免疫球蛋白含量的檢測與分離技術探討

王 娟,焦小杰

免疫球蛋白含量的檢測與分離技術探討

王 娟1,焦小杰2

目的 探討免疫球蛋白含量的檢測與分離技術。方法 選取武警北京總隊醫院2013-10至2016-10收集的90份免疫球蛋白異常血清，運用單擴法對血清IgG含量進行檢測，將90份血清分為3組，每組30份，分別運用單擴法、免疫散射比濁法、免疫透射比濁法對血清IgG、IgA、IgM含量進行檢測，然后對3種檢測方法測定IgG、IgA、IgM的異常情況、免疫球蛋白含量進行統計分析。結果 單擴法測定IgG、IgA、IgM的異常率分別為22.6%、12.4%、7.9%；免疫散射比濁法測定IgG、IgA、IgM的異常率分別為20.3%、14.0%、9.2%；免疫透射比濁法測定IgG、IgA、IgM的異常率分別為8.0%、1.5%、6.2%。單擴法、免疫透射比濁法測定IgG、IgA、IgM的異常率均顯著高于免疫透射比濁法(P<0.05)，但單擴法、免疫散射比濁法測定IgG、IgA、IgM的異常率之間的差異均無統計學意義；單擴法、免疫散射比濁法測定IgA、IgM含量均顯著高于免疫透射比濁法(P<0.05)，而免疫散射比濁法測定IgA、IgM含量又均顯著高于單擴法(P<0.05)，但3種檢測方法測定IgG含量之間的差異均無統計學意義。結論 單擴法、免疫透射比濁法測定免疫球蛋白含量效果較免疫透射比濁法好。

免疫球蛋白；含量；檢測與分離技術

免疫球蛋白(Ig)具有抗體活性，同時能夠結合相應的抗原發生特異性反應[1]。迄今為止，臨床共有5種免疫球蛋白，即IgG、IgA、IgM、IgD、IgE[2]。免疫球蛋白檢測，指將免疫球蛋白各個成分的含量檢測出來，在此過程中將一定的技術充分利用起來；免疫球蛋白分離，指將免疫球蛋白從血液中提取出來，在此過程中嚴格依據蛋白質的分子大小、免疫學特征等因素[3]。本研究探究免疫球蛋白含量的檢測與分離技術。

1 材料與方法

1.1 材料 選取武警北京總隊醫院2013-10至2016-10收集的90份免疫球蛋白異常血清，在-20 ℃的溫度下保存備檢。購買重慶醫學院試劑研究所提供的彩擴板(批號：20050709)、意大利ARCO公司生產的全自動生化分析儀(BT-2245型)、伊利康生物技術有限公司生產的免疫透射比做法試劑(批號：20050217)。

1.2 方法

1.2.1 檢測技術 將90份血清分為3組，每組30份，分別運用單擴法、免疫散射比濁法、免疫透射比濁法對血清IgG、IgA、IgM含量進行檢測。IgG、IgA、IgM的參考范圍分別為(12.87±1.35)g/L、(2.35±0.34)g/L、(1.08±0.24)g/L[4]。

1.2.2 分離技術 應用硫酸銨鹽試劑、進行鹽析法，應用乙醇試劑、進行有機溶劑沉淀法對免疫球蛋白進行分離。

2 結 果

2.1 IgG、IgA、IgM測定異常情況比較 單擴法、免疫透射比濁法測定IgG、IgA、IgM的異常率均顯著高于免疫透射比濁法(P<0.05)，但單擴法、免疫散射比濁法測定IgG、IgA、IgM的異常率之間的差異均無統計學意義。見表1。

表1 3種檢測方法測定IgG、IgA、IgM的異常率比較 (%)

2.2 免疫球蛋白測定含量比較 單擴法、免疫散射比濁法測定IgA、IgM含量均高于免疫透射比濁法(P<0.05)，而免疫散射比濁法測定IgA、IgM含量又均高于單擴法(P<0.05)，但3種檢測方法測定IgG含量之間的差異均無統計學意義，見表2。

表2 3種檢測方法測定免疫球蛋白含量比較 (g/L；±s)

3 討 論

臨床在診斷多種疾病、觀察期療效、評定其預后的過程中通常將免疫球蛋白的檢測作為重要指標，尤其是骨髓瘤患者，這是因為不同病因和病程發展患者的免疫球蛋白含量之間的差異均有統計學意義[5]。本研究表明，單擴法、免疫透射比濁法測定IgG、IgA、IgM的異常率均高于免疫透射比濁法，但單擴法、免疫散射比濁法測定IgG、IgA、IgM的異常率之間的差異均無統計學意義，說明在IgG、IgA、IgM的檢測中，免疫透射比濁法較單擴法、免疫散射比濁法值小。本研究還表明，單擴法、免疫散射比濁法測定IgA、IgM含量均顯著高于免疫透射比濁法，而免疫散射比濁法測定IgA、IgM含量又均顯著高于單擴法，但3種檢測方法測定IgG含量之間的差異均無統計學意義，說明在IgA、IgM的檢測中，免疫透射比濁法具有較大的誤差，發生這一現象的原因可能是：(1)可溶性復合物在抗原或抗體過剩的情況下出現，引發測量誤差；(2)血脂濃度對其造成了直接而深刻的影響，特別是脂蛋白的小顆粒在低稀釋的情況下會有濁度形成，進而提升測量假性[6-8]。

鹽析法進行的前提為將抗體和雜質對鹽濃度的敏感性的不同充分利用起來，將一定范圍的鹽溶液濃度選取出來，使一些雜質、抗體成分分別處于沉淀、溶解狀態[9]。鹽析常數、pH等很多因素均會對鹽析法的分離結果造成直接而深刻的影響，如果蛋白質具有較好的分離效果，那么通常情況下其就會具有極大的鹽析常數，同時具有顯著較大的鹽析范圍，而如果蛋白質具有較差的分離效果，那么通常情況下其就會具有極小的鹽析常數，同時具有顯著較小的鹽析范圍[10-12]。在蛋白質劑的生產過程中，有機溶劑沉淀法得到了極為廣泛的應用，乙醇是最常用的有機溶劑[13]?，F階段，在國際范圍內，在對免疫球蛋白進行提取的過程中，低溫乙醇Cohn6法是臨床通常采用的冷乙醇分離法，用來對IgG進行制備[14-16]。運用低溫乙醇法能夠分血清蛋白為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ六個組分，其中Ⅱ、Ⅲ組分中主要分布著免疫球蛋白IgG，Ⅴ組分中主要分布著白蛋白[17]。

總之，單擴法、免疫透射比濁法測定免疫球蛋白含量效果較免疫透射比濁法好，值得在臨床推廣。

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(2016-09-20收稿 2017-02-10修回)

(責任編輯 岳建華)

Detection of immunoglobulin contents and separation technology

WANG Juan1and JIAO Xiaojie2.

1.Department of Clinical Laboratory, Beijing Municipal Corps Hospital, Chinese People’s Armed Police Force, Beijing 100027, China;2.Department of Clinical Laboratory, General Hospital of Chinese People’s Armed Police Force, Beijing 100039, China

Objective To explore the detection methods of contents of immunoglobulin and separation technology.Methods Ninety cases of abnormal serum immunoglobulin treated in our hospital between October 2013 and October 2016 were collected and their serum samples were equally divided into three groups. The contents of IgG, IgA and IgM were detected by the immunodiffusion method, immune nephelometry method, and immune turbidimetric method respectively, while the abnormalities of IgG, IgA, IgM, and the content of immuneglobulin determined with the three detection methods were statistically analyzed.Results The abnormal rates of IgG, IgA and IgM by immunodiffusion method were 22.6%, 12.4% and 7.9% respectively, those by immune nephelometry method were 20.3%, 14% and 9.2% respectively, and those by immune turbidimetric method were 8%, 1.5% and 6.2% respectively.The abnormal rates of IgG, IgA and IgM detected by the single diffusion method and immune turbidimetric method were significantly higher than those by the immune turbidimetric method (P<0.05), but the difference of the abnormal rates of IgG, IgA and IgM between the single expansion method and immunoturbidimetry determination was not significant. The IgA, IgM contents detected by the single expansion method and immune turbidimetric method were significantly higher than those by the immune turbidimetric method (P<0.05), and the IgA and IgM contents detected by the immune nephelometry method were significantly higher than those by the single expansion method (P<0.05), but the difference of IgG contents between the three detection methods was not significant.Conclusions The effect of single expansion method and immune transmission turbidity method is better than that of immune transmission turbidity method.

immunoglobulin; content; detection and separation technology

王 娟,本科學歷,技師。

1.100027，武警北京總隊醫院檢驗科；2.100039 北京，武警總醫院檢驗科

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