2004—2014年尿標本分離糞腸球菌和屎腸球菌藥物敏感性變遷

徐 丹, 李 耘, 朱賽楠, 鄭 波

(北京大學第一醫(yī)院，北京 100034)

·論著·

2004—2014年尿標本分離糞腸球菌和屎腸球菌藥物敏感性變遷

徐 丹, 李 耘, 朱賽楠, 鄭 波

(北京大學第一醫(yī)院，北京 100034)

目的 了解臨床尿標本分離糞腸球菌和屎腸球菌藥物敏感性狀況及變遷，為臨床抗感染治療提供實驗室依據。方法 分析2004—2014年全國20所三級醫(yī)院患者尿標本分離的糞腸球菌和屎腸球菌的藥物敏感性，采用聚合酶鏈反應(PCR)檢測萬古霉素耐藥腸球菌(VRE)的耐藥基因。結果 2004—2014年共分離菌株788株，其中糞腸球菌371株，屎腸球菌417株。糞腸球菌對氨芐西林、呋喃妥因、磷霉素、萬古霉素和替考拉寧的敏感率均>90%，對利福平、米諾環(huán)素和紅霉素的敏感率均<20%，2011年7月—2012年6月與2009年7月—2010年6月糞腸球菌對磷霉素敏感率比較，差異有統計學意義(P<0.0167)。屎腸球菌對萬古霉素和替考拉寧的敏感率分別為96.9%和97.4%，對呋喃妥因、米諾環(huán)素和磷霉素的敏感率分別為41.7%、51.8%和78.2%，對氨芐西林、左氧氟沙星、利福平和紅霉素的敏感率均<10%；屎腸球菌對呋喃妥因敏感率不同年份有降低趨勢(任兩組比較均P<0.0167)，2011年7月—2012年6月、2013年7月—2014年6月磷霉素敏感率較2009年7月—2010年6月有所降低(均P<0.0167)，其他藥物不同年份藥敏情況無顯著變化。14株VRE均攜帶vanA耐藥基因。結論 尿標本分離的糞腸球菌對氨芐西林、呋喃妥因和磷霉素均較敏感，屎腸球菌對大部分抗菌藥物敏感性相對較差；糞腸球菌和屎腸球菌對萬古霉素和替考拉寧相對敏感，僅少數菌株耐藥。

尿標本； 糞腸球菌； 屎腸球菌； 耐藥性； 抗藥性，微生物； 抗菌藥物； 合理用藥

[Chin J Infect Control，2017，16(4)：322-325]

尿路感染是臨床最常見的細菌感染性疾病之一，在引起尿路感染的致病菌中，糞腸球菌和屎腸球菌僅次于大腸埃希菌[1-3]。由于腸球菌對頭孢菌素類、低濃度氨基糖苷類和磺胺類抗菌藥物天然耐藥，臨床可供選擇的抗菌藥物有限，給臨床抗感染治療帶來較大困難。近年來，萬古霉素耐藥腸球菌(vancomycin-resistantEnterococcus, VRE)的增多，尤其是萬古霉素耐藥屎腸球菌的增多，使得腸球菌引起的尿路感染抗感染治療面臨嚴峻挑戰(zhàn)。張玉等[4]研究顯示，尿路感染是VRE醫(yī)院感染最常見的感染。既往研究主要來自于分散的醫(yī)療機構，且缺少跨年份耐藥狀況變遷的分析比較。本研究分析2004—2014年來自全國20所三級醫(yī)院的糞腸球菌和屎腸球菌藥物敏感性變化情況，為腸球菌尿路感染臨床抗感染治療提供參考依據。

1 對象與方法

1.1 菌株來源 臨床菌株和質控菌株糞腸球菌ATCC 29212均由北京大學臨床藥理研究所提供。臨床菌株來源于2004—2014年全國20所醫(yī)院患者尿標本分離的糞腸球菌(371株)和屎腸球菌(417株)，排除同一患者分離的相同菌株。

1.2 藥敏試驗 采用標準瓊脂二倍稀釋法測定抗菌藥物最低抑菌濃度(minimum inhibitory concentration，MIC)。腸球菌培養(yǎng)及藥敏分析采用M-H培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為35 ℃孵育16～20 h(萬古霉素藥敏測定時間為24 h)。抗菌藥物測定濃度范圍0.002～256 mg/L，細菌對各種抗菌藥物的敏感、中介和耐藥判定均按照美國臨床實驗室標準化協會(CLSI)2016年標準[5]。氨芐西林、紅霉素和呋喃妥因均為中國藥品生物制品檢定所產品，米諾環(huán)素和利福平為美國Sigma公司產品，左氧氟沙星為第一三共制藥(上海)有限公司產品，萬古霉素為美國禮來公司產品，替考拉寧為賽諾菲-安萬特公司產品，磷霉素為山西仟源制藥有限公司產品。

1.3 耐藥基因檢測 參照文獻[6]報道的方法，采用聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)檢測萬古霉素或替考拉寧耐藥菌株vanA、vanB、vanC1、vanC2、vanC3耐藥基因。

1.4 統計分析 應用SPSS 14.0軟件進行統計學分析，計數資料以百分比表示，組間差異使用卡方檢驗或Fisher’s精確概率法進行比較，各組間總體比較有統計學意義時再進一步做任意兩組間比較。所有的檢驗均采用雙側檢驗，各組間總體比較的檢驗水準定為0.05，任兩組進行比較時，采用Bonferroni法調整檢驗水準=0.05/檢驗次數。

2 結 果

2.1 糞腸球菌對抗菌藥物敏感性 糞腸球菌對氨芐西林、呋喃妥因、磷霉素、萬古霉素和替考拉寧的總體敏感率均>90.0%，對左氧氟沙星的敏感率為60.6%，對利福平、米諾環(huán)素和紅霉素的敏感率均<20%。糞腸球菌對紅霉素、磷霉素的敏感率總體比較，差異有統計學意義(均P<0.05)，但紅霉素任意兩組比較差異無統計學意義(任兩組比較檢驗水準調整為0.05/10=0.005,組間比較未達到統計學意義標準)；2011年7月—2012年6月與2009年7月—2010年6月糞腸球菌對磷霉素敏感率比較，差異有統計學意義(P<0.0167，磷霉素各年度兩兩比較，檢驗水準調整為0.05/3=0.0167)；其他藥物不同年份敏感率比較，差異無統計學意義。見表1。

表1 2004—2014年全國20所三級醫(yī)院糞腸球菌的體外藥敏結果

-：未檢測；a： 呋喃妥因和磷霉素檢測菌株為284株；*：采用Fisher’s精確概率法進行各時間段結果的比較，其他采用卡方檢驗

2.2 屎腸球菌對抗菌藥物敏感性 屎腸球菌對萬古霉素和替考拉寧的敏感率分別為96.9%和97.4%，對呋喃妥因、米諾環(huán)素和磷霉素的敏感率分別為41.7%、51.8%和78.2%，對氨芐西林、左氧氟沙星、利福平和紅霉素的敏感率均<10%。呋喃妥因敏感率不同年份有降低趨勢(任兩組比較均P<0.0167，檢驗水準調整為0.05/3=0.0167)，2011年7月—2012年6月、2013年7月—2014年6月磷霉素敏感率較2009年7月—2010年6月有所降低(均P<0.0167)，其他藥物不同年份的敏感率比較，差異無統計學意義。見表2。

表2 2004—2014年全國20所三級醫(yī)院屎腸球菌的體外藥敏結果

-：未檢測；a:呋喃妥因和磷霉素檢測菌株為331株;*:采用Fisher’s精確概率法進行各時間段結果的比較，其他采用卡方檢驗；左氧氟沙星敏感率總體比較差異有統計學意義，但任兩組比較檢驗水準調整為0.05/10=0.005,組間比較未達到統計學意義標準

2.3 腸球菌萬古霉素耐藥基因型結果 藥敏結果顯示，共有14株VRE，其中包括1株萬古霉素耐藥糞腸球菌和13株萬古霉素耐藥屎腸球菌。PCR耐藥基因檢測結果顯示,14株VRE均攜帶vanA耐藥基因。

3 討 論

糞腸球菌和屎腸球菌是引起尿路感染的重要病原菌。耐藥監(jiān)測[1-3]結果顯示，糞腸球菌和屎腸球菌在男性和女性引起尿路感染的病原菌中分別占第2和第3位。李湘燕等[7]研究顯示，留置導尿管患者更容易出現腸球菌尿路感染，留置導尿管尿路感染患者尿標本中腸球菌的分離率為34.9%，遠高于無留置導尿管尿路感染患者的分離率(17.3%) 。由于腸球菌對頭孢菌素、磺胺類、低濃度氨基糖苷類和克林霉素等抗菌藥物天然耐藥，可供臨床選擇的抗菌藥物有限，為臨床抗感染治療帶來了很大困難。

糞腸球菌對氨芐西林、呋喃妥因、磷霉素和萬古霉素的敏感率均>90%，但是口服呋喃妥因和磷霉素氨丁三醇時血藥濃度低，因此這兩種口服藥物僅適用于糞腸球菌所致的下尿路感染[8-10]。此外，由于磷霉素氨丁三醇和呋喃妥因對引起尿路感染最常見的大腸埃希菌具有很好的抗菌活性，且為妊娠B類藥物，是孕婦下尿路感染時經驗性治療的首選藥物[11-13]。氨芐西林和萬古霉素靜脈用藥能保證足夠的血藥濃度和尿藥濃度，因此，可以用于治療糞腸球菌感染引起的腎盂腎炎。糞腸球菌對左氧氟沙星的敏感率>60%，且左氧氟沙星在尿液中具有很高的藥物濃度[14-15]，可以根據藥敏結果選擇此類藥物治療糞腸球菌引起的尿路感染。

屎腸球菌對氨芐西林、左氧氟沙星、利福平和紅霉素的敏感率<10%，不適合用于經驗性治療屎腸球菌尿路感染。屎腸球菌對呋喃妥因、米諾環(huán)素和磷霉素的敏感率<80%，可以根據藥敏結果的指導選擇以上抗菌藥物；由于上述三種藥物的血藥濃度低，不適合用于治療屎腸球菌感染所致的腎盂腎炎。

萬古霉素和替考拉寧是糞腸球菌和屎腸球菌最敏感的抗菌藥物，但近年來我國VRE也在逐漸增多，主要由vanA耐藥基因介導[16]，臨床上應加強尿標本分離腸球菌對糖肽類藥物的耐藥性分析及耐藥基因檢測。

本組結果顯示, 不同年份糞腸球菌和屎腸球菌對大部分抗菌藥物的敏感性比較，差異無統計學意義，可能與樣本量不足有一定關系，可以擴大樣本量進一步研究。

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(本文編輯：孟秀娟)

Change in antimicrobial susceptibility ofEnterococcusfaecalisandEnterococcusfaeciumisolated from urine in 2004-2014

XUDan,LIYun,ZHUSai-nan,ZHENGBo

(PekingUniversityFirstHospital,Beijing100034,China)

Objective To investigate the change in antimicrobial susceptibility ofEnterococcusfaecalis(E.faecalis) andEnterococcusfaecium(E.faecium) isolated from clinical urine specimens, so as to provide laboratory evidence for clinical anti-infective treatment.Methods Antimicrobial susceptibility ofE.faecalisandE.faeciumisolated from urine specimens from 20 tertiary hosptials in China between 2004 and 2014 were analyzed, drug-resistant genes of vancomycin-resistantEnterococcus(VRE)were detected with polymerase chain reaction (PCR).Results A total of 788Enterococcusstrains were isolated in 2004-2014, 371 strains wereE.faecalisstrains, 417 wereE.faeciumstrains. Susceptibility rates ofE.faecalisto ampicillin, nitrofurantoin, fosfomycin, vancomycin, and teicoplanin were all>90%, susceptibility rates to rifampin, minocycline, and erythromycin were all<20%, there was significant difference in the susceptibility rate ofE.faecalisto fosfomycin betwen July 2011-June 2012 and July 2009-June 2010(P<0.0167). Susceptibility rates ofE.faeciumto vancomycin and teicoplanin were 96.9% and 97.4% respectively, susceptibility rates to nitrofurantoin, minocycline, and fosfomycin were 41.7%, 51.8%, and 78.2% respectively, susceptibility rates to ampicillin, levofloxacin, rifampicin, and erythromycin were all<10%; susceptibility rates ofE.faeciumto nitrofurantoin had decreased tendency in different years (any two group comparison, allP<0.0167), susceptibility rates to fosfomycin in July 2011-June 2012 and July 2013-June 2014 both decreased compared with July 2009-June 2010(bothP<0.0167)，there were no significant changes in antimicrobial usceptibility rates in different years. 14 strains of VRE all carriedvanA resistance gene.ConclusionE.faecalisstrains isolated from urine are susceptible to ampicillin, nitrofurantoin, and fosfomycin,E.faeciumare not susceptible to most antimicrobial agents;E.faecalisandE.faeciumare both susceptible to vancomycin and teicoplanin, only a few strains are resistant to antimicrobial agents.

urine specimen;Enterococcusfaecalis;Enterococcusfaecium; drug resistance, microbial; antimicrobial agent; rational antimicrobial use

2017-01-09

國家自然科學基金(81171612)；首都臨床特色應用研究與推廣項目 (Z161100000516040)

徐丹(1988-)，女(漢族)，湖北省荊門市人，碩士研究生，主要從事細菌耐藥機制研究。

鄭波 E-mail:doctorzhengbo@163.com

10.3969/j.issn.1671-9638.2017.04.008

R969.3

A

1671-9638(2017)04-0322-04