腎小球內IgA沉積量對 IgA腎病患者系膜病變的影響研究

葉林峰 陳孝倩 李凡凡 黃朝興

●臨床研究

腎小球內IgA沉積量對 IgA腎病患者系膜病變的影響研究

葉林峰 陳孝倩 李凡凡 黃朝興

目的 探討腎小球內IgA沉積量與IgA腎?。↖gAN）系膜病變的關系。方法 將70例原發性IgAN患者根據系膜細胞增生情況分為無系膜細胞增生（M0）組和有系膜細胞增生（M1）組各35例，兩組患者的腎活檢組織切片行免疫組織化學IgA染色，采用圖像分析軟件定量分析腎小球內IgA沉積物面積（Area）、平均光密度（Density mean）、累計光密度（IOD）和IgA沉積面積占腎小球面積比值（Per Area），并比較兩組患者的臨床參數。結果 兩組患者性別、年齡、血肌酐、估算的腎小球濾過率、血尿酸、血IgA、血C3、血C4水平及低eGFR、高尿酸血癥、高血IgA、低血C3、低血C4、伴有腎小球內皮細胞增生和節段性硬化的發生率比較差異均無統計學意義（均P＞0.05）。與M0組相比，M1組患者24h尿蛋白定量較高而血白蛋白水平較低，低白蛋白血癥和伴有腎小管間質病變的發生率較高（均P＜0.05）。M1組患者IgA沉積物Area、Density mean、Per Area和IOD均高于M0組（均P＜0.05）。結論IgAN患者系膜病變的嚴重程度可能受腎小球內IgA沉積量的影響。

IgA腎病 IgA沉積 系膜病變

IgA腎?。↖gAN）是以系膜區IgA沉積為主的免疫復合物（IC）性腎炎。已知，腎小球內IC沉積量是影響IC性腎炎臨床病理表現的變量之一，如上皮IC沉積量可影響膜性腎病的基底膜病變，內皮下IC沉積量可影響狼瘡性腎炎（LN）內皮細胞增生病變，內皮下IC累及腎小球數量的多與少分別可引起LN-Ⅳ和LN-Ⅲ的不同病理亞型。然而系膜IC沉積量是否與IgAN病變有關目前尚不明確。鑒于系膜增生是IgAN最基本的病變，本研究通過對IgAN患者腎活檢組織IgA沉積免疫組織化學檢查，采用圖像分析軟件分析，探討腎小球內IgA沉積量與IgAN系膜病變的關系。

1 對象和方法

1.1 對象 將2014年6月至2016年12月本院腎臟病理室中70例原發性IgAN患者根據IgAN牛津病理分型[1]標準評估系膜細胞增生情況，分為無系膜細胞增生（M0）組和有系膜細胞增生（M1）組各35例。兩組患者均排除繼發性IgA沉積腎病的病因，如過敏性紫癜、肝硬化、系統性紅斑狼瘡等。

1.2 方法

1.2.1 臨床參數的判斷標準 （1）估算的腎小球濾過率（eGFR）:根據MDRD公式[2]進行計算，低eGFR是指eGFR＜60ml·min-1·1.73m-2；（2）高尿酸血癥：血漿尿酸男性＞428μmol/L，女性＞357μmol/L；（3）高血清IgA：血清IgA＞4.53g/L；（4）低白蛋白血癥：血漿白蛋白＜30g/ L；（5）低血C3：血清C3＜0.79g/L；（6）低血C4：血清C4＜0.16g/L；（7）按IgAN牛津病理分型[1]標準判斷有無腎小球系膜細胞增生（M1、M0）、內皮細胞增生（E1、E0）、節段性硬化（S1、S0）和小管間質病變（T2、T1、T0）。

1.2.2 腎活檢 患者均經皮腎穿刺取得腎組織，石蠟包埋組織切片厚度2～3μm，常規HE、PAS、PASM和Masson染色，剩余的空白片行免疫組織化學IgA染色。冷凍切片厚度4～5μm，常規采用直接免疫熒光法檢測IgA、IgG、IgM、C3、C4和C1q，間接免疫熒光法檢測HBsAg和HBcAg；部分切片行電鏡檢查。

1.2.3 免疫組織化學染色及其主要試劑 免疫組織化學IgA染色試劑盒（KIT-3033）購自福州邁新生物技術開發有限公司；參照試劑盒操作步驟進行免疫組織化學IgA染色。取IgAN腎組織切片，以0.01mol/L PBS（pH 7.4）代替第一抗體作為IgA染色陽性的陰性對照；取腎良性腫瘤患者全腎切除術后大體標本，再取距離腫瘤5cm外的正常腎組織作為IgA染色的正常陰性對照。

1.3 圖像分析處理方法 免疫組織化學染色圖片是采用顯微鏡數碼相機（×400）每例拍攝5個非球性硬化的正切腎小球。應用ImagePro Plus（Media Cybernetics）對圖像進行定量分析，分別讀取IgA沉積物面積（Area）、平均光密度（Density mean）、累計光密度（IOD）、IgA沉積面積占腎小球面積比值（Per Area），每例計算平均值納入統計。參數意義：（1）Area：腎小球內IgA陽性表達面積；（2）Density mean：視野內所有選定對象的平均反應強度；（3）IOD：整個視野內所有選定對象的反應強度的總和；（4）Per Area：腎小球內IgA陽性表達所占面積與腎小球面積的比值。

1.4 統計學處理 應用SPSS21.0統計軟件；計量資料以表示，兩組比較采用兩獨立樣本t檢驗；計數資料以頻數和構成比表示，兩組比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法。

2 結果

2.1 IgAN腎組織IgA免疫組織化學染色結果 見圖1。

圖1 I g A N腎組織免疫組織化學染色結果（a：I g A N腎組織；b：圖像分析軟件選中圖a的效果；c：I g A N腎組織陰性對照；d：正常腎組織陰性對照；I g A染色，×4 0 0）

由圖1可見，IgAN腎組織免疫組織化學染色可見IgA彌漫性系膜區顆粒狀或團塊狀沉積，部分伴毛細血管袢沉積；陰性對照未見腎小球內IgA沉積。

2.2 兩組患者臨床參數比較 見表1。

由表1可見，兩組患者性別、年齡、血肌酐、eGFR、血尿酸、血IgA、血C3、血C4水平及低eGFR、高尿酸血癥、高血IgA、低血C3、低血C4、伴有E1和S1的發生率比較差異均無統計學意義（均P＞0.05）。與M0組相比，M1組患者24h尿蛋白定量較高而血白蛋白水平較低，低白蛋白血癥和伴有腎小管間質病變（T1或T2）的發生率較高，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。

2.3 兩組患者IgA沉積物Area、Density mean、Per Area和IOD比較 見圖2。

由圖2可見，M1組患者IgA沉積物Area、Density果顯示，腎小球內IgA Area和IOD在不同硬化分級中的組間比較差異均有統計學意義。本研究結果顯示，M1組患者IgA沉積物Area、Density mean、Per Area和IOD均高于M0組。其中Density mean是反映IgA沉積物的染色強度，考慮到個體差異不能單純以Area作為沉積量的判斷依據，但IOD和Per Area綜合考量了IgA沉積量和腎小球面積，能夠說明腎小球內沉積物面積的大小，提示IgAN系膜病變的嚴重程度可能受腎小球內I－gA沉積量的影響。腎小球內IgA沉積可能是局部清除與沉積之間平衡的結果。筆者推測，系膜IC的沉積到病變發生可能存在一個從量變到質變的演變過程。在較多數量IC沉積的系膜區，有可能超過局部的清除能力，即“閾值”，更容易觸發炎癥反應。

表1 兩組患者臨床參數比較

圖2 兩組患者I g A沉積物A r e a、D e n s i t y m e a n、P e r A r e a和I O D比較

長期以來，免疫病理學因素對IgAN病變的影響未受到足夠重視，如現行用來判斷IgAN進展和預后的牛津病理分型并沒有包括免疫病理學指標。本研究結果提mean、Per Area和IOD均高于M0組（均P＜0.05）。

3 討論

IgAN患者腎組織臨床病理表現變異性大，免疫熒光法檢查可見不同患者系膜IgA沉積物大小上存在明顯差異。Konstantinos等[3]采用3D重建技術研究19例IgAN患者，發現不同的患者腎小球內IC沉積物的總表面區域值差異較大。這提示臨床應考慮腎小球內IC沉積量對IgAN病變的影響作用。

早期的個別研究未能證實腎小球內IC沉積物的數量與IgAN預后的關系[4]。但是，有研究報道系膜IC沉積物數量與IgAN患者血尿和特發性系膜增生性腎炎蛋白尿發生有關，且系膜IC沉積物的表面積（或密度）與腎組織CD68陽性細胞浸潤呈正相關，或與腎小球內單核/巨噬細胞浸潤呈正相關[5-6]。而另有報道稱浸潤腎臟的巨噬細胞表達MRP8可以影響兒童IgAN患者腎小球硬化進展[7]。郭文煥等[8]對80例IgAN腎組織按腎小球節段硬化和球性硬化程度分級，采用圖像分析結示，IgAN患者系膜病變的嚴重程度可能受腎小球內IgA沉積量的影響，未來在研究影響IgAN進展和預后的指標時，可能還應考慮納入免疫病理學指標。

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Correlation of quantity of glomerular IgA deposition with severity of mesangial lesions in IgA nephropathy

YE Linfeng,CHEN

Xiaoqian,LI Fanfan,et al.Department of Nephrology,the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou 325000，China

Objective To investigate the correlation between the quantity of IgA deposition in glomerulus and the severity of mesangial lesions in IgA nephropathy. Methods Seventy patients with primary IgA nephropathy(IgAN)were enrolled in the study,including 35 cases with mesangial lesions(group M1)and 35 cases without mesangial lesions(group M0).IgA was detected with immunohistochemical staining in renal tissue and analyzed with the ImagePro Plus(IPP)computer image analysis software.The IgA deposition parameters included the area of deposition(Area),density of deposition(Density mean),integral optical density of the deposition(IOD)and the ratio of IgA deposition area to the glomerular area(Per area).The IgA deposition parameters and clinical parameters were compared between two groups. Results There were no significant differences in gender,age,serum creatinine,uric acid,IgA,complement C3 and complement C4 levels,estimated glomerular filtration rate,and the incidence of low estimated glomerular filtration rate,hyperuricemia,high serum IgA level,low serum complement C3 and C4 levels between two groups.The proportion of patients of segmental sclerosis(S1)and glomerular endothelial cell hyperplasia(E1) in two groups also had no differences(P＞0.05).Compared with group M0,group M1 had higher levels of 24-h urinary protein, and lower levels of serum albumin.Group M1 also had higher proportion of hypoalbuminemia and higher proportion of tubular atrophy or interstitial fibrosis(≥T1)(P＜0.05).The Area,Density mean,IOD and Per area levels in group M1were higher than those in group M0(P＜0.05). Conclusion The severity of the IgAN mesangial lesions is correlated with the quantity of glomerular IgA deposition in patients with IgA nephropathy.

IgA nephropathy Quantity of IgA deposition in glomerulus Mesangial lesions

2 0 1 6-0 9-1 2）

（本文編輯：李媚）

10.12056/j.issn.1006- 2785.2017.39.8.2016- 1408

325000溫州醫科大學附屬第一醫院腎內科

黃朝興，E- m ail：huangzhaoxing@ m edm ail.com .cn