黏細菌漆酶序列篩選及其重組酶酶學性質

趙秀艷，常飛，方澤民，張寅良，肖亞中

?

黏細菌漆酶序列篩選及其重組酶酶學性質

趙秀艷1,2，常飛1,2，方澤民1,2，張寅良1,2，肖亞中1,2

1 安徽大學生命科學學院，安徽合肥 230601 2 安徽省微生物與生物催化工程技術研究中心，安徽合肥 230601

漆酶是一種應用廣泛的綠色環保的多酚氧化酶。漆酶過去被認為廣泛存在于植物、昆蟲和真菌中，而近年來，越來越多的細菌中也發現了漆酶的存在。黏細菌是一類重要的資源菌，但與一般細菌相比，較難分離和純化。文中利用生物信息學的方法，綜合應用Blast和隱馬爾可夫模型方法對黏細菌蛋白質組數據庫進行搜索，并根據多銅氧化酶的保守銅離子結合位點進行進一步篩選，獲得30個候選黏細菌漆酶序列。挑選其中9個，在大腸桿菌中進行重組表達。利用2,6-甲氧基苯酚 (DMP) 等常用漆酶底物檢測重組酶的催化氧化活性，其中7個重組蛋白具有漆酶催化活性。選擇1個對2,6-甲氧基苯酚 (DMP) 具有較高氧化活性的重組酶 (命名為rSC-2)，通過Ni-NTA親和層析柱純化rSC-2，測試其酶學性質。純化的rSC-2蛋白分子量約57 kDa，在最適反應條件下，rSC-2催化DMP反應的比酶活為0.27 U/mg。催化DMP反應的最適溫度為60 ℃，最適pH為7.0。rSC-2在pH 7.0?8.0有較高酶活，在60 ℃孵育1 h保留50%以上剩余酶活。低濃度的Ca2+對酶活有一定的促進作用，而較高濃度的Fe3+、Co2+、Ba2+對酶活的抑制作用較明顯。這是首次對黏細菌漆酶序列進行系統性的生物信息學分析，并實現纖維堆囊菌序列來源的漆酶活性蛋白在大腸桿菌細胞中重組表達。

生物信息學，黏細菌漆……