激素治療對重癥肌無力患者B細胞激活的抑制作用研究

張海軍

河南安陽市人民醫院神經內科 安陽 455000

激素治療對重癥肌無力患者B細胞激活的抑制作用研究

張海軍

河南安陽市人民醫院神經內科 安陽 455000

目的 探討激素治療重癥肌無力患者的臨床效果并分析其對B細胞激活的抑制作用。方法 抽選2014-01—2015-02在我院接受救治的重癥肌無力患者40例為觀察組，以同期前來體檢的健康對象40例為對照組，2組均于入院時給予B細胞檢測，其中AchR、CD21兩項雙陽性B細胞使用流式細胞儀檢測，CD21mRAN檢測則使用熒光定量PCR法檢測，對比患者檢測結果差異。觀察組給予激素治療，對比治療前后B細胞檢測結果差異。結果 觀察組治療前雙陽性B細胞、CD21mRNA檢測結果均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。觀察組有效36例，無效4例。治療有效者雙陽性B細胞表達水平為(2.81±0.66)%、CD21mRNA檢測結果為(0.182±0.072)，治療無效者分別為(5.11±1.02)%、(0.281±0.102)，差異均有統計學意義(P<0.05)。觀察組治療后所有患者的雙陽性B細胞、CD21mRNA檢測結果均低于治療前，差異有統計學意義(P<0.05)。結論 AchR及CD21兩項雙陽性B細胞、CD21mRNA的表達隨重癥肌無力患者病情發展而不斷升高，也隨患者的治療進行而不斷下降，可見其在重癥肌無力患者的病情發展、治療、預后中均有重要的指導作用。

激素治療；重癥肌無力；健康對象；B細胞檢測

重癥肌無力是當前臨床較為常見的一種免疫性疾病類型，患者表現出明顯的神經與肌肉接頭處的傳遞功能障礙，臨床癥狀則表現為局部或全身性的骨骼肌無力、疲勞癥狀，對患者身體健康及生活質量均造成嚴重影響[1]。臨床免疫學研究結果顯示[2]，重癥肌無力患者的發病原因及病情發展均與其自身多項免疫系統及亞群的相互作用密切相關，而B淋巴細胞則與人體免疫機制存在重要聯系。本研究探討激素治療重癥肌無力的臨床效果及其對重癥肌無力患者B細胞激活的抑制作用，現報告如下。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 抽選2014-01—2015-02在我院接受救治的重癥肌無力患者40例為觀察組，均給予疲勞試驗、電生理檢查并結合患者臨床癥狀表現確診[3]。以同期前來體檢的健康對象40例為對照組。觀察組男20例，女20例；年齡20～60(40.5±7.4)歲，病程2～6(3.8±1.1)a。對照組男21例，女19例；年齡20～60(38.8±7.7)歲。2組臨床資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本次研究經過我院倫理委員會批準，患者簽署知情同意書。排除標準[4]：(1)有嚴重心臟、肝臟、腎臟等嚴重臟器功能障礙；(2)有慢性感染、惡性腫瘤及自身免疫系統障礙疾?。?3)入組前3個月前有激素使用史或免疫抑制劑使用史。

1．2 研究方法 觀察組均給予激素治療，甲基潑尼松龍1 000 mg/d靜滴，持續3 d后調整劑量為500 mg/d，再次持續3 d后調整劑量至80 mg/d并持續3 d。而后給予潑尼松口服治療60 mg/d，持續30 d，期間根據患者實際癥狀變化每周遞減用藥劑量直至停藥。針對觀察組治療前的AchR與CD21兩種雙陽性B細胞的水平，對比雙陽性B細胞水平與CD21mRNA水平治療前后差異。檢測方法：使用美國RD公司生產的二抗流式抗體試劑盒(負責患者FITC、PE、APC等指標)、美國santa cruz公司生產的抗體試劑盒(負責患者AchR、CD19、CD21等指標)、聯科生物科技有限公司生產的淋巴細胞分離液、美國Promega公司生產的M-MLV逆轉錄酶及緩沖系統、美國B-D公司生產的流式細胞儀等完成檢測。AchR、CD21檢測使用流式細胞儀進行，患者治療結束后于清晨空腹狀態下抽取靜脈血4～6 mL，使用密度梯度離心分離法完成血液樣本淋巴細胞的分離，同時將事先準備好的Ficoll分層液1 500 g置入血液樣本中，持續20 min后吸除單個核細胞層，同時將細胞濃度調整至1×104/mL。依照試劑說明書分別加入AchR、CD19、CD21抗體后將其避光保存，染色持續30 min后再分別加入FITC、PE、APC標記的二抗并再次避光保存，染色持續30 min。最終使用FL1、FL3雙通道完成對患者血液樣本中AchR、CD21雙陽性B細胞表達的檢測；CD21 mRNA檢測使用熒光定量PCR法，取單個核細胞1 mL，持續離心10 min后置入1 mL的Trizol試劑，依照試劑盒說明書提取總RNA，經M-mLV逆轉錄酶反轉露出cDNA的第一條鏈，使用熒光定量PCR法測定CD21 mRNA。對照組僅給予抽血檢測，檢測指標、方法同觀察組。

1．3 觀察指標 使用美國重癥肌無力協會制定的癥狀評定標準測定患者癥狀變化并判定治療效果[5]：有效：治療后癥狀積分相較治療前改善程度≥2.6分；無效：未達到上述標準。

2 結果

2．1 2組治療前后檢測結果對比 觀察組治療前雙陽性B細胞表達水平、CD21mRNA檢測結果均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，治療后低于治療前，差異有統計學意義(P<0.05)。與對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2．2 觀察組治療效果 有效36例，無效4例。治療有效者雙陽性B細胞表達水平為(2.81±0.66)%、CD21mRNA檢測結果為(0.182±0.072)；治療無效者平均雙陽性B細胞表達水平為(5.11±1.02)%，CD21mRNA檢測結果為(0.281±0.102)，治療有效與治療無效者兩項指標比較均差異有統計學意義(P<0.05)。

表1 2組治療前后檢測結果對比 (±s)

3 討論

重癥肌無力是一種由患者體內乙酰膽堿受體抗體介導、細胞免疫依賴、補體參與且病情主要集中在患者神經與肌肉接頭處突觸后膜乙酰膽堿受體的獲得性、自身性免疫性疾病類型[7]。研究顯示[8]，我國范圍內重癥肌無力患者的病發率約為7.4/10萬人。同時有關研究顯示[9]，重癥肌無力患者的病發原因與其自身輔助性Th1細胞、Th2細胞之間的平衡失衡有密切關系，其中Th1細胞在人體中的主要作用為參與到細胞介導的免疫反應中，具有分泌包括干擾素y、白細胞介素-2、腫瘤壞死因子-α等促炎性因子的作用；而Th2細胞在人體中的主要作用為參與到IL-4、IL-6、IL-10等人體分泌抗炎因子的過程中，能有效促進人體免疫反應進程，起到誘導人體免疫耐受、免疫細胞失衡的作用。上述兩種細胞在重癥肌無力患者的病發過程中占非常重要的作用。重癥肌無力作為一種自身免疫性疾病，也是一種由于人體自體免疫細胞、免疫分子等攻擊神經系統為主要病理機制的免疫性疾病類型，主要發生在神經-肌肉接頭處并最終導致神經-肌肉接頭處出現病理癥狀的改變。此類免疫性疾病病情復雜，了解患者體內免疫機制的變化對預防、治療均有重要意義。

激素治療是目前臨床重癥肌無力的主要治療方法之一，但同時隨著用藥劑量的不斷增加，患者耐藥性增高的同時也伴隨有多項不良反應出現，對患者預后、生活質量等均造成不良影響[10]。B細胞也被稱為B淋巴細胞，能夠在抗原的刺激下分化為漿細胞并轉變成為免疫球蛋白等抗體類型，在人體體液免疫過程中占主導地位。B細胞作為人體中抗體的主要產生細胞之一，對B細胞的特異性激活是重癥肌無力發病機制的關鍵。CD21是產生于B細胞膜上的一種因子，可與C3d、C3dg、iC3b等補體進行充分結合而促使B細胞激活并產生特異性抗體，對反映人體B細胞的激活程度有重要作用。本研究結果顯示，觀察組治療前AchR及CD21雙陽性B細胞、CD21mRNA檢測結果均高于對照組(P<0.05)，說明重癥肌無力患者體內B細胞存在過度激活現象。推測可能是由于重癥肌無力患者體內的CD21mRNA在基因調控的作用下不斷升高，最終導致CD21受體含量增加并抑制患者體內B細胞正常凋亡進程，反而促使患者體內B細胞不斷激活并含量增加，最終導致重癥肌無力病發。本文觀察組治療有效36例，無效4例，治療有效者的AchR及CD21雙陽性B細胞、CD21mRNA檢測結果與治療無效者對比存在顯著性差異，也再次證明了B細胞在重癥肌無力發病中的重要作用，以及激素治療能有效抑制重癥肌無力患者B細胞過度激活的功能。

綜上所述，AchR及CD21兩項雙陽性B細胞、CD21mRNA的表達隨重癥肌無力患者的病情發展而不斷升高，也根據患者的治療進行而不斷下降，可見其在重癥肌無力患者的病情發展、治療、預后中均有重要的指導作用。

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(收稿2016-09-20 修回2017-02-24)

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1673-5110(2017)08-0057-03