基于綜合評分法的不同產(chǎn)地加工方法對瓜蔞藥材質(zhì)量的影響

馮果 曾志乾 吳增光 劉文 李瑋 何新 鄭傳奇 陳熒熒 魏芯平　周云飛

摘要 [目的]優(yōu)選黔產(chǎn)瓜蔞的最佳產(chǎn)地加工方法。[方法]分別采用陰干、曬干、烘干等不同加工方法對新鮮瓜蔞藥材進行加工處理，以多糖、皂苷、水溶性浸出物、醇溶性浸出物為評價指標，采用綜合評分法優(yōu)選瓜蔞的最佳產(chǎn)地加工方法。[結(jié)果]瓜蔞不同產(chǎn)地加工方法的綜合評分值差異較大，從大到小依次為60 ℃烘干（0.88）、曬干（0.23）、陰干（0）。[結(jié)論]60 ℃烘干為瓜蔞的最佳產(chǎn)地加工方法，最佳工藝為：取瓜蔞鮮藥材，除去雜質(zhì)泥土，于60 ℃干燥箱中烘干。該方法能較好地控制瓜蔞藥材的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞 瓜蔞；產(chǎn)地加工方法；藥材質(zhì)量；綜合評分法

中圖分類號 S282.71 文獻標識碼

A 文章編號 0517-6611（2017）29-0120-04

Influences of Different Habitat Processing Method on Quality of Trichosanthes rosthornii Harms by Comprehensive Scoring Method

FENG Guo1，ZENG Zhiqian2，WU Zengguang3 et al

（1.Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang，Guizhou 550025； 2.Hospital of Daqian Town of Daozhen Autonomous County，Zunyi，Guizhou 563500； 3.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193）

Abstract [Objective] The research aimed to optimize the best habitat processing method of Trichosanthes rosthornii Harms.[Method]The fresh Trichosanthes rosthornii Harms was processed respectively in different processing methods such as shady drying，sun drying，oven drying，in polysaccharide，saponin，water soluble extractives，ethanol soluble extract as the evaluation index，the best habitat processing method of Trichosanthes rosthornii Harms was optimized by the comprehensive scoring method.[Result]The different habitat processing method lead to different values of its comprehensive score for Trichosanthes rosthornii Harms，60 ℃ oven drying（0.88）>sun drying（0.23）>shady drying（0）.[Conclusion]60 ℃ oven drying is the best habitat processing method of Trichosanthes rosthornii Harms.The optimum process is as follows：take fresh Trichosanthes rosthornii Harms，removing the contaminated soil，drying in the oven at 60 ℃.This method can better control the quality of Trichosanthes rosthornii Harms.

Key words Trichosanthes rosthornii Harms；Habitat processing method；Material quality；Comprehensive scoring method

基金項目

貴州省中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)研究開發(fā)專項（黔科合中藥字〔2013〕5049號）；貴州省教育廳產(chǎn)學(xué)研基地（黔教合KY字〔2013〕123號）；國家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥部門公共衛(wèi)生服務(wù)項目（〔2015〕136）；貴州省高校工程技術(shù)研究中心建設(shè)項目（黔教合KY字〔2012〕021號）。

作者簡介 馮果（1977—），男，貴州沿河人，副教授，博士，從事中藥新制劑新技術(shù)及中藥藥物代謝動力學(xué)研究。

收稿日期 2017-08-11

瓜蔞為葫蘆科植物栝樓（Trichosanthes kirilowii Maxim.）或雙邊栝樓（Trichosanthes rosthornii Harms）的干燥成熟果實，具有清熱滌痰、寬胸散結(jié)、潤燥滑腸的功效，用于肺熱咳嗽、痰濁黃稠、胸痹心痛、結(jié)胸痞滿、乳癰、肺癰、腸癰、大便秘結(jié)熱[1]。現(xiàn)代研究表明，瓜蔞主要含糖類、皂苷等有效成分[2-6]，具有改善心血管系統(tǒng)功能、祛痰止咳、抗菌、抗?jié)儭⒖鼓[瘤、瀉下及提高耐缺氧能力、降低血清膽固醇等藥理活性[7-11]。產(chǎn)地加工是形成中藥品質(zhì)的重要環(huán)節(jié)，不同的加工方法對瓜蔞中主要化學(xué)成分的影響不同。現(xiàn)代2015年版《中國藥典》一部收載瓜蔞的加工方法為“秋季果實成熟時，連果梗剪下，置通風處陰干。[1]”各地尚有陰干法、曬干法、烘干法等加工方法，因其產(chǎn)地加工方法缺乏統(tǒng)一標準操作指南，方法各異，存在一定的盲目性和隨意性，嚴重影響了瓜蔞飲片的質(zhì)量，瓜蔞的產(chǎn)地加工方法亟待進一步的優(yōu)化和統(tǒng)一。經(jīng)文獻研究，有關(guān)瓜蔞產(chǎn)地加工方法的研究較少且鮮見報道。筆者以瓜蔞藥材中的瓜蔞多糖、皂苷的含量以及水溶性浸出物和醇溶性浸出物作為評價指標，采用綜合評分法研究不同產(chǎn)地加工方法對黔產(chǎn)瓜蔞質(zhì)量的影響，優(yōu)選出瓜蔞的最佳產(chǎn)地加工方法，為瓜蔞的產(chǎn)地加工及質(zhì)量控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器 TU-1810PC型紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）、AE/240型電子天平（上海梅特勒儀器有限公司）、AVY 220型電子天平（日本島津）、SK 8210 HP型超聲波清洗機（上海科導(dǎo)儀器有限公司）、干燥箱（上海市儀器總廠）。

1.2 藥材與試藥 瓜蔞鮮藥材來源于貴州省息烽縣鹿窩鄉(xiāng)種植基地，經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院鑒定教研室魏升華教授鑒定為雙邊栝樓（Trichosanthes rosthornii Harms）的果實。D-無水葡萄糖（中國食品藥品檢定研究院，批號110833-201205，≥98.0%）；齊墩果酸（北京盛世康普化工技術(shù)研究院，批號141127，純度≥98%）；其余試劑為分析純，水為蒸餾水。

1.3 試驗方法

1.3.1 產(chǎn)地加工方法。

1.3.1.1 陰干法。取新鮮全瓜蔞，將果柄編結(jié)成串，瓜蒂向上置陰涼通風處陰干。

1.3.1.2 曬干法。取新鮮全瓜蔞，置太陽光下曬干。

1.3.1.3 烘干法。取新鮮全瓜蔞，分別于40、50、60、80、90 ℃的烘箱內(nèi)干燥。

1.3.2 樣品制備方法

1.3.2.1 瓜蔞皂苷提取。取瓜蔞粉末1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入10倍量水飽和正丁醇后，浸泡12 h，50 ℃下超聲提取40 min，過濾至25 mL容量瓶中，加水飽和正丁醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

1.3.2.2 瓜蔞多糖提取。取瓜蔞粉末1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入25 mL蒸餾水，80 ℃超聲提取3次，過濾，合并濾液濃縮至10 mL，緩慢加入4倍量的無水乙醇，析出絮狀沉淀，4 ℃靜置過夜，抽濾，沉淀依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌3次，于40 ℃真空干燥至恒重，得瓜蔞粗多糖粉末，精密稱取，用水溶解定容，即得供試品溶液。

1.3.3 對照品制備方法。

1.3.3.1 瓜蔞皂苷對照品溶液的制備。精密稱取齊墩果酸對照品5.48 mg于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得0.219 2 mg/mL 齊墩果酸對照品溶液。

1.3.3.2 瓜蔞多糖對照品溶液的制備。精密稱取葡萄糖11.14 mg，置10 mL容量瓶中，用水定容至刻線，再精密吸取1 mL，置10 mL量瓶中，得濃度為0.111 4 mg/mL的葡萄糖標準溶液。

1.3.4 指標成分含量測定方法。

1.3.4.1 瓜蔞皂苷的樣品測定。精密吸取皂苷提取液0.5 mL，80 ℃下?lián)]干溶劑，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸0.8 mL，在60 ℃水浴中加熱15 min，立即置冷水中冷卻，加入冰醋酸5.0 mL搖勻，放置15 min，于545 nm處測定吸光度。

1.3.4.2 瓜蔞多糖的樣品測定。精密吸取多糖提取液0.5 mL，加蒸餾水至1.0 mL，加入1 mL的5%苯酚溶液，搖勻，再加濃硫酸5 mL，搖勻后置沸水浴10 min，冰水浴冷卻至室溫，取出，于487 nm處測定吸光度。

1.3.5 浸出物含量測定方法。

1.3.5.1 水溶性浸出物測定。按2015年版《中國藥典》第四部附錄2201水溶性浸出物測定方法（熱浸法）對樣品進行測定，計算水溶性浸出物的量。

1.3.5.2 醇溶性浸出物測定。按2015年版《中國藥典》第四部附錄2201醇溶性浸出物測定方法（熱浸法）對樣品進行測定，計算醇溶性浸出物的量。

1.3.6 產(chǎn)地加工方法的優(yōu)選。采用多指標綜合評分法[12]優(yōu)選瓜蔞的產(chǎn)地加工方法，以皂苷、多糖的含量以及水溶性浸出物和醇溶性浸出物為評價指標，含量都是越高越好。因此在數(shù)據(jù)處理時引用綜合指標“隸屬度”，即指標隸屬度=（指標值-指標最小值） / （指標最大值-指標最小值）；根據(jù)各成分在瓜蔞中的重要性，考慮到皂苷和多糖各占40%、水溶性浸出物和醇溶性浸出物各占10%的權(quán)重。綜合分數(shù)=多糖隸屬度×40%+皂苷隸屬度×40%+水溶性浸出物隸屬度×10%+醇溶性浸出物隸屬度×10%，滿分為1.00，計算各樣品的綜合評分值。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 線性關(guān)系考察。精密吸取齊墩果酸對照品溶液0.1、0.3、0.5、0.7、0.8、1.0 mL，80 ℃下?lián)]干溶劑，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸0.8 mL，在60 ℃水浴中加熱15 min，立即置冷水中冷卻，加入冰醋酸5.0 mL搖勻，放置15 min，以試劑為空白對照，于545 nm處測定吸光度，以齊墩果酸濃度（mg/mL）為橫坐標、吸光度（A）為縱坐標繪制標準曲線；另外，精密吸取葡萄糖對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，分別置于10 mL的刻度試管中，分別加入蒸餾水至1.0 mL，加入1 mL的5%苯酚溶液，搖勻，再加濃硫酸5 mL，搖勻后置沸水浴10 min，置于冰水浴冷卻至室溫，取出，以相應(yīng)的試劑為空白對照，于487 nm處測定吸光度，以葡萄糖濃度（mg/mL）為橫坐標、吸光度（A）為縱坐標繪制標準曲線。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，瓜蔞皂苷和瓜蔞多糖標準曲線回歸方程的相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.999，其標準曲線的回歸方程、r和線性范圍分別見表1。

2.1.2 精密度試驗。精密吸取 “1.3.2”項下供試品溶液，按照“1.3.4” 項下的條件進行測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)（表1），其RSD均小于3.0%，表明試驗的精密度良好。

2.1.3 重復(fù)性試驗。取同一處理方法的樣品粉末6份，按照 “1.3.2”方法制備供試品溶液，按照“1.3.4” 項下的條件進行測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)（表1），其RSD均小于3.0%，表明試驗的重復(fù)性良好。

安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年

2.1.4 穩(wěn)定性試驗。精密吸取 “1.3.2”項下同一供試品溶液，按照“1.3.4” 項下的條件，分別測定樣品在0、10、20、30、40、60 min的吸光度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)（表1），其RSD均小于30%，表明各樣品在60 min內(nèi)均穩(wěn)定。

2.1.5 加樣回收率試驗。稱取已知含量的樣品6份，精密稱定，分別精密加入對照品溶液，按照 “1.3.2”方法制備供試品溶液，按照“1.3.4” 項下的條件進行測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)（表1），瓜蔞皂苷和瓜蔞多糖回收率試驗的平均回收率分別為99.67%、9947%，RSD均小于3.0%，表明各樣品的回收率較好。

2.2 瓜蔞皂苷含量測定 按照 “1.3.1”方法制備不同產(chǎn)地加工方法的樣品，按照“1.3.2.1”方法提取瓜蔞皂苷樣品溶液、“1.3.4.1” 方法測定不同產(chǎn)地加工方法瓜蔞中皂苷的含量，研究不同產(chǎn)地加工方法對其含量的影響。從表2可看出，不同產(chǎn)地加工方法的瓜蔞樣品中皂苷含量從大到小依次為50 ℃烘干、60 ℃烘干、80 ℃烘干、40 ℃烘干、90 ℃烘干、曬干、陰干。

2.3 瓜蔞多糖含量測定 按照 “1.3.1”方法制備不同產(chǎn)地加工方法的樣品，按照“1.3.2.2”方法提取瓜蔞多糖樣品溶液，“1.3.4.2” 方法測定不同產(chǎn)地加工方法瓜蔞中多糖的含量，研究不同產(chǎn)地加工方法對其含量的影響。從表2可看出，不同產(chǎn)地加工方法的瓜蔞樣品中多糖含量從大到小依次為60 ℃烘干、80 ℃烘干、50 ℃烘干、90 ℃烘干、40 ℃烘干、曬干、陰干。

2.4 瓜蔞浸出物含量測定 按照 “1.3.1”方法制備不同產(chǎn)地加工方法的樣品，按照“1.3.5.1”方法提取、測定各樣品的水溶性浸出物含量，按照“1.3.5.2” 方法提取、測定不同產(chǎn)地加工方法瓜蔞中醇溶性浸出物的含量，研究不同產(chǎn)地加工方法對其浸出物含量的影響。從表2可看出，不同產(chǎn)地加工方法的瓜蔞樣品水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量的大小順序一致，從大到小依次均為40 ℃烘干、50 ℃烘干、60 ℃烘干、80 ℃烘干、曬干、90 ℃烘干、陰干。

2.5 綜合評分法優(yōu)選最佳產(chǎn)地加工方法

按 “1.3.4”“1.3.5” 項下各評價指標的測定方法對各樣品的指標成分進行測定，并按 “1.3.6” 方法計算其綜合評分值，結(jié)果見表3。從表3可得出，以多糖、皂苷、浸出物綜合評價時，陰干法的綜合評分值為0；曬干法的綜合評分值為0.23；在烘干法中，綜合評分值從大到小依次為60 ℃（0.88）、50 ℃（0.81）、80 ℃（0.71）、40 ℃（0.51）、90 ℃（0.37）；不同的產(chǎn)地加工方法對瓜蔞的指標成分影響較大，以綜合評分值從大到小的順序排序為烘干（0.88）、曬干（0.23）、陰干（0）。研究結(jié)果表明，對瓜蔞采用60 ℃干燥時，其綜合評分值最高（0.88），故瓜蔞的最佳產(chǎn)地加工方法為60 ℃烘干，最佳工藝為：取瓜蔞鮮藥材，除去雜質(zhì)泥土，于60 ℃烘箱中烘干。

3 結(jié)論與討論

瓜蔞中皂苷類成分容易受生物活性酶的影響；多糖類成分難溶或不溶于水，但容易被水解成低聚糖、單糖。以多糖為指標，最佳產(chǎn)地加工方法為60 ℃烘干含量最高，不同加工方法中含量從大到小依次為60 ℃烘干、80 ℃烘干、50 ℃烘干、90 ℃烘干、40 ℃烘干、曬干、陰干；以皂苷為指標時，最佳產(chǎn)地加工方法為50 ℃烘干含量最高，不同加工方法中含量從大到小依次為50 ℃烘干、60 ℃烘干、80 ℃烘干、40 ℃烘干、90 ℃烘干、曬干、陰干；以浸出物為指標，最佳的產(chǎn)地加工方法為40 ℃烘干含量最高，不同加工方法中含量從大到小依次為40 ℃烘干、50 ℃烘干、60 ℃烘干、80 ℃烘干、曬干、90 ℃烘干、陰干。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地加工方法對瓜蔞中的含量有很大的影響，從而會影響瓜蔞藥材質(zhì)量的穩(wěn)定性，進一步影響其臨床療效及其品質(zhì)。故在產(chǎn)地加工過程中，應(yīng)盡快滅活新鮮瓜蔞中酶的活性，嚴格控制干燥溫度和時間是瓜蔞產(chǎn)地加工的關(guān)鍵技術(shù)所在，也是影響瓜蔞質(zhì)量的主要因素。

2015年版《中國藥典》收載的瓜蔞加工方法為“秋季果實成熟時，連果梗剪下，置通風處陰干”，經(jīng)對比研究表明，陰干法所得瓜蔞產(chǎn)品中多糖、皂苷以及浸出物的含量并非最高，且在《中國藥典》瓜蔞的質(zhì)量標準中僅有鑒別、檢查和浸出物的質(zhì)量控制方法，目前還沒有含量測定項。而多成分、多指標控制中藥材質(zhì)量已成為發(fā)展新趨勢，是中藥現(xiàn)代化發(fā)展進程中的必然要求。該研究以瓜蔞中多糖、皂苷、水溶性浸出物和醇溶性浸出物作為評價指標，采用綜合評分法對瓜蔞的產(chǎn)地加工方法進行優(yōu)選，得到瓜蔞的最佳產(chǎn)地加工方法為60 ℃烘干法。所優(yōu)選出的產(chǎn)地加工方法科學(xué)、合理，其加工方法的工藝簡單、耗時短、加工出的藥材色澤和品質(zhì)好，綜合評分值較高，使瓜蔞的質(zhì)量從源頭上得到了控制。該產(chǎn)地加工方法的優(yōu)選對企業(yè)及藥農(nóng)的規(guī)模化、產(chǎn)業(yè)化加工瓜蔞藥材具有一定的指導(dǎo)意義，為瓜蔞的質(zhì)量標準的修定及質(zhì)量控制的提高提供了參考。

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