不同干制方法對廣葉繡球菌多糖提取率和分子量分布的影響*

張 迪，王宏雨，林衍銓

（福建省農業科學院食用菌研究所，福建 福州 350014）

不同干制方法對廣葉繡球菌多糖提取率和分子量分布的影響*

張 迪，王宏雨，林衍銓**

（福建省農業科學院食用菌研究所，福建 福州 350014）

對廣葉繡球菌（Sparassis latifolia）子實體的熱風烘干品和真空冷凍干燥品的多糖提取率和多糖分子量構成進行了研究。實驗結果表明，不論是采用超聲循環提取還是熱水提取方法，廣葉繡球菌凍干子實體的多糖提取率都顯著高于烘干品，所得多糖的分子量分布也顯著不同，凍干子實體多糖主要成分的重均分子量為4.30× 105Da，烘干品多糖的主要成分重均分子量為2.52×104Da。

廣葉繡球菌；多糖；提取；分子量

廣葉繡球菌（Sparassis latifolia），屬于擔子菌亞門（Basidiomycotina） 異隔擔子菌綱（Heterobasidiomycetes） 無（非） 褶菌目（ApHyllopHorales）繡球菌科（Sparassidacea）繡球菌屬（Sparassis Fr.）。現代研究結果表明廣葉繡球菌具有顯著的輔助降糖、通便功效，其子實體中含有大量β－葡聚糖，能提高人體免疫力及機體造血功能，具有抗癌、防癌的特殊功效，對某些腫瘤也有一定的預防和抑制作用[1－4]。

廣葉繡球菌子實體主要的功能性成分是真菌活性多糖。由于鮮廣葉繡球菌含水量大于90%，現有研究表明子實體干品的干燥工藝對多糖的保留率有較大的影響[5]，本實驗主要對廣葉繡球菌子實體的熱風干燥品和真空冷凍干燥品的多糖提取率和所得多糖的分子量分布特性進行了研究。

1 材料與方法

1.1 供試材料

廣葉繡球菌子實體鮮品購于福建天益菌業有限公司。

1.2 試劑與儀器設備

葡聚糖Dextran T20、T40、T70、T500、T1000、T2000，購自Pharmcia公司。其余試劑均為國產分析純、色譜純；實驗用水為超純水。

CTXNW-2B超聲循環提取機，北京弘祥隆生物技術開發有限公司；日立U1900紫外掃描分光光度計，日本Hitachi公司；sp8800色譜泵，美國物理光譜公司；UM 5000蒸發光檢測儀，北京通微分析儀器有限公司；TSKgel GMPxl色譜柱，日本東曹株式會社；Centrifuge 5804 R離心機；真空冷凍干燥機，北京博醫康有限公司；超純水器Milli-Q plus，Millipore公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 廣葉繡球菌干品制備

生產企業提供的廣葉繡球菌為帶菌袋的未采鮮品。

熱風烘干：廣葉繡球菌鮮菌置于烘干盤上，于熱風循環烘箱中干燥，干燥條件：50℃干燥5 h→60℃干燥2 h→45℃干燥12 h。

真空冷凍干燥：廣葉繡球菌的鮮菇置于冷凍盤上，-35℃預凍24 h，開真空冷凍干燥機進行干燥，干燥條件:冷阱溫度-60℃，擱板溫度30℃，干燥時間30 h。

粉碎：獲得的廣葉繡球菌干品用高速粉碎機粉碎后過60目篩，備用。

1.3.2 廣葉繡球菌多糖提取與處理

熱水提取：準確稱取廣葉繡球菌干品粉末50 g，料液比1∶15，100℃水浴攪拌提取2 h。

超聲提取：準確稱取廣葉繡球菌干品粉末50 g，料液比1∶15，超聲功率600 W，超聲工作間歇比2.5/ 1，提取溫度60℃，全程提取時間90 min。

各種提取方法提取完成以后，將提取液在8 000 r·min-1離心10 min取上清，上清液減壓濃縮至原體積的1/2，在濃縮液中加入4倍體積95%的乙醇醇沉過夜，8 000 r·min-1離心20 min取沉淀置于真空干燥箱中去除殘余乙醇，即得廣葉繡球菌粗多糖。廣葉繡球菌粗多糖用蒸餾水復溶后，8 000 r·min-1離心10 min取上清，使用蒸餾水溶解配制成濃度為15 mg·mL-1的溶液備用。

脫蛋白：采用三氯乙酸法[6]，樣品的濃度為15 mg·mL-1，加入樣品體積1/10的40%TCA溶液，混勻后靜置30 min，8 000 r·min-1離心20 min法的取上清。重復2次后，上清加入4倍體積乙醇醇沉，再用丙酮洗滌沉淀2次，沉淀真空干燥后，得到廣葉繡球菌多糖。

1.3.3 多糖含量的測定與多糖提取率計算

多糖含量測定采用硫酸-蒽酮法[7]，所得數據經SPSS17.0統計分析。

多糖得率（P）公式為：

式中：m1表示多糖總質量；c表示多糖的糖含量（葡萄糖計）；m2表示提取原料質量。

1.3.4 廣葉繡球菌多糖樣品的分子量分布測定

多糖分子量分布測定采用高效凝膠滲透色譜法[8]。

色譜條件：TSKgel GMPxl色譜柱（7.5 mm×300 mm）；流動相為0.05 mol·L-1乙酸銨，流速為0.6 mL·min-1；柱溫30℃；進樣量20 μL；ELSD檢測器：載氣為空氣；載氣壓力450 kPa。漂移管溫度60℃。數據分析系統為Chrommanger5.8 GPC專用版。

標準品和待測樣品的制備：取稱凍干超聲提取子實體多糖、烘干超聲提取子實體多糖和葡聚糖對照品適量，用0.05 mol·L-1乙酸銨溶液溶解為濃度約4 mg·mL-1，作為待測溶液。

2 結果與討論

2.1 不同廣葉繡球菌提取原料的多糖提取率比較

不同干燥方法對廣葉繡球菌子實體的多糖提取率的影響見圖1。

圖1 采用不同干燥方法繡球菌子實體的多糖提取得率Fig.1 Yield of polysaccharide in Sparassia latifolia fruitbodies using different dried methods

對比廣葉繡球菌子實體凍干品與熱風干燥品相同條件下的多糖提取率發現，廣葉繡球菌子實體凍干品的多糖提取率遠大于熱風干燥品，在超聲提取法中凍干品的多糖提取率為12.01%；熱水法中凍干品的提取率為10.18%，相比之下熱風烘干品的提取率僅為5.72%和3.91%。對同一原料采用超聲波循環法和常規熱水法的提取效果進行對比，發現不論是凍干品還是烘干品，超聲循環提取法提取繡球菌多糖的得率均顯著高于熱水提取法。

2.2 凍干品與烘干品提得多糖的分子量分布比較

取重均分子量分別為2 000 000 Da、1 000 000 Da、500 000 Da、70 000 Da、40 000 Da、20 000 Da的葡聚糖對照品溶液進樣測定，記錄峰值保留時間，標定色譜柱，以保留時間對分子量的對數作線性回歸，得回歸方程：Log（MW）=-0.4066+10.9773tR，MW為重均分子量，tR為保留時間（min），相關系數為r=0.9941。烘干品和凍干品提取的廣葉繡球菌多糖的凝膠色譜圖見圖2和圖3。

圖2 烘干品提取的繡球菌多糖的凝膠色譜圖Fig.2 Polysaccharide chromatogram of Sparassia atifolia fruitbodies sample dried by hot air drying

圖3 凍干品提取的繡球菌多糖的凝膠色譜圖Fig.3 Polysaccharide chromatogram of Sparassia atifolia fruitbodies sample dried by vacuum freeze-drying

從圖2可以看出，烘干品提得的廣葉繡球菌子實體多糖在色譜圖上呈現2個主要色譜峰，其重均分子量分別為23.94×105Da和2.52×104Da，相對含量分別為22.11%和77.89%。從圖3可以看出，凍干品提取的廣葉繡球菌子實體多糖在色譜圖上同樣呈現2個主要色譜峰，其重均分子量分別為4.30×105Da和 2.30×104Da，相對含量分別為 89.94%和10.06%。通過對比可以發現，廣葉繡球菌烘干品和凍干品提取的多糖分子量構成是有顯著不同的，烘干品多糖中2.5×104Da左右小分子量多糖為其主要成分，而凍干品提取得的廣葉繡球菌多糖中分子量在4.3×105Da左右大分子量多糖為其主要成分。

3 討論

實驗結果表明廣葉繡球菌子實體凍干品的多糖保留率顯著高于熱風干燥品，這與白辰和宋文榮等[5]的研究結果是一致的，造成這種差異的原因尚不明確，有可能是高溫脫水情況下4.0×104Da～5.0×104Da分子量部分的廣葉繡球菌多糖降解造成的，也有可能與高分子量β葡聚糖分子之間氫鍵的作用形成的不溶性團有關，還有待進一步研究。

對比子實體凍干品和子實體烘干品多糖的分子量構成，烘干品多糖的主要成分為2×104Da左右的小分子量多糖，而凍干品多糖的主要成分為4.3×105Da左右的大分子量多糖，這種分子量構成上的差異對多糖的生物學活性有多大影響，尚不得而知。

[1]Kimura T.Natural products and biological activity of the pharmacologically active cauliflower mushroom Sparassis crispa[J].BioMed Research Intermational,2013,8 (3):501-508.

[2]Chandrasekaran G,Oh DS,Shin HJ.Properties and potential applications of the culinary-medicinal cauliflower mushroom, Sparassis crispa Wulf.:Fr.(Aphyllophoromycetideae):a review[J].International Journal of Medicinal Mushrooms,2011, 13 (2):177-183.

[3]Kim HS,Kim JY,Ryu HS,et al.Induction of dendritic cell maturation by β-glucan isolated from Sparassis crispa[J].International Immunopharmacology,2010,10 (10):1284-1294.

[4]Kim HH,Lee S,Singh TS,et al.Sparassis crispa suppresses mast cell-mediated allergic inflammation:Role of calcium, mitogen-activated protein kinase and nuclear factor-κB[J].Intermational Journal of Molecular Medicine,2012,30 (2): 344-350.

[5]白晨，宋文榮，楊劍飛，等.繡球菌子實體干燥條件與多糖保留率相關性研究[J].食品科學，2012，33（20）：119-122.

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[7]王宏雨，毛方華，陳體強，等.竹蓀抗氧化物質超聲波循環提取工藝[J].福建農業學報，2012，27（7）：743-746.

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Effects of Different Drying Methods on Extraction Rate and Molecular Weight Distribution of Polysaccharides from Sparassis latifolia

ZHANG Di,WANG Hong-yu,LIN Yan-quan
(Institute of Edible&Medicinal Fungi,Fujian Academy of Agicultural Sciences,Fuzhou 350014,China)

Extraction rate and the molecular weight of the polysaccharides of different Sparassis latifolia samples were studied.The results showed that the extraction rate of the polysaccharides of the vacuum freeze dried fruitbodies was significantly higher than that of the hot air dried sample,and the molecular weight distribution of the polysaccharides was also significantly different.The molecular weight of the main polysaccharide of vacuum freeze dried fruitbodies and the hot air dried is 4.30×105Da and 2.52×104Da,respectively.

Sparassis latifolia;polysaccharide;extraction;molecular weight

S646.9

A

1003-8310（2017）03-0054-03

10.13629/j.cnki.53－1054.2017.03.013

福建省屬公益類科研院所專項（2015R1020－7）；福建省農科院PI項目（2016PI－44）。

張迪（1983－），男，碩士，助理研究員，主要從事食用菌天然產物研究。E－mail:photohost＠126.com

**通信作者：林衍銓（1963－），男，大專，研究員，主要從事食（藥）用菌栽培研究。E－mail:lyq－406＠163.com

2017－03－10