二丁顆粒的水提醇沉工藝研究

張石宇 宋信莉 劉文 湯瑾 石洪州

摘要 [目的]通過水提醇沉法的正交試驗優化中藥復方制劑二丁顆粒的制備工藝。[方法]采用藥典中的水煎煮法制備中藥液，采用醇沉法進行精制，以秦皮乙素的含量和出膏率為評價指標，通過正交試驗對濃縮濃度、乙醇濃度、靜置時間3個因素進行優化。[結果]影響精制結果的因素為濃縮濃度和乙醇濃度，由于靜置時間沒有顯著差異，又從降低成本及節省時間等方面綜合考慮，確定最佳工藝條件為：浸膏濃縮濃度為2 g/mL，乙醇濃度為80%，靜置時間為18 h。[結論]試驗結果為二丁顆粒的劑型改良提供了理論依據。

關鍵詞 秦皮乙素；水提醇沉法；正交試驗；高效液相色譜法

中圖分類號 S-3 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2017）29-0003-03

Water Extractalcohol Precipitation Process of Dibutyl Particles

ZHANG Shiyu1，SONG Xinli2*，LIU Wen2 et al

（1. Guizhou Province Hospital of TCM，Guiyang，Guizhou 550002；2. Guiyang College of TCM，Guiyang，Guizhou 550002）

Abstract [Objective] The water extractalcohol precipitation process of dibutyl particles were optimized by orthogonal test. [Method] The pharmacopeia water decoction prepared in solution and alcohol sinking method were adopted to improve the refined. Taking content and extract rate of phenanthrene as the evaluation index， the concentrated sulfate， ethanol concentration and incubation time of alcohol sinking method were optimized by orthogonal test. [Result] The influencing factors of refining the results were enrichment concentration and ethanol concentration. Because there was no significant difference between incubation time， considering cost and save time， the best process conditions were as followed： the extract concentration was 2 g/mL， the ethanol concentration was 80%， and the incubation time was 18 hours. [Conclusion] The results provide reference for 2 d particles reform.

Key words Phenanthrene；Aqueous alcohol sinking method；Orthogonal experiment；High performance liquid chromatography

作者簡介 張石宇（1987—），女，貴州遵義人，藥師，碩士，從事中藥新技術與新制劑研究。*通訊作者，副教授，碩士，從事中藥新技術與新制劑研究。

收稿日期 2017-09-08

二丁顆粒是由紫花地丁、蒲公英、板藍根、半邊蓮4味藥材制成的中藥復方制劑，成品性狀為棕褐色顆粒；味甜、微苦或味微甜、微苦（無蔗糖）[1]；具清熱解毒、利濕退黃的功能，臨床用于熱癤癰毒、濕熱黃疸、外感風熱、咽喉腫痛等的治療[2-3]。二丁顆粒收載于《中國藥典》2015版 Ⅰ 部。隨著二丁顆粒應用范圍的不斷擴大，人們對其工藝進行研究十分必要。目前，學者們對二丁顆粒的純化工藝研究較少，在制備工藝方面，用水煎煮后直接濃縮加輔料制成顆粒，使得服用量較大。二丁顆粒主要測定方中紫花地丁中秦皮乙素的含量，筆者以此作為方中的質量控制標準，采用水提醇沉方法對二丁顆粒進行了準備，并通過正交試驗對二丁顆粒的制備工藝條件進行了優化，旨在為二丁顆粒的劑型改良提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試劑。WAT-GZ050926CWJ型WATERS高效液相色譜儀（美國WATERS公司）；Diamonsil C18色譜柱（250.0 mm×4.6 mm，5 μm）；SK8210HP型超聲波清洗機（上海科導超聲儀器有限公司）；DZF-6210真空干燥箱（上海齊欣科學儀器有限公司）；AE240微量分析天平（上海梅特勒儀器有限公司）；YP10002電子天平（上海光正醫療儀器有限公司）。甲醇（天津市科密歐化學試劑有限公司，批號：20130410）；甲醇（重慶川東化工有限公司，批號：20121001）；95%乙醇（重慶川東化工有限公司，批號：20130410）；乙腈（天津市科密歐化學試劑有限公司，批號：20130406）；哇哈哈純凈水。

1.1.2 藥材。紫花地丁（中國亳州市京皖中藥飲片廠，批號：皖20150145）、蒲公英（安徽泰源中藥飲片有限公司，批號：皖20160272）、板藍根（中國亳州市京皖中藥飲片廠，批號：皖20100145）、半邊蓮（中國亳州市京皖中藥飲片廠，批號：皖20150145）、秦皮乙素（中國藥品生物制品檢定所，批號：110741-200506）。根據文獻[4]高效液相色譜法測定紫花地丁中秦皮乙素的含量，對紫花地丁進行含量測定，得出安徽亳州的紫花地丁符合藥典標準。

1.2 方法

1.2.1 樣品的制備。

1.2.1.1 對照品溶液的制備。取秦皮乙素對照品適量，精密稱定，加入甲醇制成濃度為306 μg/mL的溶液，即得對照品溶液。

1.2.1.2 二丁顆粒浸膏粉的制備。取紫花地丁、半邊蓮、蒲公英、板藍根各25 g，加水煎煮2次，第1次2.0 h，第2次1.5 h，合并煎液，濾過，濃縮，減壓干燥，直至恒重即得干浸膏，將干浸膏粉碎過100目篩，即得浸膏粉。

1.2.1.3 供試品溶液的制備。取“1.2.1.2”浸膏粉0.14 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入25 mL甲醇，稱定質量，超聲處理（頻率50 kHz）30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

1.2.1.4 陰性對照品溶液的制備。按照“1.2.1.2”方法制備缺紫花地丁的浸膏粉，取0.14 g，再按“1.2.1.3”方法制備陰性對照品溶液。

1.2.2 色譜條件。色譜柱：Diamonsil C18柱（4.6 mm×250.0 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水-冰醋酸（25∶75∶0375）；檢測波長為353 nm；柱溫為25 ℃；流速1.0 mL/min；進樣量10 μL。理論塔板數以秦皮乙素計不低于3 000。

1.2.3 方法學考察。

1.2.3.1 標準曲線的繪制。分別精密吸取“1.2.1.1”對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，取10 μL注入液相色譜儀，按“1.2.2”色譜條件進行測定，以峰面積（y）為縱坐標、對照品溶液濃度（x）為橫坐標繪制標準曲線。

1.2.3.2 精密度試驗。精密吸取10 μL同一濃度（30.60 mg/mL）的秦皮乙素對照品溶液，注入高效液相色譜儀中測定峰面積，重復進樣6次，按照“1.2.2”色譜條件進行分析。

1.2.3.3 穩定性試驗。精密吸取10 mL供試品溶液，室溫下放置，分別于0、2、4、6、8、10、12 h各取10 μL注入高效液相色譜儀中測定峰面積。

1.2.3.4 重復性試驗。按“1.2.1.3”方法制備6批樣品溶液，分別進樣，測定峰面積。

1.2.3.5 陰性試驗。分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照液各10 μL進行高效液相色譜分析。

1.2.3.6 加樣回收率試驗。采用加樣回收法，精密稱取二丁顆粒干浸膏粉約0.08 g（相當于164 μg秦皮乙素）6份，分別精密加入0.54 mL標準品溶液，濃度為306 μg/mL（相當于165.24 μg秦皮乙素標準品），加入25 mL甲醇，稱重，超聲處理（頻率50 kHz）30 min，放冷，補足損失的質量，濾過，制備得6份供試品溶液，各吸取供試品溶液10 μL注入色譜儀中測定。

1.2.4 二丁顆粒的純化工藝研究。

1.2.4.1 未精制前二丁顆粒的含量測定。按“1.2.1.2”的方法平行制備3份浸膏粉，再按“1.2.1.3”的方法制備得供試品溶液。分別取10 μL供試品與對照品注入液相色譜儀，按“1.2.2”色譜條件測定秦皮乙素含量。同時按“1.2.1.2”的方法平行制備3份浸膏粉，測定浸膏率。

1.2.4.2 純化工藝的正交試驗。采用正交法優選秦皮乙素含量高時的醇沉條件，設置3因素3水平正交考察，以秦皮乙素的含量為評價指標，對二丁顆粒純化工藝進行探討。因素與水平見表1。

1.2.4.3 二丁顆粒的精制。以樣品溶液中秦皮乙素含量和出膏率的綜合值作為評價指標進行綜合分析，用水提醇沉法對中藥復方二丁顆粒進行精制。二丁顆粒純化浸膏粉的制備：取紫花地丁、半邊蓮、蒲公英、板藍根各12.5 g，加水煎煮2次，第1次2.0 h，第2次1.5 h，合并煎液，濾過；取續濾液，根據精制試驗正交表和因素水平表，濃縮，待濃縮液冷至室溫，慢慢加入乙醇到濃縮液中，邊加邊攪拌，密封，于3～5 ℃靜置冷藏，取出分離除去沉淀，濾液置于水浴鍋上蒸發至干，減壓干燥即得干浸膏，將干浸膏粉碎過100目篩，即得浸膏粉。供試品溶液的制備：取0.1 g純化后的二丁顆粒浸膏粉，按“1.2.1.3 ”的方法制備，即得供試品溶液。對照品溶液的制備：按“1.2.1.1”的方法制備濃度為15.4 μg/mL的對照品溶液。取上述所得樣品各10 μL，注入液相色譜儀，按“1.2.2”色譜條件測定秦皮乙素含量。

2 結果與分析

2.1 方法學的考察

2.1.1 標準曲線和線性范圍。以峰面積（y）為縱坐標、對照品溶液濃度（x）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程為 y=34 752x-17 057，r=0.999 7，表明對照品溶液濃度為6.12～30.60 mg/mL時線性關系良好。

2.1.2 精密度。重復進樣6次，峰面積標準偏差均小于2.0%，相對標準偏差為0.67%，表明精密度良好。

2.1.3 穩定性。相對標準偏差為1.17%，小于3.00%，表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.1.4 重復性。相對標準偏差為1.41%，小于3.00%，表明試驗重復性較好，方法可靠。

2.1.5 陰性試驗。結果表明，在秦皮乙素的保留時間處無色譜峰，說明對測定無干擾。秦皮乙素對照品、二丁顆粒陰性對照品和二丁顆粒供試品的HPLC圖譜分別見圖1、2、3。

2.2 二丁顆粒的純化工藝研究

2.2.1 未精制前二丁顆粒的含量測定。由表3可知，未精制的二丁顆粒浸膏粉中秦皮乙素的含量為2.049 mg/g，相對標準偏差為2.40%。由表4可知，未精制的二丁顆粒的浸膏得率為21.400 9%，相對標準偏差為0.68%。

2.2.2 純化工藝的正交試驗優化。由表5和方差分析結果可知，影響精制結果的因素為濃縮濃度（A）和乙醇濃度（B），當試驗為A3B3時，即浸膏濃縮濃度為2 g/mL、乙醇濃度為80%時，秦皮乙素的平均含量最高，浸膏出膏率最低。由于C沒有顯著性差異，從降低成本及節約時間等綜合考慮，最佳工藝條件定為A3B3C1，即浸膏濃縮濃度為2 g/mL、乙醇濃度為80%、靜置時間為18 h。

3 結論與討論

中藥復方提取效果直接關系到產品的質量和療效，選擇評價提取工藝優劣的評價指標是研究工作中的重要問題，合理的提取工藝評價指標應該是提取的有效成分質和量的代表，也是提取物臨床作用性質和強度的代表[5]。該研究中，方法學考察是參照2015版藥典一部中二丁顆粒的含量測定法所建立。結果表明，秦皮乙素在濃度為6.12～30.60 μg/mL時具有良好的線性關系，相關系數r=0.999 7；平均回收率為102.28%；樣品溶液在12 h內保持穩定，相對標準偏差為1.17%。該法穩定，為二丁顆粒制備工藝優選提供了依據。

選擇適宜密度的醇沉乙醇濃度和浸膏初始密度對醇沉

的效果有重要影響，若密度或濃度過高，因水煮液中含有較

多的糖類，易包裹藥液，可造成有效成分損失；若濃度或密度過低，則藥液量較大，需消耗大量乙醇，延長工序時間，有效成分也易被破壞[6]。該研究通過正交試驗篩選出最佳的濃縮濃度、乙醇濃度和靜止時間，對二丁顆粒進行精制，為后期二丁顆粒的制備工藝奠定了基礎。

參考文獻

[1]

國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：化學工業出版社，2015：435.

[2] 賈紅慧，袁潔，勾倞，等.二丁顆粒的抑菌抗炎和免疫調節作用[J].華西藥學雜志，2006，21（5）：453-456.

[3] 葛林，李艷.二丁顆粒治療急性咽炎肺胃實熱癥的療效觀察[J].陜西中醫，2010，31（9）：1125-1126.

[4] 陳胡蘭，湯沛然，張梅，等.高效液相色譜法測定紫花地丁中秦皮乙素的含量[J].成都中醫藥大學學報，2007，30（3）：57-60.

[5] 謝秀瓊.對中藥制劑工藝研究評價指標的淺見[J].中藥新藥與臨床藥理，1999，10（4）：197-198.

[6] 包汝潑，崔正華，宋宏騫.養陰清肺片的水提醇沉工藝研究[J]. 海峽藥學，2012，24（11）：19-21.