胃癌組織中IL-33的表達變化及意義

夏兵祥，李凡，王軒，袁振華，鄭蘇文，張業偉 (南京醫科大學附屬腫瘤醫院，南京 210009)

胃癌組織中IL-33的表達變化及意義

夏兵祥，李凡，王軒，袁振華，鄭蘇文，張業偉
(南京醫科大學附屬腫瘤醫院，南京 210009)

目的 探討 IL-33在胃癌組織中的表達變化及其意義。方法 選擇98例胃癌患者的癌組織、癌旁組織。患者中，早期胃癌16例，進展期胃癌82例；淋巴結轉移76例、無淋巴結轉移22例；另取同期36例健康體檢者胃組織標本作為對照。應用免疫組化SP法和Real-time PCR法檢測胃癌組織和正常胃組織中IL-33及其mRNA的表達情況,分析其與患者臨床病理特征的關系，采用Kaplan-Meier法繪制IL-33表達陽性與陰性患者生存曲線，比較其中位生存時間。結果 胃癌組織中IL-33表達陽性率高于正常胃組織(P均<0.05)。早期胃癌以及淋巴結轉移陰性胃癌組織與正常胃組織IL-33表達陽性率比較，P均>0.05，而進展期胃癌以及有淋巴結轉移胃癌組織與正常胃組織比較，P均<0.05。胃癌組織中IL-33 mRNA相對表達量高于正常胃組織(P<0.05)；有無淋巴結轉移胃癌組織相比，P<0.05。IL-33表達與胃癌患者性別、年齡、腫瘤生長部位及腫瘤大小無關(P均>0.05)，但與腫瘤分化程度、組織浸潤程度、淋巴結轉移、遠處轉移以及臨床分期有關(P均<0.05)。IL-33表達陰性患者中位生存時間為30.6個月，IL-33表達陽性患者中位生存時間為22.7個月，兩者比較，P=0.001。結論 胃癌組織中IL-33水平升高，其可能參與了胃癌的發生發展，并提示預后不良。

胃腫瘤；白細胞介素33；淋巴結轉移；預后

胃癌是消化道最常見的惡性腫瘤，居人類腫瘤相關致死率第2位[1]。其最主要死亡原因是腫瘤轉移和復發，其中，最常見的轉移途徑為淋巴結轉移。臨床上有超過80%的進展期胃癌患者出現淋巴結轉移。有研究證明，淋巴結轉移是胃癌患者預后不良的獨立危險因素[2]，但至今為止關于腫瘤淋巴結轉移的機制尚不明確。IL-33是近年發現的具有多種生物學功能的細胞因子，可通過豬同線蛋白2/細胞外信號調節激酶(ST2-ERK1/2)通路促進胃癌細胞侵襲和轉移[3]。2012年1月～2014年12月，本研究檢測了IL-33在胃癌組織中的表達，并探討了其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集接受手術治療的98例胃癌患者手術切除標本，標本經病理學證實為胃癌。術前未接受任何放、化療等治療手段。納入標準：初診經病理診斷為胃癌患者；入院一般情況良好，行D2淋巴結清掃的胃切除術患者;術后輔助SOX方案化療6～8個療程。排除標準：合并嚴重心腦血管疾病；有合并多種腫瘤病史；外科手術前接受放療、化療、靶向藥物治療等其他治療手段；研究者認為影響預后、評估以及難以完成臨床觀察的其他嚴重疾病或殘疾者。患者男50例、女48例，年齡42～86歲、中位年齡60.8歲；腫瘤直徑1～10 cm、中位直徑4.6 cm。根據WHO(2010年)胃癌組織學分類標準[4]，管狀腺癌(高、中分化)35例，低分化腺癌40例，黏液腺癌14例，印戒細胞癌9例。根據UICC胃癌TNM分期標準[5]，Ⅰ期20例，Ⅱ期27例，Ⅲ期38例，Ⅳ期13例；早期胃癌16例，進展期胃癌82例；淋巴結轉移76例，遠處轉移11例。另取同期36例健康體檢者胃組織標本為對照組。男20例、女16例，年齡35～60歲。兩組年齡、性別有可比性。

1.2 胃癌組織中IL-33表達陽性率的檢測 采用免疫組化SP法。標本均經10%甲醛固定24 h，行常規石蠟包埋，連續切取4 μm厚切片。具體步驟按說明書進行。兔抗人IL-33多克隆抗體及S-P試劑盒均購自Dako公司。每批染色過程中均設PBS代替一抗的陰性對照組。以胞質呈清晰的棕黃色顆粒且其染色強度高于背景非特異染色者為陽性細胞，由兩位經驗豐富的病理科醫生在相同條件下觀察，并計數500個細胞中的陽性細胞數，以百分率表示。無陽性反應細胞或陽性反應細胞數<10%者為陰性，陽性反應細胞數≥10%者為陽性。

1.3 胃癌組織中IL-33 mRNA相對表達量的檢測 采用Real-time PCR法。RNA提取試劑盒提取胃癌組織RNA，紫外分光光度儀檢測其純度，電泳檢測其完整性。然后使用逆轉錄試劑盒把RNA逆轉錄為cDNA，擴增試劑盒擴增cDNA。Real-time PCR試劑盒購自上海生物工程技術服務有限公司。各基因引物序列分別為： IL-33上游引物5′-GACTCCTCCGAACACAGAGC-3′，下游引物5′-CCCAGCTTGAAACACAAGGC-3′，產物長度159 bp；β-actin上游引物5′-GAGCACAGAGCCTCGCCTTT-3′，下游引物5′-GGTGAGCTGCGAGAATAGCC-3′，產物長度129 bp。PCR反應條件：95 ℃預變性2 min，95 ℃ 、45 s，60 ℃、30 s，75 ℃、30 s，循環40次，72 ℃、5 min終止反應。采用2-ΔΔCT法計算相對基因表達量[5]。

1.4 隨訪 以門診、電話、短信、家訪等方式獲得90例胃癌患者隨訪資料，失訪8例。隨訪資料包括患者生存時間、有無病情進展及惡化、有無肝轉移等。

2 結果

2.1 胃癌組織及正常胃組織中IL-33表達比較 光鏡下正常胃黏膜上皮胞質中IL-33染色很弱或陰性。胃癌組織細胞內IL-33呈彌漫性或簇狀分布的棕黃色顆粒，瘤間質中有時可見IL-33呈簇狀的淺棕色染色。低分化腺癌中IL-33染色程度較高、中分化腺癌略深。正常胃組織、胃癌組織中IL-33表達陽性率分別為47.22%(17/36)、67.35%(66/98)，正常胃組織中IL-33表達陽性率低于胃癌組織(P=0.012)；其中早期胃癌和進展期胃癌組織中IL-33表達陽性率分別為52.00%(13/25)、72.60%(53/73)，淋巴結轉移陰性胃癌和淋巴結轉移陽性胃癌組織中IL-33表達陽性率分別為54.55%(12/22)、71.05(54/76)，二者比較，P分別為0.015、0.044；早期胃癌以及淋巴結轉移陰性胃癌組織與正常胃組織比較，P分別為0.910、0.792，而進展期胃癌以及淋巴結轉移陽性胃癌組織與正常胃組織比較，P分別為0.004、0.008。正常胃組織中IL-33 mRNA相對表達量為2.19±0.044，無淋巴結轉移胃癌組織中IL-33 mRNA相對表達量為2.98±0.072，較正常胃組織升高了36.07%(P=0.006)；有淋巴結轉移胃癌組織中IL-33 mRNA相對表達量為3.88±0.031，較正常胃組織升高了77.17%(P=0.044)；淋巴結轉移者和未轉移者相比，P=0.025。

2.2 胃癌組織 IL-33表達與患者臨床病理參數的關系 見表1。

表1 胃癌組織IL-33表達與患者臨床病理參數的關系

2.3 IL-33表達與胃癌患者生存率的關系 本研究98例胃癌患者，90例獲得隨訪資料。其中36例患者至2015年12月仍存活(截尾資料)，54例患者在隨訪期內死亡(完整資料)，平均隨訪19.2個月(3～36月)。 IL-33陽性組術后中位生存期為22.7個月；IL-33陰性組術后中位生存期為30.6個月，兩組比較，P=0.001 (見圖1)。

3 討論

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤，近年來，隨著醫療水平的逐步提高，胃癌的治療取得重大進展，但是由于胃癌早期診斷率不高，大多數患者發現時已屬中晚期，失去手術機會，治療效果不令人滿意[6]，已經構成我國病死率最高的一個惡性腫瘤。腫瘤轉移和復發是患者死亡的主要原因，也是胃癌治療中的最大障礙，其中以淋巴結轉移途徑最常見。一般認為有淋巴結轉移的術后5年生存率為11.3%～22%，無淋巴結轉移者為36.4%～75%，兩者相差約3倍[7]。腫瘤轉移是一個復雜的、多步驟的、腫瘤細胞與宿主細胞相互作用的連續性選擇過程，基本包括以下幾個方面[8]：①原發腫瘤生長和增大，腫瘤新生血管生成；②攜帶轉移表型的細胞亞群脫離原發病灶位置，侵犯鄰近組織；③腫瘤細胞穿透基底膜進入脈管；④腫瘤細胞逃避機體的免疫監視，在血液循環中形成癌栓，隨著血液流動到遠離原發病灶的臟器，黏附在血管內皮上；⑤腫瘤細胞再次穿透血管基底膜進入組織實質；⑥腫瘤細胞在靶器官中生長、增殖并形成轉移病灶。其中，腫瘤新生血管增生是腫瘤細胞增殖的最重要因素。

圖1 IL-33表達陽性與表達陰性的胃癌患者生存曲線

IL-33是IL-1家族新成員[9]，由270個氨基酸組成，相對分子質量為30 kD，具有抑制和(或)促進炎性反應的雙重生理效應[10，11]，在炎癥、腫瘤等多種疾病中發揮重要的調控作用[12，13]。近年研究結果表明，體內IL-33及其受體ST2表達水平的變化對胃癌、肝癌、肺癌以及卵巢癌患者的病情進展、診斷及預后具有重要的參考價值[14～17]。IL-33能誘導內皮細胞增生、遷移和組織分化，從而促進新生血管生成[18]；并且與上皮細胞浸潤密切相關，參與腫瘤的發生和發展[19]。研究表明，IL-33可通過ST2-ERK1/2信號通路促進胃癌細胞侵襲和轉移，作為胃癌診斷和治療的有效標志物。

本研究結果顯示，與正常胃組織相比，在胃癌組織中IL-33表達陽性率顯著升高，而且其升高程度在進展期胃癌、淋巴結轉移胃癌、UICC分期Ⅲ～Ⅳ期以及低分化胃癌和有遠處轉移的胃癌患者中更為明顯，而與患者的性別、年齡、腫瘤部位以及腫瘤大小無關。IL-33表達陽性患者生存率明顯低于IL-33表達陰性患者。提示IL-33表達升高可能與胃癌的淋巴結轉移和惡性進展相關，可作為胃癌預后不良的標志。

IL-33是最近發現的IL-1家族細胞因子，關于其與腫瘤性疾病的研究才剛起步，因此進一步研究IL-33與胃癌侵襲轉移的關系，揭示其在胃癌侵襲轉移過程中的作用機制，有助于了解其生物學行為，為胃癌的靶向治療提供潛在的作用靶點，同時也為胃癌的早期診斷和預后判斷提供可靠的標志物。

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Expression of IL-33 in gastric carcinoma and its significance

XIABingxiang,LIFan,WANGXuan,YUANZhenhua,ZHENGSuwen,ZHANGYewei

(TumorHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity,Nanjing210009,China)

Objective To investigate the expression of IL-33 in gastric carcinoma tissues and its significance. Methods Cancer tissues and adjacent tissues of 98 patients with gastric cancer were selected, among whom, there were 16 cases with early gastric cancer, 82 cases with advanced gastric cancer, 76 cases with lymph node metastasis and 22 cases without lymph node metastasis. Meanwhile, we selected 36 cases of normal gastric tissues from healthy people as the control group. Immunohistochemical S-P method and real-time PCR were applied to detect the expression of IL-33 and its mRNA in gastric carcinoma tissues as well as in normal gastric tissues. We analyzed the relationship between the expression of IL-33 and clinicopathological features of gastric carcinoma tissues. Survival curves between IL-33 expression positive and negative patients were made using the Kaplan Meier method, and the median survival time was compared. Results The positive rate of IL-33 expression in gastric cancer tissues was higher than that in normal gastric tissues (P<0.05). No significant difference was found in the positive rate of IL-33 expression between in early gastric cancer and lymph node metastasis-negative gastric cancer tissues and in the normal gastric tissues (allP>0.05), while significant difference was found between in advanced gastric cancer and lymph node metastasis-positive gastric cancer tissues and in the normal gastric tissues (allP<0.05). The relative expression of IL-33 mRNA in gastric cancer tissues was higher than that in the normal gastric tissues (P<0.05). After the comparison of those between gastric cancer tissues with and without lymph node metastasis, significant difference was found (P<0.05). The expression of IL-33 was not related with gender, age, tumor growth and tumor size (allP>0.05), but it was correlated with tumor differentiation, tissue infiltration, lymph node metastasis, distant metastasis and clinical stage (allP<0.05). The median survival time was 30.6 months in IL-33 negative patients and 22.7 months in patients with positive IL-33 expression,P=0.001. Conclusion The increment on the level of IL-33 in gastric cancer tissues indicates that IL-33 may be involved in the occurrence and development of gastric cancer and predict poor prognosis.

stomach neoplasms; interleukin-33; lymph node metastasis; prognosis

國家自然科學基金面上項目(61371066)；江蘇省醫學重點人才資助項目( RC2011090)；江蘇省重點研發計劃(社會發展)(BE2015720);江蘇省六大高峰人才項目(WSW-041)。

夏兵祥(1988-)，男，在讀碩士研究生，主要從事普外腫瘤基礎與臨床研究。E-mail:1065424827@qq.com

張業偉(1976-)，男，教授，主任醫師，主要從事肝膽胰腫瘤的基礎與臨床研究。E-mail: zhangyewei@njmu.edu.cn

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.13.002

R735.2

A

1002-266X(2017)13-0005-04

2016-04-03)