一起豬瘟與藍耳病混合感染并繼發傳染性胸膜肺炎病例的綜合診斷與防控

■文/山東農業大學動物科技學院 陳同煜 彭 濤 王玉超 古金元 胡東方 劉思當山東費縣梁邱獸醫站 范貴瑞

一起豬瘟與藍耳病混合感染并繼發傳染性胸膜肺炎病例的綜合診斷與防控

■文/山東農業大學動物科技學院 陳同煜 彭 濤 王玉超 古金元 胡東方 劉思當山東費縣梁邱獸醫站 范貴瑞

山東某小規模自繁自養豬場發生一起以斷奶仔豬和育肥豬為主的急性呼吸道病疫情，病豬表現高熱、氣喘、被毛粗亂、弓背瘦弱、先便秘后腹瀉等病癥，呈明顯窩發特點，幾乎全群發病，病死率高達60%。通過病死豬剖檢診斷、細菌分離鑒定、組織病理學檢查和分子生物學檢測，確診為豬瘟與藍耳病毒混合感染并繼發胸膜肺炎病例。通過加強生物安全措施，未發病豬群對相關病毒性疾病進行了緊急免疫，并經藥敏試驗篩選敏感藥物，對豬群實施藥物防治，使該豬場疫情得以迅速控制。

豬瘟；藍耳病；胸膜肺炎放線桿菌；診斷；防治

豬瘟和豬繁殖與呼吸綜合征(俗稱“藍耳病”)是危害養豬生產的重要病毒性疾病。近年來，規?；B殖場均高度重視豬瘟和藍耳病的免疫防控，使兩種疫病的防控取得了顯著成效，但一些小規模豬場或散養戶因為免疫程序不合理或操作不規范等因素導致這兩種疾病仍然時有發生，給豬群健康生產帶來了嚴重危害。且常成為其他病毒或細菌性疾病發生的“導火索”，進而給豬場造成更大的經濟損失。下面就一起豬瘟與藍耳病混合感染并繼發傳染性胸膜肺炎的重癥疫情進行分析討論，為類似疾病的診治提供參考借鑒。

1 發病背景

山東某小規模自繁自養豬場現有存欄經產母豬30余頭，于2016年12月初發生一起嚴重的傷亡疫情。病豬表現高熱(40.5～41.5℃)、氣喘、被毛粗亂、弓背瘦弱、先便秘后腹瀉，有的出現耳尖發紺、腹部及四肢末端呈青紫色病癥，主要集中于20～30kg保育豬群，50～80kg肥豬也有發病死亡，呈明顯窩發特點且傳播迅速，發病率近乎100%，病死率高達60%。豬場使用國內某廠家偽狂犬疫苗3日齡滴鼻，14日齡藍耳經典弱毒苗肌肉注射，30日齡豬瘟細胞苗一次免疫，豬瘟與藍耳病母豬均為跟胎免疫。發病后緊急投服氟苯尼考、強力霉素抗生素及注射板藍根針劑，效果不明顯，遂前來就診。

2 綜合診斷

2.1 病豬臨床檢查

送檢病豬主要表現高熱、氣喘、耳尖發紺、耳部及臀部皮膚潮紅發紫、背部皮膚密布針尖大出血點、被毛粗亂、眼瞼腫脹出血(圖1-A)。

2.2 病豬剖檢病變

下頜淋巴結、腹股溝淋巴結等出血腫大，切面黑白相間呈大理石樣(圖1-B)；喉頭黏膜出血(圖1-C)；腎表面散布針尖大出血點(圖1-D)；肺尖葉、心葉及兩側膈葉上部暗紅色實變，間質增寬伴有輕微水腫(圖1-E)；心外膜出血(圖1-F)；脾臟淤血；膀胱黏膜點狀出血；腦膜充血、出血。

圖1 病豬臨床及剖檢病變

2.3 組織病理學病變

對剖檢豬的淋巴結、脾臟、腎臟、心臟、肺臟、腦組織采樣，10%中性福爾馬林溶液固定，常規方法制作石蠟切片，H.E染色，鏡檢。淋巴結發生出血性壞死性淋巴結炎病變(圖2-A)；肺臟高度充血，被膜下淋巴竇顯著擴張，充滿漿液、纖維素及嗜中性白細胞，肺泡內漿液、纖維素滲出，肺泡壁毛細血管顯著充血，部分肺組織呈典型間質性肺炎病變(圖2-B、C)；心內膜下出血，伴有炎性細胞浸潤和漿液、纖維素滲出，心肌纖維變性壞死(圖2-D)；腎臟間質出血，淋巴細胞浸潤(圖2-E)。軟黏膜充血、淋巴細胞浸潤，神經元變性壞死并發生噬神經現象，血管周圍間隙淋巴細胞浸潤，膠質細胞灶狀增生，呈病毒性腦炎病變(圖2-F)。

2.4 病原學檢查

對剖檢病豬的腦、脾臟、肝臟、腎臟、淋巴結及扁桃體采樣，液氮保存，將凍存于液氮中的組織病料解凍后取適量組織加入滅菌PBS液并研磨成勻漿，9,000rpm離心4min，取上清液，使用北京全式金EasyPure Viral DNA/RNA kit(批號為J30723)提取病毒核酸。根據GenBank中公布的序列分別設計豬瘟病毒、豬藍耳病經典毒株的特異性引物，片段大小分別為599bp和372bp，用PCR/RT-PCR方法擴增，將擴增產物在1.5%的瓊脂糖凝膠中電泳，根據紫外凝膠成像儀下條帶位置判定病豬的病原感染狀況。

2.5 細菌分離鑒定及藥物敏感試驗

采集肺組織劃線接種于含新生牛血清(終濃度10%)和NAD(終濃度20g/mL)的TSA培養基上，37℃培養24～48h后挑取疑似菌落進行傳代純化，培養24～48h后可見圓整、中央凸起，閃光不透明，直徑1～2mm的小菌落，革蘭氏染色鏡檢，觀察到菌體呈革蘭氏陰性，多為球桿菌或短桿菌，初步診斷疑似胸膜肺炎放線桿菌(APP)。同時，挑取細小單菌落接種于含新生牛血清(終濃度10%)和NAD(終濃度20g/ mL)的TSB液體培養基中進行增菌，37℃，12h后挑取菌液進行PCR鑒定。根據Genbank公布的序列設計胸膜肺炎放線桿菌(APP)的特異性引物，片段大小346bp，經驗證具有較好的特異性和擴增效率，用PCR/RT-PCR方法擴增后，將擴增產物在1.5%的瓊脂糖凝膠中電泳，紫外凝膠成像儀下根據條帶位置判定病豬的病原感染狀況。

分別挑取兩種細菌及培養基其他形態菌落均勻涂布于新鮮血瓊脂平板上，選取頭孢噻呋鈉、強力霉素、氟苯尼考、恩諾沙星、阿莫西林、慶大霉素、丁胺卡那霉素、林可霉素藥敏片，每片藥物含量10μg。無菌鑷子將藥敏片按一定間隔分別平貼于培養基表面，于37℃CO2培養箱中培養24h。根據抑菌圈直徑(φ)判定細菌對藥物的敏感程度，判定標準為：φ≥25mm為極度敏感；15mm≤φ＜25mm為高度敏感；10mm≤φ＜15mm為中度敏感；φ＜10mm為低度敏感；無抑菌圈則為耐藥。結果顯示：頭孢噻呋鈉、恩諾沙星極度敏感；丁胺卡那霉素、慶大霉素高度敏感，氟苯尼考、阿莫西林中度敏感，強力霉素、林可霉素低度敏感。

圖2 組織病理學變化

3 結論

綜合分析上述試驗結果，此次疫情可能是豬瘟與藍耳病混合感染并繼發豬傳染性胸膜肺炎所致。該豬場在有疫苗免疫保護的情況下卻暴發嚴重疫情，可能與以下3方面因素有關，①該場免疫存在漏洞，初生仔豬豬瘟、藍耳病、偽狂犬病僅免疫一次，同樣母豬僅跟胎免疫一次，顯然這樣的免疫強度難以提供較好的免疫保護。②該養殖戶在疫苗免疫和藥物肌肉注射時，沒有執行“一豬一針”原則，而是一個針頭打一窩，致使本次疫情呈明顯的窩發特點。③該場豬舍條件簡陋，冬季御寒能力差，加之生物安全措施不完善，是造成細菌性疾病滋生和蔓延的又一因素。

圖3 1.5%瓊脂糖凝膠電泳注：M：DL-2000 Marker；+：陽性對照，-：陰性對照；右側S：檢測樣品。

圖4 分離菌株革蘭氏染色 200X

圖5 1.5%瓊脂糖凝膠電泳

4 防控

4.1 加強生物安全舉措封閉豬場，嚴禁外來人員進出，立即淘汰無治療價值病豬，全場實行帶豬消毒，加強豬場衛生消毒。

4.2 藥物防治和緊急免疫

4.2.1 發病豬只豬干擾素肌肉注射。4.2.2 全群包被恩諾沙星和黃芪多糖拌料，飲水添加電解質和多種維生素，

連用3～5d。 4.2.3 選用高效豬瘟細胞苗對發病豬群緊急免疫，劑量為正常免疫的3～5倍，保證一豬一針，防治交叉感染。

4.3 加強飼養管理

清潔豬舍環境衛生，降低豬只飼養密度，提高豬舍溫度，保證新鮮空氣流通，均衡飼料營養，定期帶豬消毒，減少各類應激反應。

4.4 調整豬群免疫程序

4.4.1 對胎次較高、產能低下母豬進行淘汰，母豬群豬瘟、藍耳病、偽狂犬病的疫苗免疫由跟胎免疫改為3～4次/年普免。

4.4.2 新生仔豬進行豬瘟超免，首免1月后進行二次加強免疫；偽狂犬病出生當天滴鼻，使用專用霧化噴頭，保障滴鼻效果；同時加強保育仔豬藍耳病疫苗免疫。

經實施上述防治措施，使得該豬場疫情得以快速控制，及時遏制了經濟損失，豬場恢復穩定生產?！?/p>