消毒前后孵化室空氣中沙門氏菌和大腸桿菌污染情況監測

方志　張丹俊　沈學懷

摘要[目的]通過對安徽某大型種雞孵化場在消毒前后孵化室空氣中沙門氏菌和大腸桿菌污染情況的監測，評估該孵化場的消毒程序、消毒劑選擇和使用方法的可行性和實際效果。[方法]采用平板暴露自然沉降法，選用麥康凱培養基為選擇性采樣培養基，SS培養基為沙門氏菌的進一步鑒別培養基，對分離菌進行革蘭氏染色、鏡檢，并對3種不同消毒劑消毒和未消毒時孵化室空氣中的細菌數及孵化出雛時的健雛率進行比較。[結果]連續2 d未消毒，孵化室各功能區即可檢測到沙門氏菌和大腸桿菌，且數量隨未消毒時間的延長而增多；分別使用安立消、過氧乙酸、聚維酮碘3種消毒劑任一種連續消毒2 d后，孵化室空氣中的沙門氏菌和大腸桿菌數量均降為0，健雛率較未消毒時明顯提高。[結論]安立消、過氧乙酸、聚維酮碘3種消毒劑在選擇正確的稀釋濃度、消毒方法和消毒程序后，可以有效殺滅孵化室空氣中的沙門氏菌和大腸桿菌，建議作為孵化室消毒的首選消毒劑交替選用。

關鍵詞消毒；孵化室；空氣；沙門氏菌；大腸桿菌；監測

中圖分類號S851.2+4文獻標識碼

A文章編號0517-6611（2017）36-0075-05

Abstract[Objective]To evaluate the disinfection procedures，choice of disinfectant，feasibility and practical effect of the disinfection method by monitoring the pollution of Salmonella and E.coli in the atmosphere of hatchery room before and after disinfection in a large chicken hatchery of Anhui Province.[Method]The experiment was carried out by natural sedimentation on exposed flat method，with MacConkey culture media as a selective sampling medium.

SS medium was used to further identify Salmonella，and it was confirmed by gram staining and microscopic examination.The number of bacteria in air and health chicks rate in incubator were compared among three different disinfectants and unsterilization.[Result] Salmonella and E.coli were found in each function region of hatchery room after unsterilization for 2 days.With the extension of unsterilization time，the quantity showed an increasing trend.The number of Salmonella and E.coli in the atmosphere of hatchery room reduced to zero after any of three kinds of disinfectants （Anlixiao，peracetic acid，povidone iodine） were used after 2 days.The rate of healthy chicks were significantly improved.[Conclusion] Three kinds of disinfectants （Anlixiao，peracetic acid，povidone iodine）could effectively kill Salmonella and E.coli in the atmosphere of hatchery room with the appropriate diluted concentration，sterilization method and disinfection procedures，so it was suggested that the three disinfectants should be alternately used.

Key wordsDisinfection；Hartchery room；Atmosphere；Salmonella；Escherichia coli；Monitoring

養雞業在我國畜牧業生產中占重要份額，我國已成為世界養雞數量最多的國家之一。隨著養雞業集約化、規模化程度的不斷提高，環境污染帶來的疫病風險也日益加重，嚴重影響了我國養雞業的健康發展。其中，孵化室環境污染是雛雞染病的重要途徑之一，可導致雛雞在孵化和出雛過程中感染某些病原（如沙門氏菌、大腸桿菌等），導致雛雞早期感染、死亡率增高和生長性能受阻等，因此做好孵化室環境消毒工作是控制雛雞早期感染、提高成活率和養殖效益的重要一環。沙門氏菌和大腸桿菌是雛雞的2種重要的致病菌[1]，其中沙門氏菌為革蘭氏陰性短小桿菌，常單獨存在或成對排列，不形成芽孢和莢膜，需氧及兼性厭氧，最適生長溫度為37 ℃，最適pH為6.8～7.8。除雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌外，其他沙門氏菌都有周身鞭毛。沙門氏菌在人或動物腸道內寄生，有的可引發人畜共患病。該細菌在雞群內以垂直傳播為主要傳播方式，也可通過污染的糞便、飼料、飲水、空氣或其他媒介水平傳播。沙門氏菌對雛雞的危害較大，能夠引起雞的沙門氏菌病，如雞白痢、雞副傷寒等。大腸桿菌為革蘭氏陰性卵圓形或短桿菌，中等大小，以單個或成對形式存在，需氧及兼性厭氧，最適宜生長溫度為37 ℃，最適pH為7.2～7.4，是人和動物腸道內正常菌群的成員之一。在雛雞出生后數小時可經口進入消化道，大量繁殖定居，終生伴隨，并隨糞便排出，造成水源、土壤、空氣等污染。大腸桿菌如果侵入腸道以外的組織器官，即可引發雞群發生大腸桿菌病，臨床上主要表現為眼炎、氣囊炎、腹膜炎、關節炎、輸卵管炎、大腸桿菌肉芽腫和敗血癥等[2]。

筆者通過對安徽省某大型種雞孵化場孵化室空氣中沙門氏菌和大腸桿菌污染情況進行監測，評估該孵化場的消毒程序、消毒劑的選擇和使用方法的可行性和實際效果，旨在為做好孵化室空氣中沙門氏菌和大腸桿菌的消毒滅源工作提供科學依據。

1材料與方法

1.1試驗材料麥康凱培養基（青島高科園海博生物技術有限公司）；SS培養基（杭州百思生物技術有限公司）；營養瓊脂培養基；直徑9 cm的一次性培養皿；噴霧消毒器；冰箱（型號為BCD-222，為合肥美菱股份有限公司產品）；恒溫箱（型號為SHP-250，為上海三發科學儀器有限公司產品）；高壓滅菌鍋（型號為XFS-280A+，為浙江新豐醫療器械有限公司產品）；超凈工作臺（型號為SW-D-2F，為上海博訊實業有限公司有限公司醫療設備廠產品）；消毒劑（安立消，由瑞普生物藥業有限公司生產；過氧乙酸，由廣州粵豐動物保健有限公司生產；聚維酮碘，由山西新開元動物獸藥有限公司生產）。

1.2試驗方法

1.2.1孵化室現行消毒程序和消毒方法。

該場孵化室可分為5個功能區：入口處的消毒通道、種蛋貯藏室、孵化大廳、照蛋室和出雛廳。

孵化室入口處分別設置男、女2個更衣室和消毒通道，工作人員進入孵化室必須更換工作服和鞋、帽并經過消毒通道噴霧消毒后方可入內。

種蛋收集后，先放入種蛋貯藏室。種蛋貯藏室分為消毒室和蛋庫兩部分。首先放入種蛋消毒室，種蛋在此碼盤上架后，在密閉的消毒室內用臭氧進行消毒，根據種蛋數量選擇30～50 min的消毒時間。種蛋用臭氧消毒后推入蛋庫內保存，蛋庫內濕度保持在70%～80%，溫度12～18 ℃。蛋庫地面每天用蘸有消毒藥水的濕拖把拖刷，空氣用相同消毒劑按照說明書規定比例稀釋后進行噴霧消毒。

孵化大廳每天在清掃或沖刷干凈后，定時用選定的消毒劑進行噴霧消毒；照蛋室和出雛廳在照蛋和出雛結束后，要對地面和墻壁進行清掃或沖洗，并打開風扇進行通風和排濁，待地面干燥后，關閉風扇，用選定的消毒劑對室內空氣和地面實施噴霧消毒。

孵化箱和出雛箱的消毒：孵化箱和出雛箱的頂部容易沉積灰塵和絨毛，應定時用吸塵器吸除灰塵和絨毛。孵化箱內部在種蛋推入前、出雛箱內部在胚蛋推入后均使用高錳酸鉀和福爾馬林進行熏蒸消毒，具體用量為：高錳酸鉀15 g/m3、福爾馬林30 mL/m2， 熏蒸時長15～20 min。

蛋盤和出雛盤均在使用后先用高壓水槍進行沖洗清潔，放置陽光下曬干或者在清潔、通風的室內晾干后，再用選定的消毒劑按照使用說明書進行噴霧消毒后備用。

1.2.2監測方法

1.2.2.1監測項目。孵化室空氣中沙門氏菌和大腸桿菌的數量。

1.2.2.2采樣方法。采用平板暴露自然沉降法[3]采集樣品。

1.2.2.3監測地點。種蛋貯藏室、孵化箱、孵化大廳、照蛋室、出雛廳。

1.2.2.4監測位置。每個監測地點每次監測的位置固定，包括培養皿的放置高度（離地面1 m）和水平面等。

1.2.2.5采樣時長。通過預試驗來確定采樣時長。選用麥康凱培養基，采用自然沉降法采樣，在連續3 d未消毒的出雛廳內收集樣品，以5 min為起點和間隔時長單位，設置5、10、15、20、25和30 min 6個采樣梯度時長，每個時長同時用3個培養皿進行采樣。采樣結束后將樣品密封帶回實驗室，放置37 ℃恒溫箱內培養24 h，觀察并記錄細菌的菌落數量，以3個培養皿上的同類菌落平均數為參照，選擇在麥康凱培養皿上生長20個左右菌落的采樣時長作為此次試驗的采樣時長。

1.2.2.6監測采樣時間。選用一種消毒劑連續消毒7 d，對后5 d進行連續采樣監測，每天在不同監測點使用消毒劑消毒后1和12 h，分別進行采樣監測。

1.2.2.7細菌培養。將每次采樣后的培養基妥善封存，及時送回化驗室，置于37 ℃恒溫箱內培養24 h，觀察并記錄細菌種類及菌落數。

1.2.2.8主要孵化參數記錄。安排專人對不同條件下監測期間內的健雛率、弱雛率等孵化參數進行記錄。

1.2.2.9消毒劑及其稀釋濃度。選擇過氧乙酸、安立消和聚維酮碘3種常用的消毒劑交替使用，稀釋濃度分別為1∶200、1∶300、1∶500。

1.2.3大腸桿菌和沙門氏菌菌落判定方法。選用麥康凱培養基為選擇性采樣培養基，SS培養基為沙門氏菌的進一步鑒別培養基；根據大腸桿菌和沙門氏菌在以上鑒別培養基上生長的菌落形態、顏色等，結合細菌革蘭氏染色鏡檢結果進行菌落判定。

1.2.3.1大腸桿菌與沙門氏菌在麥康凱培養基上生長的菌落特征[4]。大腸桿菌在麥康凱培養基上生長的菌落特征：菌落鮮桃紅色或微紅色，菌落中心呈深桃紅色，圓形，扁平，邊緣整齊，表面光滑，濕潤。

沙門氏菌在麥康凱培養基上生長的菌落特征：無色至淺橙色，透明或半透明，菌落中心有時為暗色，圓形，稍微凸起，邊緣整齊，濕潤光滑。

1.2.3.2大腸桿菌和沙門氏菌在SS培養基上生長菌落的特征[5]。大腸桿菌在SS培養基上生長的菌落特征：菌落生長一般或較差，該菌發酵乳糖，菌落呈桃紅色或者粉紅色。沙門氏菌在SS培養基上生長的菌落特征：生長良好，該菌不發酵乳糖，有的能產生硫化氫，菌落呈無色半透明或黑色。

1.2.4孵化室空氣中的細菌含量計算。按照奧氏公式[6]計算孵化室空氣中的細菌含量，即空氣中每立方米細菌數=50 000N/AT。式中，N為平板上生長的菌落數，A為所用的平板面積（cm2），T為平板檢測時暴露在空氣中的時間（min）。

2結果與分析

2.1監測采樣預試驗結果由表1可知，當采樣時長為20 min 時，平均生長菌落數量為19個，最接近于20個。為便于后續試驗結果的分析，故選擇采樣時長20 min作為此次試驗的采樣時長。

2.2未消毒狀況下孵化室空氣中沙門氏菌和大腸桿菌的監測結果

在連續7 d對孵化室不消毒的情況下，對后5 d實施孵化室空氣中沙門氏菌和大腸桿菌的連續監測，結果見表2和表3。由表2和表3可知，各監測點均可檢測到一定數量的沙門氏菌和大腸桿菌，以出雛廳數量最多，蛋庫數量最少；隨著未消毒時間的延長，細菌數量呈逐漸增多趨勢。每個監測點和時間點的大腸桿菌污染量均較沙門氏菌污染量多。

2.3使用3種消毒劑消毒后的監測結果在連續7 d使用某種消毒劑任一種對孵化室消毒后，對后5 d孵化室內蛋庫、孵化箱、孵化廳、照蛋室、出雛廳空氣中沙門氏菌和大腸桿菌數量進行連續監測。監測結果表明，使用上述3種消毒劑按照孵化室現行消毒程序和消毒方法連續消毒3 d后，不同時間點各監測點的沙門氏菌和大腸桿菌數量均降至零。

2.43種消毒劑消毒后和未消毒狀況下孵化出雛情況統計

由表4可知，使用以上3種消毒劑消毒后與未消毒狀況下，監測期內不同品種雞的種蛋孵化出雛平均健雛率表現為消毒后比未消毒狀況下好，使用3種消毒劑消毒后的混合品種平均健雛率分別較未消毒狀況下提高2.69、2.71和2.95百分點。

從圖1可以看出，同一品種雞在消毒和未消毒狀態下，品種817平均健雛率的增幅最大，為2.89%～3.49%；土雞次之，為2.29%～2.74%；新廣麻平均健雛率的增幅最小，為2.11%～2.54%。不同消毒劑消毒后生成的平均健雛率差異較小，消毒效果相近。

3討論

（1）孵化室空氣中的沙門氏菌和大腸桿菌主要來自受污染的種蛋、蛋箱、出雛箱和運輸車輛以及人員等的攜帶，孵化過程中腐敗的破損蛋、亡蛋對環境的污染以及出雛時攜帶細菌的絨毛和灰塵等對空氣環境的污染[7]。該試驗結果表明，如果連續2 d以上不消毒，孵化室各個功能區的空氣中大腸桿菌和沙門氏菌的含量就會呈現不斷增加的趨勢，導致孵化室嚴重污染，其中以出雛廳和照蛋室污染最為嚴重，這與出雛時細菌隨著絨毛和灰塵在空中飛揚，以及后期照蛋時腐敗的亡蛋和死胚破損對環境造成的污染有關，因此選用適合的消毒劑和消毒程序可在連續2 d的消毒后殺滅孵化室空氣中的沙門氏菌和大腸桿菌。

（2）安立消、過氧乙酸、聚維酮碘分別為陽離子表面活性劑、強氧化劑、碘制劑類消毒藥，是養殖生產中使用廣泛、性價比較高的3種消毒劑。該試驗結果表明，雖然3種消毒劑的殺菌原理不同，但都能較好地殺滅孵化室空氣中的大腸桿菌和沙門氏菌，可以作為孵化室常規消毒的首選消毒劑。為了避免耐藥性的產生，建議以上3種消毒劑交替使用，每14 d更換一種消毒劑。李寶棟等[8]所報道的安立消和過氧乙酸對蛋雞舍空氣中大腸桿菌的消毒殺滅效果與該試驗結果相一致。

（3）選擇合適的消毒劑和消毒程序對孵化室進行消毒，能明顯提高孵化出雛時的健雛率。該試驗結果表明，使用上述3種消毒劑中的任何一種按照正確的使用方法消毒后，均能明顯提高不同品種雞孵化出雛時的健雛率，其中以817平均健雛率的增幅最大，為2.89%～3.49%；土雞次之，為2.29%～2.74%；新廣麻平均健雛率的增幅最小，為2.11%～2.54%。這可能與品種不同或此次監測期間孵化批次及數量不等有關；對于同一品種雞，不同消毒劑消毒后產生的平均健雛率也略有差異，但變化幅度很小，這種差異是否因不

同消毒劑對孵化和出雛中的種蛋與雛雞產生一定的不良作用有關則有待進一步探討。

4結論

沙門氏菌和大腸桿菌是對雛雞危害重大的2種細菌性病原，孵化室一旦被其污染，不僅會造成雛雞出雛率和健雛率下降，導致雛雞早期死亡率升高，生長性能下降，而且會嚴重影響孵化場的聲譽并導致經濟效益下降。因此，做好孵化室的消毒工作是提高孵化出雛效率和經濟效益的重要環節。選擇適宜的消毒劑和執行嚴格的消毒程序可以有效殺滅孵化室空氣中的沙門氏菌和大腸桿菌，可以顯著提高出雛時的健雛率和早期成活率。安立消、過氧乙酸、聚維酮碘3種消毒劑均具有性價比高、易購買等特點，在采取正確的稀釋濃度、消毒方法和消毒程序后，可以有效殺滅孵化室空氣中的沙門氏菌和大腸桿菌，建議作為孵化室消毒的首選消毒劑交替選用。

參考文獻

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