二甲雙胍對快速老化模型SAMP8小鼠體重及血液學參數的影響

田 楓 , 張 穎 ， 李文婷 ， 周淑佩

(北京大學醫學部實驗動物科學部，北京海淀100191)

二甲雙胍對快速老化模型SAMP8小鼠體重及血液學參數的影響

田 楓 , 張 穎 ， 李文婷 ， 周淑佩

(北京大學醫學部實驗動物科學部，北京海淀100191)

為探討二甲雙胍對SAMP8小鼠體重及血液學參數的影響，將40只雄性SAMP8小鼠分為二甲雙胍低劑量(50 mg/kg體重)、中劑量(100 mg/kg體重)、高劑量(200 mg/kg體重)實驗組及空白對照組，實驗組每日按小鼠體重灌胃不同劑量的二甲雙胍，空白對照組每日灌胃生理鹽水，觀察小鼠的體重及血液細胞學和血清生化指標。結果顯示，3個實驗組與空白對照組相比，僅低劑量組和中劑量組小鼠AST 較空白對照組顯著降低(P<0.05)，小鼠體重、血液學細胞學指標和其他血清生化指標均與正常對照組相比無顯著性差異。試驗結果表明，二甲雙胍對SAMP8小鼠體重及血液學參數影響較小。

二甲雙胍 ； SAMP8小鼠 ； 體重 ； 血液學

醫藥界經過50年的臨床驗證，二甲雙胍作為一種經濟、安全有效的藥物不僅在糖尿病治療領域發揮獨特的作用，并且其在抗衰老、減肥、治療非酒精性脂肪肝等方面亦都顯示出一定的療效[1-2]。二甲雙胍作為抗衰老藥物使用時，是否會對機體的血糖、體重、肝功、腎功、血脂等指標產生影響，是本文關注的重點。試驗以目前公認的比較理想的自然衰老癡呆模型SAMP8小鼠作為研究對象，觀察二甲雙胍對SAMP8小鼠體重及血液學參數的影響，為二甲雙胍作為抗衰老藥物的應用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級SAMP8小鼠，40只，雄性，26～28w，26～32g，由北京大學醫學部實驗動物科學部提供，合格證號：SCXK(京)2011-0012。飼養于北京大學醫學部實驗動物科學部屏障環境中，合格證號：SYXK(京)2011-0039。飼喂全價SPF 級大、小鼠繁殖飼料，由北京科澳協力飼料有限公司生產，許可證號為SCXK(京) 2014-0010。

1.2 試驗藥品 鹽酸二甲雙胍，美侖生物，Lot:A0830A。0.9%氯化鈉注射液，石家莊四藥有限公司，批號為141231425。血清生化指標測定試劑盒，均購自Mindray公司。

1.3 試驗分組及給藥方法 SAMP8小鼠隨機分為4組，每組10只小鼠，即二甲雙胍低劑量組(50 mg/kg體重)、二甲雙胍中劑量組(100 mg/kg體重)、二甲雙胍高劑量組(200 mg/kg體重)及空白對照組。實驗組共30只小鼠，每日上午固定時間按照體重灌胃不同劑量的藥物，空白對照組灌胃等體積的生理鹽水連續灌胃30 d。試驗操作過程中按照動物福利的原則給予人道的關懷。

1.4 體重測定 各組小鼠自試驗開始，每周上午固定時間測定體重1次，直至小鼠12月齡時試驗結束。1.5 血液細胞學指標的測定 停藥2周后進行血液細胞學檢測。小鼠眼眶靜脈叢取全血20 μL 加入3 mL血球稀釋液中應用NIKON自動血球計數儀進行白細胞總數(WBC) 、紅細胞數(RBC) 、血紅蛋白(HGB) 、血細胞比容(HCT) 、平均紅細胞體積(MCV)、平均血紅蛋白量(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細胞體積 (RDW)、血小板計數(PLT)、血小板比積(PCT)、平均血小板體積(MPV)、血小板平均分布寬度 (PDW)、淋巴細胞數(LYM)、中間細胞數(MID)、嗜中性粒細胞數 (GRN)、淋巴細胞百分比(LYM%)、中間細胞百分比(MID%)、嗜中性粒細胞百分比(GRN%)的測定。1.6 血液生化指標的測定 停藥2周后進行血清生化指標的檢測。小鼠禁食12 h，眼眶靜脈叢取血，離心分離血清，應用Mindray BS-180全自動生化分析儀測定血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)，天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)，，總膽固醇(TC)，甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，肌酐(CREA)，尿素氮(UA)，葡萄糖(GLU)。

1.7 統計學分析數據分析采用GraphPad Prism 5統計軟件，結果x±s表示，組間差異采用雙尾Student'st檢驗，P<0.05為組間有統計學差異。

2 結果與分析

2.1 二甲雙胍對SAMP8小鼠體重的影響 試驗結果顯示，自SAMP8小鼠6月齡試驗開始時，3組試驗小鼠給藥過程中及停藥后直至小鼠12月齡試驗結束時，其體重與空白對照組相比均無顯著變化(見中插彩版圖1)。

2.2 二甲雙胍對SAMP8小鼠血液細胞學參數的影響 試驗結果顯示，各實驗組各項血液細胞學參數與空白對照組相比均無顯著性差異，見表1。

表1 二甲雙胍對SAMP8小鼠血液細胞學參數變化 (n=10)

(續表1)

組別MCHpgMCHCg/LRDW/%PLT×109/LPCT/%空白對照組17．0±0．6363．0±11．015．0±1．4834．0±167．30．4±0．1低劑量組16．9±1．6356．3±18．515．1±3．1568．5±64．30．2±0．1中劑量組16．0±0．5349．6±19．515．2±0．7841．7±150．10．3±0．1高劑量組16．8±0．6358．7±6．414．6±1．3829．0±144．50．4±0．1

(續表1)

組別MPV/%PDW/%LYM×109/LMID×109/LGRN×109/L空白對照組4．3±0．214．8±0．16．9±4．31．9±1．05．2±1．4低劑量組4．1±0．115．0±0．45．4±2．62．4±1．85．9±1．9中劑量組3．9±0．114．2±0．63．6±1．50．9±0．34．8±2．3高劑量組4．4±0．214．9±0．76．2±2．23．1±1．87．0±3．1

(續表1)

組別LYM/%MID/%GRN/%空白對照組46．0±12．513．8±3．640．1±14．7低劑量組44．9±12．315．7±7．339．4±6．6中劑量組36．5±20．010．0±1．253．5±19．4高劑量組37．4±11．213．5±4．843．6±21．2

2.3 二甲雙胍對SAMP8小鼠血清生化指標的影響 結果顯示，除低劑量組和中劑量組的AST與空白對照組相比顯著降低(P<0.05)外，二甲雙胍對SAMP8小鼠其他各項血清生化指標均無顯著影響，結果見表2。

表2 二甲雙胍對SAMP8小鼠小鼠血清生化指標 (n=10)

續表2

組別LDL?Cμmol/LUAμmol/LCREAμmol/LGLUμmol/L空白對照組0．6±0．19．7±0．452．5±1．34．6±0．6低劑量組0．7±0．110．8±1．454．3±3．54．6±1．5中劑量組0．6±0．19．2±2．755．2±5．24．5±1．8高劑量組0．7±0．110．4±2．657．7±3．64．5±0．9

*：P<0.05，與空白對照組相比

3 討論

關于二甲雙胍可延長壽命的研究，在線蟲、小鼠乃至人類的試驗中均有報道[3-4]，在應用快速老化模型SAMP8小鼠的抗衰老的研究中，我們的試驗結果亦顯示，二甲雙胍確實對延長SAMP8小鼠的壽命有作用(另文報道)。二甲雙胍是一種被普遍認可的降糖藥物，那么二甲雙胍在用于抗衰老藥物時，其是否有副作用，是否會對體重正常的小鼠有降低體重的作用，對血液學指標方面有無影響，其作為抗衰老藥物的安全性如何是需要探討的問題。

二甲雙胍目前己經被證實可以降低血糖、減輕體重、改善血脂，主要是改善TG 、 LDL-C及TC水平[5]。那么我們的試驗結果是否與之一致呢？

血清學檢測試驗結果顯示，對于血糖正常、血脂正常的SAMP8小鼠，在給予1個月的二甲雙胍藥物后，無論低、中、高實驗組的小鼠與空白對照組相比均無顯著變化，提示二甲雙胍并不會對不患有糖尿病及高血脂癥小鼠的血糖、血脂有降低的作用。

在對肝功能指標AST、AST檢測后發現，低劑量組和中劑量組的AST與空白對照組相比顯著降低(P<0.05)，但仍在正常范圍值之內，由此提示二甲雙胍對小鼠的肝功指標亦無不良影響。有文獻報道，二甲雙胍在治療非酒精性脂肪肝患者時可顯著降低血清轉氨酶的水平，有50%患者恢復正常，同時胰島素敏感性提高，肝臟的體積減少約20%，相似的結果在動物研究中也得到了證實[5]。，但這是指對血清轉氨酶升高情況下降低作用而言的。另外在臨床上雖然有服用鹽酸二甲雙胍致肝損害的個例報道，但應該屬于個例現象[6-7]。

在對腎功能指標CREA、UA 檢測后發現，3個試驗組與空白對照組相比兩個參數均無顯著變化，由此推斷二甲雙胍亦不會對小鼠腎功能產生負面作用。而且有文獻報道，二甲雙胍對糖尿病腎病小鼠的腎臟還具有保護作用[8]。

至于二甲雙胍在減肥中的應用，本試驗觀察了SAMP8小鼠 從6月齡到12月齡的體重情況，包括服用1個月二甲雙胍期及停藥后的后續5個月的情況，發現3個實驗組與空白對照組相比體重均無顯著變化。盡管灌胃二甲雙胍后，可能是二甲雙胍在胃內快速溶解后高濃度附著在消化道黏膜上，從而產生了刺激作用，實驗組出現了胃腸道反應的不良現象，但實驗組小鼠體重并未顯著降低，對于二甲雙胍用于減肥的研究，還有待進一步探討。

在對SAMP8小鼠血液細胞學指標觀察比較后發現，各實驗組與空白對照組在各項參數上均無顯著差異，表明二甲雙胍對小鼠的血液細胞學的指標亦無明顯影響。

4 結論

綜上所述，二甲雙胍在作為抗衰老的藥物時，對血糖正常、體重正常、血脂、腎功等指標正常的小鼠并無顯著影響，說明其安全性較好，副作用較小，可能是一種適宜長期使用的抗衰老藥物。

[1] 甘立霞. 二甲雙胍的臨床作用及研究進展[J].現代醫藥衛生，2016，32(11)：1601-1605.

[2] Barzilai N, Crandall J P, Kritchevsky S B,etal. Metformin as a Tool to Target Aging[J].Cell Metab., 2016，23(6)：1060-1065.

[3] 齊赫，劉婷婷，李國榮.二甲雙胍延長壽命的作用及其作用機制[J].中國臨床藥理學與治療學雜志，2012，17(11)：1295-1301.

[4] 董丹，張立，鄒洪斌.衰老與EMT關系及限食和二甲雙胍對二者作用[J].中國公共衛生，2011，21(11)：1439-1441.

[5] 秦穎. 二甲雙胍臨床應用概述[J].繼續醫學教育，2012，26(3)：46-48.

[6] 任愛民，李紅，沈淑風，等.濫服鹽酸二甲雙肌減肥致肝損害[J].藥物不良反應雜志，2012， 14( 3)：167-168.

[7] 毛璐.二甲雙肌致肝損害個案匯總分析[J].中國醫院藥學雜志，2012，32( 10)：814-815.

[8] 劉林卉，董成龍，蘇東明.二甲雙肌對糖尿病腎病小鼠腎臟保護作用[J].江蘇醫藥，2016，42(5)：504-508.

Effects of Metforminon on Body weight, Hematology Indexes in SAMP8 Mice

TIAN Feng ， ZHANG Ying ， LI Wen-ting ， ZHOU Shu-pei

(Department of Laboratory Animal Science, Peking University Health Center，Beijing 100191,China)

The experiment was designed to investigate the effects of metforminon on body weights, and hematology indexes in SAMP8 mice, Forty male SAMP8 mice were randomly divided into three experimental groups according to different doses and blank control group. Ten experimental mice in each group were administrated by means of intragastric administration with 50mg/kg, 100mg/kg, 200mg/kg metformin in accordance with the body weight daily, respectively.At the same time the control mice were treated with saline.Results showed that AST of 50mg/kg and 100mg/kg experimental group was higher than that of control group. However, the three doses had no significant effect on body weights and other hematology indexes in SAMP8 mice.

Metformin ; SAMP8 mice ; Body weight;Hematology indexes

ZHOU Shu-pei

2016-12-05

北京高等學校青年英才計劃項目(YETP0057)

田楓(1973-)， 女，副主任技師，博士，主要從事實驗動物研究工作，E-mail:fengtian_38@163.com

周淑佩，E-mail:13521690926@163.com

S853

A

0529-6005(2017)03-0100-03