金胺O熒光染色法輔助診斷結核抗酸桿菌感染的價值分析*

廖子龍，徐加譽，陳寶玉，李勇

（1.廣東省深圳市鹽田區人民醫院 病理科，廣東 深圳 518000；2.中南大學湘雅醫院 病理科，湖南 長沙 410008）

結核病是危害性極大的一種傳染性疾病，近年來發病率日益升高，針對結核病的診斷受到越來越廣泛的重視，目前結核病的主要確診方式包括抗酸染色發、病理組織學等方法，抗酸染色法雖然特異性高，但鏡檢時間長、敏感性低，無法滿足診斷需求，因此探索一種更佳的診斷方式意義重大[1-3]。為進一步提高結核抗酸桿菌感染的診斷效果，本研究通過對照分析金胺O熒光染色法應用于病理組織切片的診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院2017年6月-2018年6月收治的接受金胺O熒光染色、抗酸染色、痰涂片抗酸染色及血清學結核抗體金標法聯合檢測的病理組織切片患者195例，所有患者均對本次研究知情，簽署了知情同意書，研究經院倫理委員會批準。195例患者包括男103例，女92例；年齡35～69歲，平均（48.37±5.24）歲。

1.2 方法

檢測儀器包括：常規顯微鏡、電熱恒溫水槽及熒光顯微鏡。主要試劑包括：抗酸染液、金胺O熒光染液?？顾崛疽喊凑正R爾-尼爾森（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法相關規程配制，金胺O熒光染液采用1 g金胺O放入95%乙醇10 ml中再加5%石炭酸液90 ml；脫色劑采用3%鹽酸乙醇液；復染劑采用2.5%高錳酸鉀。試劑盒由珠海貝索生物技術有限公司提供。

金胺O熒光染色法：將石蠟切片脫蠟至水，然后取金胺O熒光染液，將組織切片放入其中，以65℃電熱恒溫水槽進行15 min的染色，再以室溫繼續15 min染色，洗凈后取3%鹽酸乙醇進行1～2 min脫色處理，至外觀無黃色呈現。最后使用2.5%高錳酸鉀進行3～5 min的復染，洗凈后烤干，中性樹膠封固后待檢?？顾崛旧ǎ阂猿Ｒ幍臉藴什僮髁鞒?，對樣本進行染色處理，包括病理組織切片抗酸染色、痰涂片抗酸染色。血清學結核抗體金標法：按照試劑盒說明書進行操作及判斷。

1.3 觀察指標

①觀察計算金胺O熒光染色法、組織抗酸法、痰涂抗酸法及血清學結核抗體金標法的陽性檢出情況。金胺O熒光染色法采用熒光顯微鏡20 倍物鏡觀察切片，背景為黑色，有時背景殘留物呈淡黃色，而抗酸性菌呈明亮的橘黃色；抗酸染色法采用普通光學顯微油鏡、10倍目鏡、100倍物鏡進行觀察，結核桿菌呈亮紅色，其他組織呈淡粉紅色或淺藍色；金標法利用結核桿菌特異性外膜抗原，采用斑點免疫金滲濾試驗原理進行檢測，硝酸纖維膜上出現顏色深淺表示陽性程度。②觀察計算上述方法診斷結核抗酸桿菌感染的敏感性和特異性，敏感性=真陽性例數/（真陽性例數 +假陰性例數）×100%，即正確判斷感染率；特異性=真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）×100%，即正確判斷非感染率。

1.4 統計學方法

采用SPSS 21.00分析，計數數據以百分比（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 4種染色方法陽性率對比

經病理與臨床明確診斷為陽性87例，金胺O熒光染色法檢出60例陽性，陽性率為68.97%（60/87）；組織抗酸法陽性檢出率為29.89% （26/87）；痰涂抗酸法陽性檢出率為10.34%（9/87）；血清學結核抗體金標法檢出13 例陽性，陽性率14.94%（13/87）。明確診斷為陰性80例，金胺O熒光染色法檢出4例陽性，陽性率為5.00%；組織抗酸法、痰涂抗酸法、血清學結核抗體金標法均未檢出陽性。臨床診斷為結核抗酸桿菌感染而病理未確診28例，金胺O熒光染色法檢出14例陽性，陽性率為50.00%（14/28）；組織抗酸法陽性檢出率為17.86%（5/28）；痰涂抗酸法陽性檢出率為17.86%（5/28）；血清學結核抗體金標法檢出4例陽性，陽性率14.29%（4/28）。金胺O熒光染色法各方面診斷陽性率比組織抗酸法、痰涂抗酸法及血清學結核抗體金標法陽性率均明顯更高（確診為陽性：χ2=37.79/76.53/65.59，P=0.000/0.000/0.000；確診為陰性：χ2=4.10，P=0.043；臨床診斷為陽性而病理未確診：χ2=6.45/6.45/8.18，P=0.011/0.011/0.004）。

2.2 4種染色方法敏感性和特異性對比

金胺O熒光染色法的特異性與組織抗酸法、痰涂抗酸法及血清學結核抗體金標法比較差異無統計學意義（P＞0.05），金胺O熒光染色法的敏感性則比其他方法顯著更高（P＜0.05），見表1。

表1 4種染色方法敏感性和特異性對比 %

3 討論

臨床在診斷結核抗酸桿菌感染中，結核樣結節及干酪樣壞死等是其主要病理表現，不過結合抗酸桿菌感染也存在不典型的病變，因此將結核抗酸桿菌直接在病變處找到是確診結核病的重要途徑[4-6]。目前臨床通常采取痰涂片結核血清學金標法檢測，病理組織也是確診結核抗酸桿菌感染的重要方法，該方法作為金標準，具有很高的診斷準確性，不過在特殊情況下也需要采用特殊染色法進行輔助診斷，染色法則一般行Ziehl-Neelsen抗酸染色配合常規顯微鏡，但是檢出率較低[7-9]。

金胺O熒光染色法與上述染色法原理相同，不過前者在低倍鏡下可觀察菌體呈亮綠色，背景黑暗，具有清晰的形態特征，不容易出現漏檢情況，使鏡檢效率顯著提高[10-12]。本研究中通過對195 例病理組織標本進行抗酸染色檢測、血清學結核抗體檢測及金胺O熒光染色檢測，結果顯示經病例與臨床診斷確診為陽性的87例病理組織切片中金胺O熒光染色法檢測陽性率為68.97%，明顯高于組織抗酸法（29.89%）、痰涂抗酸法（10.34%）、血清學結核抗體金標法（14.94%）。不過在確診為陰性的80例病理切片之中，金胺O熒光染色法檢出4例陽性，其他方法未檢出陽性，該假陽性結果考慮與組織切片、染色等過程中雜質影響密切相關，雜質在熒光顯微鏡藍色激發后，可產生亮綠色熒光，與抗酸桿菌相似，容易與之混淆，從而造成誤診。針對該類情況，筆者經驗為如果在低倍鏡下見形似抗酸桿菌，尤其是少量分布的形似抗酸桿菌，應調至高倍鏡，或者由經驗豐富的鏡檢人員確認。雖然金胺O熒光染色法有假陽性結果出現，但其特異性仍較高，與其他方法比較無明顯差異，充分體現出金胺O熒光染色法輔助診斷結核抗酸桿菌感染的顯著優勢。

綜合上述，臨床診斷結核抗酸桿菌感染采用金胺O熒光染色法輔助診斷可促進陽性率提高，具有較高的敏感性和特異性，值得推廣。