武漢地區(qū)宮頸感染人乳頭瘤病毒患者年齡分布及感染類型特征

肖 晗，孫 紅，向飛艷，夏 倩，劉秀珍，向 贇

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢兒童醫(yī)院 武漢市婦幼保健院, 湖北 武漢 430016)

·論著·

武漢地區(qū)宮頸感染人乳頭瘤病毒患者年齡分布及感染類型特征

肖 晗，孫 紅，向飛艷，夏 倩，劉秀珍，向 贇

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢兒童醫(yī)院 武漢市婦幼保健院, 湖北 武漢 430016)

目的 了解武漢地區(qū)宮頸感染人乳頭瘤病毒(HPV)患者年齡分布、HPV感染亞型，為HPV感染及宮頸癌的預(yù)防和治療提供科學(xué)依據(jù)。方法 對(duì)2015年1月—2016年3月武漢市婦女兒童醫(yī)療保健中心婦產(chǎn)科送檢的9 915份宮頸刷取物標(biāo)本進(jìn)行HPV基因分型檢測(21種亞型)，對(duì)1 732例HPV陽性病例的臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 ≤25、26～、36～、46～和≥56歲年齡組HPV陽性率分別為22.15%、15.90%、17.04%、19.97%和17.57%，各組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=36.587，P<0.01)，≤25和46～歲年齡組的陽性率均高于其他各組。不同年齡組患者單一感染和多重感染率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為14.39、36.51，均P<0.05)，單一感染以46～和≤25組最高，分別為15.41%、15.24%；多重感染以≤25和≥56年齡組最高，感染率分別為6.90%和5.86%。單一感染和多重感染所占比率分別為 75.58%、24.42%，單一感染以HPV高危亞型為主(84.34%)，多重感染以高危-高危復(fù)合型和高危-低危復(fù)合型為主，分別占60.52%、38.77%。以單一感染為主導(dǎo)的有HPV高危亞型33、68、31、16型和HPV低危亞型11型，其所致單一感染/多重感染的比值分別為3.13、2.03、1.71、1.67和2.00。結(jié)論 武漢地區(qū)宮頸 HPV感染率以≤25和46～歲年齡組較高，單一感染和多重感染HPV各亞型分布具有差異。

人乳頭瘤病毒； 宮頸癌； 多重感染； 導(dǎo)流雜交技術(shù)

[Chin J Infect Control，2017，16(5)：399-403]

人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)為嗜上皮病毒，已發(fā)現(xiàn)并鑒定出100余種亞型，其中40余種能侵入人體皮膚黏膜，導(dǎo)致其復(fù)層鱗狀上皮增殖而引發(fā)良性或惡性病變。根據(jù)不同HPV亞型感染致癌危險(xiǎn)性的高低，可將HPV分為低危型和高危型。持續(xù)性的高危型HPV感染被認(rèn)為是女性宮頸癌最主要危險(xiǎn)因素[1]，絕大多數(shù)宮頸癌組織均可檢測到高危型HPV。宮頸癌的腫瘤類型，如鱗癌或腺癌，與感染的HPV亞型有關(guān)[2-3]。HPV亞型與宮頸癌的預(yù)后相關(guān)[4-9]，不過此結(jié)論目前還存在爭議[10-11]。因此，HPV感染的檢測及亞型鑒定對(duì)預(yù)防宮頸癌的發(fā)生,以及制定相應(yīng)的防治措施具有重要意義。不同地區(qū)、人群有各自HPV優(yōu)勢流行亞型和感染類型特征[12]。本研究將2015年1月—2016年3月武漢市婦女兒童醫(yī)療保健中心婦產(chǎn)科宮頸HPV陽性患者分型結(jié)果報(bào)告如下，旨在為本地區(qū)防治女性HPV感染和宮頸癌提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 資料 2015年1月—2016年3月武漢市婦女兒童醫(yī)療保健中心接受HPV分型檢測的女性患者9 915例，其中1 732例HPV陽性。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 標(biāo)本于非月經(jīng)期內(nèi)采集，采集前3 d無陰道用藥或陰道沖洗，24 h內(nèi)無性行為。采集時(shí)充分暴露宮頸，宮頸刷置于宮頸口處輕搓并順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5圈，小心取出宮頸刷，裝入加有專用細(xì)胞保存液的取樣管中，4℃或-20℃保存，2周內(nèi)完成檢測。

1.2.2 試劑與儀器 人乳頭瘤病毒分型檢測試劑盒(PCR+膜雜交法)由廣東潮州凱普生物化學(xué)有限公司生產(chǎn)。該試劑盒由HPV核酸擴(kuò)增試劑、HPV雜交檢測試劑等組成，采用基因擴(kuò)增技術(shù)及導(dǎo)流雜交原理，對(duì)15種高危型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68)和6種低危型(6、11、42、43、44、CP8304)的HPV亞型進(jìn)行基因分型檢測。核酸擴(kuò)增使用美國ABI公司7500型核酸擴(kuò)增儀，核酸雜交使用凱普公司配套的醫(yī)用核酸分子快速雜交儀(HybriMax)。

1.2.3 檢測方法 嚴(yán)格按照試劑說明書依次進(jìn)行DNA分離提取、PCR擴(kuò)增、PCR產(chǎn)物雜交、顯色和結(jié)果判定等實(shí)驗(yàn)。陰性對(duì)照點(diǎn)為陰性，Biotin點(diǎn)和IC點(diǎn)為陽性時(shí)，即可根據(jù)膜條HPV基因亞型分布圖，判讀對(duì)應(yīng)點(diǎn)所代表的HPV亞型為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡組HPV陽性率 將9 915例受檢者按照年齡大小分為≤25、26～、36～、46～和≥56歲共5個(gè)年齡組，各年齡組HPV陽性率分別為22.15%、15.90%、17.04%、19.97%和17.57%，各組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=36.587，P<0.001)，≤25和46～歲年齡組患者陽性率分別為22.15%、19.97%，均高于其他各組?！?5、26～、36～、46～和≥56歲各年齡組陽性病例占總陽性病例的比率分別為20.38%、48.67%、20.61%、8.08%和2.25%，陽性病例主要集中在26～歲年齡組，其次是36～和≤25歲年齡組。不同年齡組患者單一感染和多重感染率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為14.39、36.51，均P<0.05)，單一感染以46～和≤25組最高，分別為15.41%、15.24%；多重感染以≤25和≥56年齡組最高，分別為6.90%和5.86%。見表1。

表1 不同年齡組HPV陽性率及感染類型

Table 1 HPV positive rates and infection types in different age groups

年齡(歲)檢測例數(shù)陽性例數(shù)陽性率(%)單一感染多重感染≤25159435322.15243(15.24)110(6.90)26～530384315.90646(12.18)197(3.71)36～209535717.04286(13.65)71(3.39)46～70114019.97108(15.41)32(4.56)≥562223917.5726(11.71)13(5.86)合計(jì)9915173217.471309(13.20)423(4.27)

2.2 HPV單一感染和多重感染情況 不同年齡組單一感染和多重感染的構(gòu)成比比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.033，P=0.005)。單一感染以HPV高危亞型為主，各年齡組所占比率為76.92%～86.53%。多重感染病例以高危-高危復(fù)合型(HR-HR)和高危-低危復(fù)合型(HR-LR)為主，不同年齡組所占比率為分別為23.08%～63.96%、35.46%～76.92%,僅檢測出3例(0.71%)低危-低危復(fù)合型(LR-LR)。見表2。

2.3 單一感染和多重感染HPV各亞型分布 單一感染和多重感染HPV各亞型分布比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=62.427，P<0.01)。以單一感染為主導(dǎo)的有HR-HPV 33、68、31、16型和LR-HPV 11型，其所致單一感染/多重感染的比值分別為3.13、2.03、1.71、1.67和2.00。見表3。

表2 1 732 例HPV陽性患者單一感染和多重感染情況

HR:為HPV高危亞型；LR：為HPV低危亞型

表3 HPV各亞型的感染類型分布

3 討論

HPV是一種球形雙鏈環(huán)狀DNA病毒，可引發(fā)皮膚黏膜的復(fù)層鱗狀上皮增殖，導(dǎo)致良性病變，如尋常疣、生殖器疣等，同時(shí)HPV也與多種惡性病變，如宮頸癌、乳腺癌[13]、肛門癌、結(jié)直腸癌[14]和膀胱癌[15]的發(fā)生緊密相關(guān)。良性病變多由低危型HPV引起，包括6、11、42、43、44等亞型；惡性病變則主要與高危型HPV相關(guān)，包括16、l8、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等亞型。研究[16-17]證明，宮頸感染高危型HPV者患宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)是未感染者的50倍。

宮頸癌是三大高發(fā)的女性惡性腫瘤之一[18]，嚴(yán)重威脅著全球女性的健康和生命。從HPV感染到發(fā)展為浸潤性宮頸癌通常需經(jīng)歷8～10年或更長時(shí)間，分為潛伏期或亞臨床期、臨床癥狀期和HPV相關(guān)性腫瘤病變期，是一個(gè)緩慢而漸進(jìn)的過程。70%～90%的女性宮頸HPV感染是一過性的，無明顯臨床癥狀，在臨床上又稱之為潛伏期或亞臨床期。被感染個(gè)體的免疫系統(tǒng)一般可在6～24個(gè)月內(nèi)清除掉HPV病毒顆粒；若被感染個(gè)體的免疫力低下時(shí)，HPV病毒顆粒可造成宮頸的持續(xù)性感染，如高危型HPV病毒基因整合到宮頸上皮細(xì)胞，被感染的細(xì)胞存活并增生活躍，分化不良，導(dǎo)致非典型增生，有可能發(fā)展為癌前病變，即不同級(jí)別的宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)。CIN可持續(xù)數(shù)年，其轉(zhuǎn)歸可恢復(fù)正常，也可進(jìn)一步發(fā)展為原位癌乃至浸潤癌。潛伏期、亞臨床感染期都可以檢測到HPV，因此，對(duì)高危型HPV感染的早期檢測和早期治療，阻斷CIN的形成，對(duì)宮頸癌的防治具有重要意義。

以往研究[19]表明，女性宮頸HPV感染狀況具有顯著的年齡特征。本研究中≤25和46～歲年齡組陽性率高于其他各組，表明武漢地區(qū)女性宮頸HPV感染率的高峰并不在26～45歲的性活躍期，而是存在著兩個(gè)年齡高峰，低齡組和高齡組的感染率更高，與何彩華等[20]的研究結(jié)果基本一致，而黃澤棋等[21]研究表明，廣東地區(qū)的男性HPV感染高峰則出現(xiàn)在20～40歲的性活躍期，提示HPV感染的兩性年齡特征可能不同。另外，武漢地區(qū)女性宮頸HPV多重感染率的高峰也分布在年齡軸的兩端，多重感染以≤25和≥56年齡組最高，感染率分別為6.90%和5.86%，高于中間各年齡組，此結(jié)果與張利婭等[22]報(bào)道的浙江地區(qū)結(jié)果相似。HPV感染率及多重感染比例的高峰分布于年齡軸的兩端，提示HPV的感染并不主要與性活躍程度有關(guān)，而更多的與性活動(dòng)的衛(wèi)生狀況以及自身宮頸局部免疫力狀態(tài)有關(guān)[23]，當(dāng)然，該結(jié)論也可能與本研究納入人群為醫(yī)院婦產(chǎn)科的就診患者而非體檢人群有關(guān)。

不同亞型HPV的致癌能力有明顯差異，研究者認(rèn)為，宮頸癌主要由HPV16與HPV18引起[24]，更多專家認(rèn)為同一高危亞型HPV的持續(xù)性感染才是發(fā)生宮頸癌最重要的危險(xiǎn)因素，也有專家認(rèn)為HPV多重感染可能增加持續(xù)感染的風(fēng)險(xiǎn)。本研究比較了不同HPV亞型引起的單一感染與多重感染的比例，發(fā)現(xiàn)該比例在不同HPV亞型具有差異，如高危型中的33型、68型、31型、16型和低危型中的11型引起單一亞型感染比例更高，此結(jié)論暫未在國內(nèi)的其他文獻(xiàn)中報(bào)道。因此，在評(píng)估不同亞型HPV的致癌能力以及開發(fā)和接種HPV疫苗[25]時(shí)應(yīng)充分考慮不同感染類型因素的影響。

目前，宮頸感染HPV病毒與宮頸癌相關(guān)已達(dá)成廣泛的共識(shí)，HPV病毒檢測在國內(nèi)外的宮頸癌篩查指南中均得到了普遍的重視[26-28]，HPV核酸分型檢測從宮頸癌篩查的補(bǔ)充手段逐漸成為宮頸癌初篩的首選方法之一。HPV核酸分型檢測技術(shù)如何在宮頸癌篩查應(yīng)用中實(shí)現(xiàn)最大的效益和效率，達(dá)到既能有效篩查又不過度檢查，仍然是需要深入研究和探討的問題。尤其是隨著HPV疫苗的廣泛應(yīng)用，HPV檢測在宮頸癌中的篩查策略也應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整，使得這一檢測技術(shù)以更經(jīng)濟(jì)更高效的方式保護(hù)女性宮頸的健康[29-30]。

本研究采用HPV核酸分型檢測技術(shù)檢測了大樣本量的武漢地區(qū)女性宮頸的HPV病毒感染狀況，為制定本地區(qū)的篩查策略提供了參考依據(jù)。

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(本文編輯：左雙燕)

Age distribution and infection types ofhumanpapillomaviruscervical infection in patients in Wuhan region

XIAOHan,SUNHong,XIANGFei-yan,XIAQian,LIUXiu-zhen,XIANGYun

(WuhanMedicalandHealthCenterforWomenandChildren,WuhanChildren’sHospital,TongjiMedicalCollegeofHuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430016,China)

Objective To investigate the age distribution and types ofhumanpapillomavirus(HPV) cervical infection in patients in Wuhan region, so as to provide scientific basis for the prevention and treatment of HPV infection and cervical cancer. Methods 9 915 exfoliated cervical cell specimens from patients in Wuhan Medical and Health Center for Women and Children between January 2015 and March 2016 were performed HPV genotyping (21 subtypes), clinical data of 1 732 HPV positive cases were statistically analyzed. Results HPV-positive rates in ≤25, 26～, 36～, 46～, and ≥56 age groups were 22.15%, 15.90%, 17.04%, 19.97%, and 17.57%，respectively (χ2=36.587，P<0.01)，HPV-positive rates in ≤25 and 46～ age groups were both higher than other age groups. There were significant differences in single infection and multiple infection rates among different age groups respectively(χ2=14.39, 36.51，respectively, bothP<0.05)，single infection rate was highest in 46～ and ≤25 age groups (15.41% and 15.24% respectively)；multiple infection rates was highest in ≤25 and ≥56 age groups (6.90% and 5.86% respectively). The percentage of single infection and multiple infection were 75.58% and 24.42% respectively, the major single infection type was HPV high-risk subtype (84.34%)，the major multiple infection types were high-risk and high-risk compound subtype as well as high-risk and low-risk compound subtype, accounting for 60.52% and 38.77% respectively. The main single infection types were HPV high-risk subtypes 33, 68, 31 and 16, as well as and low-risk subtype 11, the ratios of single infection to multiple infection were 3.13, 2.03, 1.71, 1.67 and 2.00 respectively. Conclusion Cervical infection rates in women in Wuhan region is high in ≤25 and 46～ age groups, there are differences in the distribution of different HPV subtypes of single infection and multiple infection.

humanpapillomavirus; cervical cancer; multiple infection; flow-through hybridization technology

2016-09-25

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81201604)；病毒學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金項(xiàng)目(2015KF010)；湖北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2012FFB05301)；武漢市衛(wèi)生計(jì)生委臨床醫(yī)學(xué)科研項(xiàng)目(WX13B18)

肖晗(1980-)，女(漢族)，湖北省武漢市人，副主任技師，主要從事感染性病原體的核酸檢測及腫瘤免疫治療研究。

向贇 E-mail：whfexiangyun@163.com

10.3969/j.issn.1671-9638.2017.05.002

R737.33

A

1671-9638(2017)05-0399-05