高效液相色譜法研究瘤胃甲烷菌共存對厭氧真菌代謝產生有機酸特性的影響

李袁飛 孫美洲 成艷芬 朱偉云

(江蘇省消化道營養與動物健康重點實驗室，南京農業大學消化道微生物實驗室，南京210095)

高效液相色譜法研究瘤胃甲烷菌共存對厭氧真菌代謝產生有機酸特性的影響

李袁飛 孫美洲 成艷芬*朱偉云

(江蘇省消化道營養與動物健康重點實驗室，南京農業大學消化道微生物實驗室，南京210095)

本試驗旨在利用建立的高效液相色譜法研究瘤胃甲烷菌共存對厭氧真菌代謝產有機酸特性的影響。根據6種有機酸的化學特性確定紫外檢測波長、緩沖液濃度、pH、流速、柱溫和進樣量等液相色譜條件；利用建立的高效液相色譜法檢測厭氧真菌純培養及厭氧真菌與甲烷菌共培養上清液中6種有機酸的含量。結果表明，高效液相色譜采用的條件為：5 mmol/L磷酸二氫鉀-磷酸緩沖液(pH=2.4)作為流動相，流速為0.5 mL/min，柱溫25 ℃，進樣量為20 μL，214 nm波長檢測。6種有機酸能夠在30 min內得到良好分離。各種有機酸的線性相關系數均大于0.999，檢測限為0.20～1.00 μmol/L，定量限為0.667～3.333 μmol/L，回收率為92.17%～101.61%。甲烷菌共存影響了厭氧真菌的代謝產物。厭氧真菌利用葡萄糖的主要水溶性代謝產物為甲酸、乳酸、乙酸，以及微量琥珀酸、檸檬酸、α-酮戊二酸及乙醇；甲烷菌共存顯著降低了上清液中甲酸和乳酸的含量(P<0.05)，顯著增加了乙酸含量(P<0.05)。綜上，本試驗利用建立的高效液相色譜法可快捷、靈敏、有效地檢測厭氧真菌代謝葡萄糖產生的6種有機酸的含量，并發現甲烷菌共存顯著促進了厭氧真菌氫化酶體對碳水化合物的代謝。

高效液相色譜法；有機酸；厭氧真菌；甲烷菌；共培養

厭氧真菌是瘤胃內最先定殖到植物纖維組織上的微生物之一[1]。它們借助強大的假根系統和分泌的一系列木質纖維素降解酶對植物纖維進行高效地降解。……