測是臨床上一項較為先進的檢驗技術，其優勢主要表現在僅需要通過抽取患者靜脈血，便能夠對患者體內的CTC的變化情況進行監測。而且通過多年實驗室以及臨床實踐研究表明，學術界對于CTC在與腫瘤的侵襲、轉移等存在的聯系，以及CTC在預測預后、指導個體化治療方面的作用等方面均得到了認可[15]。很長一段時間以來，由于實驗技術存在一定的局限性，臨床上對CTC的檢測一直無合適的檢測方法，這在很大程度上限制了CTC研究的深入。近年來隨著臨床檢驗技術的快速發展，某些CTC檢測方法已獲得了穩定性、敏感性以及特異性均處于較高水平的結果。目前用于檢測CTC的方法有IMS法、密度梯度離心法以及ISET檢測法等，有關CTC臨床價值的研究也取得了令人鼓舞的結果。由此可以得知，CTC可作為臨床判定胃癌患病程度的一個重要指標。

綜上所述，化療聯合生物免疫治療胃癌的臨床療效顯著，可有效降低CTC水平，應在臨床中進行推廣。

[參考文獻]

[1] 陳環球，文旭，顧榮民，等.自體DC細胞疫苗對進展期胃癌術后同步化療患者免疫功能的影響[J].江蘇醫藥，2011，37（6）：668-670.

[2] 王立媛，馬雪梅，王婷婷，等.胃癌患者血清胸苷磷酸化酶表達與臨床病理特征、化療療效及預后關系的研究[J].臨床和實驗醫學雜志，2012，13（3）：1524-1525.

[3] 李井泉，梁杰雄.全身化療聯合 DC-CIK 過繼免疫治療中晚期胃癌的臨床研究[J].河北醫藥，2015，15（10）：1498-1502.