紫外分光光度法測定陳皮類茶飲料的酶解效果

李循則 郭乃菲 江科新 王雪 李思潔

摘要 [目的]使用紫外分光光度測定陳皮類茶飲料的酶解效果。[方法]全波長掃描，確定陳皮類茶飲料樣品的吸收峰，再用紫外分光光度法確定樣品OD值并換算出T值，研究酶解效果。[結果]方法精密度的相對標準偏差為0086%，方法穩定性的相對標準偏差為0210%，靈敏度比感官評價至少高125倍。[結論]用紫外分光光度法研究酶解效果的方法具有較好的精密度、較高的靈敏度和較好的穩定性。

關鍵詞 紫外分光光度法；陳皮；橙皮苷；準確度；精密度

中圖分類號 S-03 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2017）29-0015-03

Enzymes Effect of Dried Tangerine or Orange Peel Tea by Ultraviolet Spectrophotometry

LI Xunze，GUO Naifei，JIANG Kexin et al

（College of Pharmacy， Liaoning University of Chinese Medicine， Dalian， Liaoning 116600）

Abstract [Objective] The aim was to determine enzymes effect of dried tangerine or orange peel tea by ultraviolet spectrophotometry. [Method] Full wavelength scanning was used to determine the absorption peak of the dried tangerine or orange peel tea drinks， and then the sample OD value was determined by UV spectrophotometry， and figured out T value. [Result]The relative standard deviation of the stability of the method was 0.086%；the RSD relative standard deviation of the stability of the method was 0.210%， and the sensitivity was higher than sensory evaluation at least 125 times. [Conclusion] Effect of enzyme solution is studied with UV spectrophotometry， and the method has good precision， high sensitivity and good stability.

Key words Ultraviolet spectrophotometry；Dried tangerine or orange peel；Orange peel glucoside；Accuracy；Precision precision

作者簡介 李循則（1995—），女，遼寧沈陽人，本科生，專業：食品質量與安全。

收稿日期 2017-07-14

陳皮又稱橘皮，為蕓香科植物橘及其栽培變種的干燥成熟果皮。其味苦、辛，性溫，歸肺、脾經，功效為理氣健脾、燥濕化痰，主治脘腹脹滿、食少吐瀉、咳嗽痰多。陳皮類茶飲料常常出現白濁現象[1-3]，雖然不影響其食用價值，但對食品質量造成消費者不可接受的感官效果，因而降低產品合格率與產品價值，甚至造成經濟損失，故需研究改進并解決陳皮類茶飲料中出現的白濁現象。常用酶解法去除陳皮類茶飲料的白濁現象[4-5]，但其酶解效果的評價通常使用感官評價的方法[6-7]，由于人眼能力有限，所以方法的靈敏度較低。為有效解決這一問題，筆者使用紫外分光光度法測定了陳皮類茶飲料的酶解效果。

1 材料與方法

1.1 材料

陳皮購自大連開發區陽光大藥房；果膠酶、纖維素酶、橙皮苷酶、胰蛋白酶均由南京奧多福尼生物科技有限公司提供；純凈水為市售。

FA1204B精密電子天平，上海精科天美科學儀器有限公司；HC-2062高速離心機，安徽中科中佳科學儀器有限公司；C21-WK2102電磁爐，廣東美的生活電器制造有限公司；UV1500紫外分光光度儀，AOE儀器（上海）有限公司；U3010紫外分光光度儀，日力公司。

1.2 方法

1.2.1 陳皮處理方法。

稱取40 g陳皮和1 200 mL純凈水（分3次倒入，每次400 mL）放入鍋中進行蒸煮，煮制30 min，剩水量為400 mL，抽濾，冷藏24 h備用。

1.2.2 紫外分光光度法測定陳皮水解效果的方法學研究。

1.2.2.1 紫外掃描法測定樣品最大吸收峰。

用紫外分光光度儀對陳皮樣品在200～500 nm進行掃描[8-10]，得到樣品的最大吸收峰。

1.2.2.2 方法原理。

借鑒微生物學上微生物生長曲線中吸光度與微生物濃度的關系[11-13]，OD值越大懸浮微生物越多，在微生物學上用干重、濕重與OD值的關系來制作微生物的生長曲線，干重、濕重的值與OD值是成正比，所以干重、濕重值越大說明微生物越多，反映微生物所處的生長狀態，由此可以說明OD值越大，培養基就越渾濁。

在陳皮類茶飲料中，經常會出現白濁現象，一般使用酶解方法解決白濁現象，用感官評價的方法進行判定，產品的透明度越好說明酶解效果越好。感官評價上的澄清效果即為紫外分光光度法的OD值，所以借鑒微生物學研究中干重、濕重與OD值的關系來說明微生物生長情況的原理，應用到研究橙皮苷的酶解效果上是可行的。若OD值越大說明沉淀越多，酶解效果越差。為了結果表達的更直觀，采用以下公式：A=-logT，式中，A為OD值；T為透光率（%）。

1.2.2.3 方法的建立。

以果膠酶為例，研究果膠酶的酶解時間、酶用量、酶解溫度與干重和濕重關系。

（1）酶解溫度。采用“1.2.1”方法處理陳皮，抽濾，pH 50，酶用量為陳皮用量的3.0%，分別置于35、40、45、50、55、60 ℃恒溫水浴鍋中酶解45 min，煮沸20 min滅酶，然后抽濾。在310 nm波長處測定OD值，離心棄去上清液，放入恒溫干燥箱，干燥5 h后測定濕重，然后繼續干燥直至水分完全蒸干，測量干重。

（2）酶用量。將酶用量分別設定為陳皮用量的0、 050%、0.75%、1.50%、3.00%、4.50%、6.00%，55 ℃水浴，其他條件同“1.2.2.3”（1）。

（3）酶解時間。將酶解時間設定為10、20、30、45、60、90 min，酶用量為陳皮用量的3.0%，55 ℃水浴，其他條件同“1.2.2.3”（1）。

1.2.2.4 方法的靈敏度考察。

在不同酶解溫度條件下對“1.2.1”處理后的陳皮樣品進行感官評價。感官評分見表1。

以“1.2.2.3”反應條件處理樣品，對樣品進行稀釋，稀釋倍數為125倍，采用紫外分光光度計，在310 nm波長處測定樣品的OD值，并換算成T值。

1.2.2.5 方法的穩定性考察。

以“1.2.2.3”反應條件處理樣品，滅酶后1 h測定一次樣品OD值，并換算成T值，求相對標準偏差。

1.2.2.6 方法的精密度考察。

以“1.2.2.3”反應條件處理樣品，采用所建立的紫外檢測方法進行精密度測定，計算出相對標準偏差（n=6）[14-16]。

2 結果與分析

2.1 紫外掃描法測定樣品最大吸收峰

由圖1可知，在280 nm 左右波長處有1個吸收峰，但該峰為蛋白質的常見特征吸收峰，不能作為陳皮樣品的吸收峰，而在310 nm波長處出現一組吸收峰，為陳皮樣品的吸收峰，所以陳皮樣品的OD值為310 nm。

2.2 紫外分光光度法測定陳皮水解效果的方法學研究

2.2.1 方法的建立。

2.2.1.1 酶解溫度。

由圖2可知，T值隨酶解溫度的升高先增大后減小，隨著溫度的升高，當溫度超過50 ℃時酶逐漸失活，酶解效果也隨之下降，故T值也隨之下降，離心干燥后的干重、濕重也隨之增大。

2.2.1.2 酶用量。

由圖3可知，T值隨酶用量的升高先增大后減小，隨著酶用量的增加，樣品溶液達到飽和而析出變成沉淀，影響酶解效果，使得酶解效果降低，故T值也會隨之下降，離心干燥后的干重、濕重也會隨之增大。

2.2.1.3 酶解時間。

由圖4可知，T值隨酶解時間的升高先增大后減小，酶解時間超過20 min后，可能由于樣品中的雜質析出，導致酶解效果降低，故T值也隨之下降，離心干燥后的干重、濕重也會隨之增大。

2.2.2 方法的靈敏度。

由圖5可知，感官評價的分數隨溫度的上升呈先上升后下降的趨勢，在50 ℃感官評價的分數最高為4.5。將不同酶解溫度下的樣品稀釋125倍后，用紫外分光光度法測定。T值隨溫度的上升先上升后下降，在50 ℃時T值最大。2條曲線趨勢相近，說明紫外分光光度法的靈敏度比感官評價法的靈敏度至少高出125倍。

2.2.3 方法的穩定性。

50 ℃酶解條件下的相對標準偏差（n=6）為0061 4%，說明試驗重復性良好。

2.2.4 方法的精密度。

6次平行試驗的相對標準偏差為0043%，說明試驗精密度良好。

3 結論與討論

目前對陳皮酶解程度的研究大多是研究橙皮苷的提取

率。而該研究的創新性是借鑒微生物學上微生物生長曲線

中吸光度與微生物濃度的關系，通過紫外分光光度法研究T

值與酶解效果的關系。對該方法進行方法學研究，得出該方法有一定的可行性，方法的重復性好、精密度高。目前，采用紫外分光光度法測定酶解效果的研究鮮見報道，大多研究采用的是感官評價[6-7]或提取率[17]進行酶解效果評價，但是感官評價本身存在很大的誤差，容易影響判斷結果，采用提取率研究的方法成本較高、操作復雜，而紫外分光光度法操作簡便且精確度高，彌補了上述2種試驗方法的不足。

參考文獻

[1] 白偉.桔皮苷對糖水桔子罐頭工藝品質的影響[J].青海大學學報，2011，29（5）：36-38.

[2] 宋雪華.糖水桔子罐頭白濁現象的成因及其防止辦法[J].廣西輕工業，2006（5）：43-44.

[3] 王建成，褚岳高.原汁桔子罐頭的研制[J].食品開發與研究，2004，25（5）：47-49.

[4] 張建軍，孫冬梅，曾曉會，等.二陳湯配方顆粒除雜工藝研究[J].湖南中醫藥大學學報，2009，29（7）：47-49.

[5] 胡海娥，張金桃，肖南，等.復合酶輔助水浸提九制陳皮的工藝研究[J].農產品加工，2015（12）：28-31，35.

[6] 畢蕾.雞骨架生物脫骨技術淺探[J].肉類工業，2016（8）：7-9.

[7] 羅偉，段振華，劉小兵.貽貝煮汁酶解液美拉德反應條件優化及其產物氨基酸組成分析[J].食品科學，2014，35（24）：40-44.

[8] 游元元，李晨，張丹，等.不同品種川陳皮中黃酮類物質的含量比較[J].食品科學，2013，34（2）：212-216.

[9] XIAO Y J，JIANG Z Z，YAO J C，et al.Investigation of picroside IIs impacts on the P450 activities using a cocktail method[J].Chinese J Nat Med，2008，6（4）：292-297.

[10] 趙榆林，楊亞玲，林文添，等.分光光度法測定桔皮中橙皮苷含量[J].光譜實驗室，2003，20（3）：353-355.

[11] 唐遠江，雷幫星，康冀川，等.缺陷假單胞菌HD13發酵過程中生物量和抗菌活性的變化[J].貴州農業科學，2016，44（4）：92-95.

[12] 高琳，高聚林，鬧干朝魯，等.玉米秸稈低溫降解菌系的生長特性及其降解效果的研究[J].內蒙古農業科技，2015，43（5）：7-9，13.

[13] 李學貴，袁生.微生物轉化過程中利用OD值實時監測細菌生物量變化的研究[J].南京師大學報（自然科學版），2003，26（4）：90-93.

[14] 楊冬愛，陳琳琳.治療藥物監測的方法學研究進展[J].中國醫藥科學，2016，6（8）：38-40，113.

[15] 劉靜，劉秀朋.埃索美拉唑鈉中間體清潔驗證殘留限度檢查方法學研究[J].北方藥學，2016，13（8）：1-2.

[16] 陳志剛，山光強，譚玉琴，等.紫外分光光度法測定槲皮素含量方法的建立[J].動物醫學進展，2016，37（1）：122-124.

[17] 寧娜，韓建軍，薛東芳，等.酶解輔助提取陳皮中橙皮苷的工藝優化[J].中國獸藥雜志，2016，50（3）：24-29.