益腎化濕顆粒對糖尿病大鼠腎組織的FoxO1表達的影響及意義

劉 靜

河北唐山開灤總醫院 河北省唐山市 063000

益腎化濕顆粒對糖尿病大鼠腎組織的FoxO1表達的影響及意義

劉 靜

河北唐山開灤總醫院 河北省唐山市 063000

目的:探討益腎化濕顆粒對糖尿病大鼠腎組織FoxO1表達的影響，探討益腎化濕顆粒對糖尿病腎病模型大鼠腎保護作用的可能機制。方法:采用STZ誘導糖尿病腎病大鼠模型，大鼠隨機分為正常組、模型組、益腎化濕治療組、洛汀新治療組。觀察各組大鼠治療后腎功能（BUN、Scr）、腎臟肥大指數、血β2微球蛋白含量及Fox01的表達等指標的變化。結果:與模型組比較，益腎化濕顆粒治療組大鼠血BUN、Scr腎臟肥大指數顯著改善（P＜0.01），血β2-MG明顯下降（P＜0.01），腎小球Fox01陽性表達率明顯下降（P＜0.01），益腎化濕顆粒組與洛汀新組比較，各項指標無顯著性差異（P＞0.05）。結論:益腎化濕顆粒可能通過降低腎小球Fox01的表達，使腎小球細胞凋亡延緩，從而可以達到保護腎臟，改善腎臟功能的目的。

益腎化濕顆粒；糖尿病腎病；Fox01

隨著社會的發展，人們生活水平逐漸提高，糖尿病（diabetes mellitus, DM）的患病率逐年增加，在發達國家，糖尿病腎病已居終末期腎衰竭病因的首位，糖尿病腎病(DN)是糖尿病慢性微血管并發癥之一[1]。2015年10月我們觀察了益腎化濕顆粒對DN模型大鼠腎小球Fox01表達的影響，探討其對DN腎小球系膜細胞凋亡的影響，揭示其腎組織保護作用的可能機制。

1 材料

1.1 動物

Wistar雄性大鼠，48只，體質量(250±50)g，由北京維通利華實驗動物中心提供。

1.2 用藥及試劑

益腎化濕顆粒由廣東康臣藥業提供;洛汀新：北京諾華制藥有限公司生產；鏈脲佐菌素（STZ）：購自sigma公司;Fox01試劑盒:購自上海研晶生物科技有限公司。

2 方法

2.1 模型制作及分組給藥

大鼠適應性喂養1周，稱體重，經尿糖、尿蛋白定性檢測為陰性后，隨機分為正常組（12只）造模組（36只），造模組按60mg/Kg體重一次性左下腹腔注射STZ，正常對照組注射同等劑量的檸檬酸鹽緩沖液注射72小時后取鼠尾微量血測定血糖(采用羅氏ACCU-CHEK Active血糖儀)，空腹血糖>16.7mmol/L者，確定糖尿病模型建立。1周后，隨機抽取兩只測尿微量白蛋白＞15 μg/ml，確定DN模型形成，將造模成功后的18只大鼠隨機分為模型組6只，益腎化濕顆粒治療組6只，洛汀新治療組6只。正常組 、模型組分別給蒸餾水2 ml灌胃， 益腎化濕顆粒組給予益腎化濕顆粒混懸液150mg/kg灌胃,洛汀新組給洛汀新（1.5mg/kg）蒸餾水混懸液灌胃。以上給藥均1次/d，共持續8周。

2.2 觀測指標及方法

實驗第8周末，隔夜空腹腹腔麻醉下后采血，，抗凝分離血漿留待檢測。放射免疫分析方法測定血β2微球蛋白含量，全自動生化分析儀檢測BUN，Scr；大鼠處死后摘取右腎，腎臟稱重，腎組織常規石蠟包埋，切片，按Fox01試劑盒操作說明，免疫組化法測定Fox01表達。

2.3 資料統計與分析

3 結果

（1）模型組大鼠BUN、Scr較正常組明顯增高，差異均具有顯著性（P<0.01）；與模型組比較，益腎化濕顆粒組、洛汀新組大鼠BUN、Scr明顯降低，有顯著性差異（P<0.01）。益腎化濕顆粒、洛汀新兩組比較，上述指標無顯著性差異（P>0.05）。說明益腎化濕顆粒和洛汀新治療在改善糖尿病大鼠腎功能、腎臟肥大指數方面均可能有顯著療效，兩者之間無顯著性差異。

（2）模型組大鼠血β2-MG含量較正常組明顯升高，有顯著性差異（P<0.01）；益腎化濕顆粒組、洛汀新組與模型組比較血β2-MG含量均有明顯降低，有顯著性差異（P<0.01）。益腎化濕顆粒組與洛汀新組比較，兩者無明顯差異（P>0.05）。

（3）各組大鼠腎小球Fox01的表達免疫組化陽性表達分析，每例切片隨機選取5個視野，隨后利用光鏡400倍下將圖像捕入病理圖像分析軟件對每個視野進行分析，可得出陽性細胞的平均光密度值和陽性細胞率，反映了Fox01表達。模型組大鼠腎小球Fox01的表達較正常組明顯升高，有顯著性差異（P<0.01）；益腎化濕顆粒組、洛汀新組與模型組比較腎小球Fox01的表達均有明顯降低，有顯著性差異（P<0.01）。益腎化濕顆粒組與洛汀新組比較，兩者無明顯差異（P>0.05），見表1。

表1：六組相關指標比較（n=12,）

表1：六組相關指標比較（n=12,）

注：與對照組比較，*P<0.05；與DN模型組比較，#P<0.05

檢驗指標 正常組 DN模型組 益腎化濕顆粒治療組 洛汀新治療組KW(g) 5.41±0.85 3.76±0.68* 3.73±0.14* 3.74±0.15*KW/BW(g/Kg) 2.08±0.01 5.03±0.08* 2.79±0.12# 2.67±0.17#β2-MG(mmol/L) 3.51±0.29 10.09±0.08* 8.33±0.66*# 8.63±1.30*#BUN(mmol/L) 7.37±0.37 25.51±1.79* 17.52±1.38*# 14.78±2.65*#Scr(umol/L) 15.31±1.87 32.79±1.33* 23.27±1.93*# 23.02±2.19*#Fox01陽性細胞平均光密度值(OD值) 6.72±0.23 24.01±1.29* 13.81±1.47*# 14.03±1.47*#

4 討論

系膜細胞是腎小球中的固有細胞之一，在糖尿病腎病的發生發展中發揮著重要機制之一是系膜細胞的凋亡[2]。有研究顯示糖尿病時的高糖環境能夠誘導腎小球系膜細胞的凋亡增加，抑制系膜細胞凋亡能夠延緩糖尿病腎病的進展[3]，多個研究證實，FoxO1參與糖尿病腎病的發生發展，其中一重要機制是FoxO1與高糖誘導的系膜細胞凋亡密切相關[4]。當前學界對益腎化濕顆粒參與腎小球系膜細胞Fox01的表達的研究并不多，本研究顯示，模型組、益腎化濕顆粒組及洛汀新組各項檢測指標均顯著高于正常對照組，益腎化濕顆粒組及洛汀新組顯著低于模型組，且本研究提示益腎化濕顆粒及洛汀新均對大鼠糖尿病腎組織Fox01的活性予以有效的抑制。這可以證實STZ造模糖尿病大鼠可以并發糖尿病腎病，而益腎化濕顆粒及洛汀新都可以抑制STZ造模大鼠糖尿病腎病的進展。國內外大量實驗證實，腎素-血管緊張素系統阻斷劑對慢性腎臟病具有腎臟保護作用，而洛汀新作為活性較強的血管緊張素轉換酶抑制劑之一，可以使外周血管阻力降低，進而減輕后負荷，減輕腎內壓，因此起到保護腎組織作用；而益腎化濕顆粒由人參、黃芪、白術、茯苓等組成，其中人參能使腎小管管腔的內皮反應性增強及促使脂質去氧化作用；黃芪能補脾氣利尿消腫，同時能改善體內氧自由基的清除，改善蛋白質代謝，提高血漿白蛋白水平，茯苓具有利濕化濁之功效，諸藥合用可以達到延緩糖尿病腎病進展的作用。益腎化濕顆粒與具有代表意義的ACEI類藥物洛汀新具有同樣的抑制腎小球系膜細胞Fox01表達的作用，有一定的臨床價值[5]，為糖尿病腎病的藥物選擇提供了更多的可能性。

[1]鄭元慧,高麗輝,李玲等.自噬與糖尿病腎病相關性研究進展.國際藥學研究雜志,2016,43(05)：844-845.

[2]Cherney DZ.Advances in the treatment of diabetic nephropathy[J].Nephrol News Issues,2013,7(05)：18,33.

[3]Khera T,Martin J,Riley S,et al. Glucose enhances mesangial cell apoptosis.Lab Invest.2006,86：566-577.

[4]Behl Y,Krothapalli P,Desta T,et al.FOXO1 plays an important role in enhanced microvascular cell apoptosis and microvascular cell loss in type 1 and type 2 diabetic rats.Diabetes,2009,58：917-925.

[5]李娜,孫匯,王拓,等.糖尿病腎病發病機制研究進展[J].北華大學學報：自然科學版,2012,2(01)：68-72.