P16、Ki67、CK14細(xì)胞學(xué)檢測(cè)與HPV感染在宮頸上皮內(nèi)瘤變?cè)\斷中的意義

裴夢(mèng)然，鄭寰宇，趙秀蘭

（1.華北理工大學(xué)研究生院，河北 唐山 063000；2唐山市工人醫(yī)院婦二科，河北 唐山 063000）

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著女性健康，其發(fā)病率僅次于乳腺癌[1]。對(duì)于及時(shí)發(fā)現(xiàn)以及確認(rèn)宮頸癌，將其在發(fā)病初期給予最好的治療是目前減少宮頸癌危害的一個(gè)關(guān)鍵性問(wèn)題[2]。宮頸上皮內(nèi)瘤變作為宮頸癌前病變的主要疾病狀態(tài)，在宮頸癌的發(fā)生和進(jìn)展過(guò)程中具有重要的推動(dòng)作用。目前，我國(guó)宮頸癌篩查細(xì)胞學(xué)檢測(cè)敏感度較低、檢查結(jié)果受主觀影響大，HPV檢測(cè)敏感性高，但特異性較差，所以尋找新的標(biāo)志物便成為有效的分流手段。故本文對(duì)比研究TCT、HPV檢查與宮頸脫落細(xì)胞P16、Ki67、CK14檢測(cè)在宮頸上皮內(nèi)瘤變篩查中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年9月～2017年9月我院婦科門診行宮頸癌篩查患者，年齡22～76歲。為了確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的正確性以及合理性，將有宮頸、腫瘤、妊娠以及子宮手術(shù)的群體排除在外。并且所有接受調(diào)查的患者均有知情權(quán)，所有患者均分別行TCT與HR-HPV檢查。對(duì)陽(yáng)性結(jié)果或臨床癥狀高度可疑的患者行陰道鏡活檢，經(jīng)組織學(xué)病理診斷篩選宮頸上皮內(nèi)瘤變91例，將其分為3個(gè)實(shí)驗(yàn)組，宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ級(jí)34例；宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ級(jí)25例；宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級(jí)32例。另選取同期在我院因子宮良性病變行手術(shù)切除的非宮頸病變患者的子宮頸脫落細(xì)胞30例為對(duì)照組。

1.2 方法

1.2.1 TCT、HPV-NDA標(biāo)本采集及檢查方法

（1）TCT檢查。充分暴露宮頸，使用TCT細(xì)胞采集毛刷取樣器緩慢的深插入宮頸的通道內(nèi)，以確保前端采樣器可以完全采集到宮頸中老化脫落的上皮細(xì)胞，將采樣器沿著同一時(shí)針?lè)较虿蓸?～6周，在采樣過(guò)程中禁忌來(lái)回左右搖動(dòng)采樣器，然后將采集之后的刷頭采集器緩慢的推進(jìn)還有液基細(xì)胞夜的小瓶的低端。當(dāng)標(biāo)本采集完畢，使用離心法將其制作成薄片細(xì)胞涂片，病理科的醫(yī)師通過(guò)對(duì)細(xì)胞的分析研究，采取TBS分類的方法對(duì)其進(jìn)行分級(jí)。（2）HPV檢查。使用專項(xiàng)的采樣刷緩慢的進(jìn)入宮頸口，在其內(nèi)部輕旋轉(zhuǎn)3～6周，禁止使用不同向或者左右刷的方法，然后把采樣器放入特定的小瓶?jī)?nèi)進(jìn)行保存 。而后使用PCR技術(shù)檢測(cè)14種高危HPV，分別為HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，66，68。其中任意一種類型的HPV結(jié)果陽(yáng)性，即判定為HPV陽(yáng)性。

1.2.2 陰道鏡檢查

對(duì)TCT或（和）HPV呈陽(yáng)性的患者或臨床癥狀高度可疑的患者采取陰道鏡檢查的措施，通過(guò)陰道鏡下的觀察，將可能存在問(wèn)題的部位取活檢，而后通過(guò)活體檢查得出病例報(bào)告來(lái)進(jìn)一步確診。

1.3 評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

（1）P16存在于細(xì)胞核或者細(xì)胞質(zhì)之中，如果其呈現(xiàn)黃色或者棕黃色，可以斷定為陽(yáng)性，通過(guò)對(duì)其占比可以劃分為四種級(jí)別，當(dāng)其占據(jù)境內(nèi)細(xì)胞總數(shù)的0%～5%為（-）；5%～25%為（+）；26%～75%為（++）；＞75%為（+++）[3]。

（2）Ki67通常在細(xì)胞核內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，當(dāng)細(xì)胞核呈現(xiàn)棕黃色的時(shí)候，可判定其為陽(yáng)性，選擇具有代表性質(zhì)的1000個(gè)視野細(xì)胞，通過(guò)著色鱗狀上皮細(xì)胞占比可以評(píng)判一下幾個(gè)級(jí)別：＜5%（-）；5%-25%(+)；＞25%而≤50%(++)；＞ 50%(+++)[4]。

（3）CK14的陽(yáng)性表達(dá)部位為細(xì)胞質(zhì)。染色的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞細(xì)胞數(shù)＜5%為0分，6%～25%為1分，26% ～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；染色不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。評(píng)定結(jié)果由陽(yáng)性率和染色強(qiáng)度積分相加而得，1～2分計(jì)為“+”，3～4 分計(jì)為“++”，5 ～ 7 分計(jì)為“+++”[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（n）、百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用x2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 TCT及HR-HPV篩查結(jié)果

TCT檢查結(jié)果根據(jù)TBS分類法標(biāo)準(zhǔn)診斷：陰性 未見上皮內(nèi)細(xì)胞病變（NILM）51例；陽(yáng)性 意義不明的非典型鱗狀細(xì)胞（ASC-US）25例2.1%，低度鱗狀上皮內(nèi)瘤變（LSIL）9例0.9%，高度鱗狀上皮內(nèi)瘤變（HSIL）5例0.7%。陽(yáng)性篩查率為42.86%（39/91）。HR-HPV檢查，CIN1～3級(jí)各組間陽(yáng)性患者分別為29、24、30例，陽(yáng)性篩查率為91.21%；陰性患者分別為5、1、2例。

2.2 P16、Ki67、CK14在各組中表達(dá)結(jié)果

由表1可見，P16、Ki67、CK14在實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性表達(dá)率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。P16、Ki67、CK14在實(shí)驗(yàn)組各組中陽(yáng)性表達(dá)率組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 P16、Ki67、CK14聯(lián)合檢測(cè)在各組中表達(dá)結(jié)果

3 展 望

根據(jù)統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)每年我國(guó)因?qū)m頸癌而喪失的生命在呈現(xiàn)不斷上升的趨勢(shì)，這就需要我們不斷的去研究更高效的篩查方法。在CIN向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)變過(guò)程中，精確診斷對(duì)患者及時(shí)有效治療、阻斷向?qū)m頸癌發(fā)展進(jìn)程、改善療效等方便尤為重要。但目前關(guān)于CIN的診斷方法仍存在一定不足，缺少靈敏度、準(zhǔn)確度、特異度均較高的診斷指標(biāo)[6]。如若僅僅使用TCT檢查，并不能萬(wàn)全保證機(jī)體的正常，可能會(huì)有少部分假性的宮頸癌被忽略掉。HPV在檢測(cè)的敏感度比TCT高，但特異性較低，因而易增加假陽(yáng)性。因此將TCT和HPV聯(lián)合檢查可以有效提高CIN早期診斷的檢出率和準(zhǔn)確率。

本研究結(jié)果中P16在觀察組和對(duì)照組表達(dá)陽(yáng)性率有明顯差別，且在CIN患者的中病情越重陽(yáng)性表達(dá)率越高，因此推測(cè)P16表達(dá)情況與其病情嚴(yán)重程度存在正相關(guān)關(guān)系，可將其作為患者臨床分級(jí)的輔助指標(biāo)。 Ki67主要功能與細(xì)胞合成代謝有關(guān)，可以表示細(xì)胞的增殖活躍程度。本研究中，Ki67在觀察組中幾乎不表達(dá)，在CIN中陽(yáng)性表達(dá)率顯著升高，且隨病變級(jí)別升高表達(dá)增加，組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示Ki67表達(dá)與CIN患者病理分級(jí)存在正相關(guān)性。CK14廣泛存在于上皮組織細(xì)胞中，其通常被認(rèn)為與上皮源性腫瘤有著密切的關(guān)系，通過(guò)對(duì)機(jī)體的CK14細(xì)胞的測(cè)定研究分析，對(duì)今后人們認(rèn)識(shí)癌細(xì)胞的產(chǎn)生、發(fā)作、增值，以及對(duì)于腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散、治療、預(yù)防都有這非常重要的實(shí)用價(jià)值。

綜上所述，本研究所取標(biāo)本為患者宮頸脫落細(xì)胞，取材簡(jiǎn)單易行，為無(wú)創(chuàng)檢查。P16、Ki67、CK14作為生物學(xué)標(biāo)志物，幫助檢出真正的病變細(xì)胞，且不依賴于形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果，因此采用本方法具有對(duì)患者創(chuàng)傷小、恢復(fù)快、并且操作簡(jiǎn)單、效率較高等優(yōu)點(diǎn)，為今后早期的預(yù)防和發(fā)現(xiàn)宮頸癌體提供了一種新的方向。本方法還應(yīng)當(dāng)多應(yīng)用與臨床實(shí)踐，通過(guò)實(shí)際的操作將其所具有的優(yōu)點(diǎn)進(jìn)一步擴(kuò)大化，同時(shí)采用此方法可以避免因醫(yī)師的錯(cuò)誤診斷而使得患者遺失了最佳的治療時(shí)機(jī)，減少了治療過(guò)程中存在的的潛在威脅。

參考文獻(xiàn)

[1] Jemal A,Simard E P,Dorell C,et al.Annual Report to the Nation on the Status of Cancer,1975-2009,featuring the burden and trends in human papillomavirus(HPV)-associated cancers and HPV vaccination coverage levels.[J].Journal of the National Cancer Institute,2013,105(3)：175-201.

[2] Santesso N,Mustafa R A,Schünemann H J,et al.World Health Organization Guidelines for treatment of cervical intraepithelial neoplasia 2-3 and screen-and-treat strategies to prevent cervical cancer[J].International Journal of Gynecology & Obstetri cs,2015,132(3)：252-258.

[3] 李 萱,劉穎群,方兆武.P16、Ki67和cyclinD1在宮頸癌中的表達(dá)及TCT與HPV-DNA檢查在宮頸癌早期診斷中的研究[J].中國(guó)婦幼保健,2016,31(4)：829-831.

[4] 韓全貴,馬婷婷,馮小莉,等.宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查3251例結(jié)果分析[J].山西醫(yī)藥雜志,2013,42(11)：668-669.

[5] 肖艷景,張全武,婁 欣,等.CK10、CK14、CK17、P16在宮頸不成熟鱗狀化生及宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)[J].醫(yī)藥論壇雜志,2010(22)：132-134.

[6] 雷 明.P16、Ki67細(xì)胞學(xué)檢測(cè)在宮頸上皮內(nèi)瘤變分級(jí)診斷中的應(yīng)用[D].吉林大學(xué),2016.