蒙醫針刺對卒中后抑郁模型大鼠的影響

李學勇 烏 蘭 姚哈斯 苗 美

1)北京中醫藥大學 北京 100029 2)內蒙古國際蒙醫醫院 內蒙古呼和浩特 010065

蒙醫針刺對卒中后抑郁模型大鼠的影響

李學勇1，2)烏 蘭2)姚哈斯2)苗 美2)

1)北京中醫藥大學 北京 100029 2)內蒙古國際蒙醫醫院 內蒙古呼和浩特 010065

目的 觀察蒙醫針刺對卒中后抑郁(PSD)模型大鼠的影響。方法 把24只SD雄性大鼠隨機分為假手術組、模型組、針刺組、西藥組，自由飼養。應用栓線法形成局灶性腦缺血再灌注損傷后實施慢性溫和性應激刺激結合孤養14 d，建立PSD模型。模型成立后治療14 d。酶聯免疫法(ELISA)檢測大鼠海馬組織的5-HT、NE、DA含量和血清IL-2、IL-6、TNF-α表達。結果 治療后，與假手術組比較，模型組大鼠海馬組織的5-HT、NE、DA含量顯著降低(P<0.01，P<0.05)；血清IL-2、IL-6和TNF-α表達水平顯著增高(P<0.01)。與模型組大鼠比較，針刺組和西藥組大鼠海馬組織5-HT、NE、DA含量顯著增加(P<0.01，P<0.05)；血清IL-2、IL-6和TNF-α表達水平顯著降低(P<0.01，P<0.05)。針刺組與西藥組無顯著性差異(P>0.05)。結論 蒙醫針刺可明顯增加腦組織的單胺遞質含量，調節血清細胞因子水平，說明蒙醫針刺治療卒中后抑郁癥有一定的抗抑郁作用。

蒙醫針刺；卒中后抑郁癥；單胺遞質；細胞因子

腦卒中后抑郁(post-stroke depression，PSD)是指發生于腦卒中后的一種繼發性抑郁癥，發生率為31.67%～46.0%[1-2]。PSD的發病機制尚未明確，目前還是假說階段。該病不僅對患者認知功能產生損害[3]，且會增加病死率[4]。最新研究[5]表明，抑郁癥病因復雜，單胺遞質假說是PSD發病機制的重要假說之一。抑郁癥主要是由于中樞單胺類神經遞質如5-羥色胺(5-HT)、去甲腎上腺素(NE)含量下降或功能不足所致，因此增加中樞單胺類遞質水平則可以逆轉抑郁障礙[6]。血清細胞因子表達水平與PSD病情嚴重程度存在明顯相關性[7]。研究證實[8]，非器質性抑郁癥患者血清細胞因子(IL-1、IL-2、IL-6、TNF-α)表達水平明顯升高，因此抑郁癥的發病機制中上述血清細胞因子發揮著重要作用。臨床發現，蒙醫針刺可明顯改善抑郁狀態，提高卒中后抑郁患者生活質量。本課題組在以往的研究基礎上做動物實驗，觀察海馬組織5-HT、NE、DA含量以及血清細胞因子(IL-2、IL-6、TNF-α)的表達變化，并初步探討蒙醫針刺對腦卒中后抑郁癥的可能作用機制。

1 材料與方法

1．1 實驗動物及分組 選取體質量接近的24只SPF級的雄性SD大鼠，體質量(280±20)g，由北京市海淀區興隆實驗動物養殖廠提供，許可證號：SCXK-(軍)2012-0004。實驗室溫度24～26 ℃，相對濕度55%～60%。自由飲水進食，定期更換墊料。做手術前自由飼養7 d后隨機分為假手術組、針刺組、模型組、西藥組各6只。

1．2 儀器及試劑盒 動物手術顯微器械(上海金粒醫療器械股份有限公司)；CV-2000型高頻電凝刀(北京康威電子技術有限公司)；5-羥色胺試劑盒、多巴胺試劑盒、去甲腎上腺素試劑盒、白介素-2試劑盒、白介素-6試劑盒、腫瘤壞死因子-a(TNF-α)試劑盒(均武漢華美生物工程有限公司提供)；鹽酸氟西汀分散片(PATHEON FRANCE，法國，國藥準字J20120001，20 mg/片)；生理鹽水(山東科倫制藥有限公司，國藥準字H37022918)。

1．3 模型制備 所有大鼠術前12 h禁食、不禁水后用改良Longa法[9]復制大腦中動脈閉塞90 min后再灌注模型。假手術組大鼠無栓線插入，不給予應激和孤養。模型成功標準[10]：大鼠蘇醒后出現前肢彎曲、肩內旋、以對側上肢為重的癱瘓，前進時向手術對側轉圈，并伴有同側Horner征陽性。剔除未成功的大鼠。自由飲水攝食7 d后，除假手術組外其他各組疊加給予孤養結合慢性不可預知的溫和應激法制備PSD模型。參照文獻[11]并改進：每日行晝夜顛倒(08：00開始保持安靜的暗室，20：00之后保持光持光照)、傾斜鼠籠45° 24 h、潮濕墊料(200 mL水至墊料中)24 h、24 h禁食水、夾尾3 min、水平振蕩40 min、束縛2 h等刺激中的一種，共14 d。

1．4 治療方法 針灸組大鼠參照《實驗針灸學》和《蒙醫療術學》，選取“頂會”、“額葉組”穴，以13 mm毫針均斜刺0.2 mm左右，每次留針15～20 min，1次/d。西藥組用蒸餾水配成氟西汀懸浮液，按4.06 mg·kg-1給藥，1次/d。模型組經胃灌注蒸餾水。假手術組不做任何干預。共14 d干預。

1．5 取樣品及檢測 腹腔注射麻醉藥，大鼠完全麻醉后開腹，從腹主動脈取血，待凝血后3 000 r·min-1離心15 min，取上清液快速冷凍。取血后斷頭快速取海馬組織后置于速凍管，液氮快速冷凍并放入-80℃冰箱保存待測。采用ELISA檢測技術，按試劑盒說明的操作程序檢測海馬組織5-HT、NE、DA和血清IL-2、IL-6、TNF-α含量。

2 結果

2．1 各組大鼠海馬組織5-HT、NE、DA的含量變化比較 與假手術組比較，模型組大鼠海馬組織5-HT、NE、DA的含量顯著降低(P<0.01或P<0.05)。與模型組比較，針刺組和西藥組大鼠海馬組織5-HT、NE、DA的含量增加顯著(P<0.01或P<0.05)。針刺組和西藥組間無顯著差異(P>0.05)見表1。

2．2 各組大鼠血清IL-2、IL-6和TNF-α表達變化比較 與假手術組比較，模型組大鼠血清IL-2、IL-6和TNF-α含量顯著增加(P<0.01)。與模型組比較，針刺組和西藥組大鼠血清IL-2、IL-6和TNF-α含量明顯降低(P<0.01或P<0.05)。針刺組和西藥組之間無顯著差異(P>0.05)。見表2。

表1 各組大鼠海馬組織5-HT、NE、DA結果比較 (±s)

注：與假手術組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較#P<0.05，##P<0.01

表2 各組大鼠血清IL-2、IL-6和TNF-α分析結果比較 (±s)

注：與假手術組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01

3 討論

腦卒中后抑郁癥的發病機制十分復雜。“抑郁癥的細胞因子假說”為探討抑郁癥的機制和治療抑郁癥提供了一個新的視角，越來越多證據表明，細胞因子和抑郁癥的發生存在密切聯系[12]。Wang等[13]研究表明，注射細胞因子誘導劑的小鼠出現了體質量下降、糖水消耗減少等抑郁樣行為，抗抑郁藥治療后癥狀明顯好轉。近年來國外大量研究[14-16]表明，抑郁癥與先天免疫激活和系統性炎癥有關，抑郁癥存在多種細胞因子尤其是IL-2、IL-6和TNF-α介導的免疫功能紊亂。陳帥等[17]研究發現，IL-6可激活星形細胞和小神經膠質細胞，與抑郁癥密切相關。最新研究[18]表明，抑郁癥的發生與大腦單胺遞質系統的異常釋放和免疫功能異常有關。5-HT、NE、DA為最常見的單胺類神經遞質，這些單胺類神經遞質共同參與睡眠、攝食、體溫、情緒、精神、記憶等多種生理功能的調節，5-HT、NE、DA水平降低及其受體功能下降是抑郁癥發生發展的基礎[19]。因此，細胞因子水平紊亂可能影響神經遞質的代謝和免疫功能的異常而導致抑郁癥的發生。

本研究中利用卒中后抑郁動物模型，觀察大鼠海馬組織5-HT、NE、DA含量和血清IL-2、IL-6、TNF-α表達。結果顯示，與假手術組比較，模型組大鼠海馬組織5-HT、NE、DA含量明顯降低；血清IL-2、IL-6和TNF-α表達水平明顯增高。與模型組比較，針刺組和西藥組大鼠海馬組織5-HT、NE、DA含量明顯增加；血清IL-2、IL-6和TNF-α表達水平明顯降低。針刺組和西藥組間無顯著差異。從上述結果可以得出如下結論，蒙醫針刺治療法具有明顯抗抑郁作用，其作用機制可能與細胞因子的表達和神經遞質調節有關。

[1] 王晉芳，邰迎東．腦卒中后抑郁發病相關因素分析及抗抑郁治療[J]．中西醫結合心腦血管病雜志，2012， 10(5)：564-565．

[2] 肖韓艷，張本卓，袁春華．腦卒中后抑郁854例臨床分析及其相關因素的研究[J]．牡丹江醫學院學報，2011， 32(4)：32-35．

[3] Austin M，Mitchell P，Goodwin G．Gognitive deficits in depression：possible implications for functional neuropathology[J]．Br J Psychiatry，2001(178)：200-206．

[4] 欒軍祥，張向榮，張志．卒中后抑郁的發生率及其相關因素的前瞻性研究[J]．中國卒中雜志，2010，5(1)：16-22．

[5] 劉春林，阮克鋒，高君偉，等．抑郁癥的多機制發病[J]．生理科學進展，2013，44(4)：253-258．

[6] 余玲玲，劉儒鵬，高昕妍，等．針灸治療抑郁癥的神經生物化學機制研究進展[J]．針刺研究，2011，36(5)；383-387．

[7] 史福平，楊觀濤，馮慧玲，等．血清細胞因子與腦卒中后抑郁的相關性研究[J]．現代預防醫學，2013，40(4)：796-798．

[8] 朱玉萍，趙曉輝，楊娟，等．腦卒中后不同時段抑郁障礙患者血清IL-1、IL-6變化特點[J]．卒中與神經疾病，2013，20(2)：87-90，112．

[9] Longa EZ，Weinstein，PR，Carlson S，et al．Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J]．Stroke，1989，20(1)：84-91．

[10] 梁昊，徐瑾瑜，張秋雁，等．丹龍醒腦方對腦缺血再灌注大鼠神經功能和腦梗死面積的影[J]．湖南中醫雜志，2015，31(10)：147-149．

[11] 代沐華，李德強，韓陽．文拉法辛對卒中后抑郁大鼠學習記憶及海馬腦源性神經營養因子的影響[J]．浙江大學學報醫學版2011，40(5)：527-534．

[12] 馮驍，高志濤．細胞因子誘導抑郁癥的發病機制[J]．醫學綜述，2011，17(21)：3 234-3 236．

[13] Wang Y，Lawson MA，Dantzer R，et al．LPS -induced indoleamine 2，3-dioxygenase is regulated in an interferon-γ-independent manner by a JNK signaling pathway in primary murine microglia[J]．Brain Behav Immun，2010，24(2)：201-209．

[14] Dowlati Y，Herrmann N，Swardfager W，et al．A meta-analysis of cytokines in major depression[J]．Biological Psychiatry，2010，67(5)：446-457．

[15] 王愛禎，唐茂芹，曹昱，等．舍曲林對抑郁癥患者血清細胞因子及C反應蛋白水平的影響[J]．中華行為醫學與腦科學雜志，2011，20(7)：222-223．

[16] 趙素華，孔潔華，楊嬋娟，等．度洛西汀對首發抑郁癥患者血清細胞因子水平的影響[J]．中華行為醫學與腦科學雜志，2012，21(2)：158-160．

[17] 陳帥，馬玉璐，劉素芳．首發抑郁癥患者西酞普蘭治療前后血清IL-2、IL-6、及TNF-α水平變化的研究[J]．臨床研究．2016，14(2)：55-56．

[18] 曲萬仁，付建國．文拉法辛對抑郁癥患者神經遞質及細胞因子表達的影響[J]．中國實用神經疾病雜志，2016，19(4)：29-30．

[19] 周傳義，路義榮，王帆．文拉法辛聯合認知行為治療帕金森病抑郁的療效及安全性分析[J]．中國實用神經疾病雜志，2014，17(17)：34-35．

(收稿2016-09-28 修回2017-03-02)

國家自然科學基金資助項目，編號：81360577

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R-332

A

1673-5110(2017)08-0033-03