枯草芽孢桿菌SCK6超級感受態的制備和轉化條件優化

李信志，盧爭輝，周玉玲，李世宇，張桂敏

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枯草芽孢桿菌SCK6超級感受態的制備和轉化條件優化

李信志，盧爭輝，周玉玲，李世宇，張桂敏

湖北大學生命科學學院生物資源綠色轉化湖北省協同創新中心，湖北武漢 430062

枯草芽孢桿菌是一種革蘭氏陽性好氧細菌，因其安全性和高分泌特性，已被廣泛用作異源蛋白的表達宿主。然而，相比大腸桿菌，枯草芽孢桿菌的轉化效率低，限制了其作為宿主的異源蛋白的定向進化。本文通過改變培養基、誘導劑濃度、質粒類型等參數優化感受態制備的條件，利用常規質粒進行轉化，結果表明，用營養豐富的YN培養基替代常規LB培養基制備感受態，可以使轉化效率提高4倍左右；加入1.5%的木糖誘導2 h，感受態的轉化效率又提高2倍左右；用大腸桿菌GM272來源的質粒又可進一步提高轉化效率3倍左右。綜合最優條件制備SCK6的感受態，轉化整合型質粒pDG1730，效率可以達到106CFU/μg，相對未優化的條件提高了2個數量級，為基于枯草芽孢桿菌的酶的定向進化和代謝工程奠定了基礎。

枯草芽孢桿菌，基因，木糖，感受態，pDG1730

枯草芽孢桿菌是一種廣泛分布嗜溫、好氧并產芽孢的革蘭氏陽性桿狀細菌，已被美國食品藥品管理局(FDA) 認定為GRAS (Generally recognized as safe) 菌株。枯草芽孢桿菌具有很強的抗逆性，并能分泌大量酶類和產生抗菌物質，因此，一方面作為活菌劑被廣泛應用在飼料、生防、環保等領域，另一方面作為表達系統在外源蛋白和代謝產物的生產中發揮重要作用[1]。

與我們常用的大腸桿菌表達系統相比，枯草芽孢桿菌表達系統具有以下的優勢：1) 它具有很強的分泌表達能力，能將表達的外源蛋白直接分泌到細胞外，避免了破菌的程序，簡化了蛋白純化的步驟，有利于下游操作；……