肺癌患者血清和胸腔積液膜聯(lián)蛋白A2水平改變及其臨床意義研究

金高娃 秦迎春 葛永利 欒巍 烏云高娃

肺癌患者血清和胸腔積液膜聯(lián)蛋白A2水平改變及其臨床意義研究

金高娃 秦迎春 葛永利 欒巍 烏云高娃

目的 探討肺癌患者血清和胸腔積液膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2)水平改變及其臨床意義。方法 連續(xù)性收錄60例肺癌患者，以及40例肺部良性病變患者。檢測(cè)血清和胸腔積液中ANXA2水平改變，分析其與腫瘤分期、淋巴結(jié)以及遠(yuǎn)處組織轉(zhuǎn)移情況等相關(guān)性。結(jié)果 肺癌組中血清及胸腔積液內(nèi)ANXA2(血清：32.3±14.0 ng/mLvs.16.8±6.5 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：66.8±14.7 ng/mL vs.25.2±12.6 ng/mL，P<0.05)水平明顯高于良性肺病組。肺癌患者胸腔積液中ANXA2濃度高于血清濃度(32.3±14.0 ng/mL vs. 76.8±14.7 ng/mL，P<0.05)。TNM分期Ⅰ-Ⅱ期患者血清及胸腔積液ANXA2明顯低于Ⅲ-Ⅳ期患者(血清：29.1±12.1 ng/mL vs. 34.7±16.2 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：61.6±18.8 ng/mL vs.78.5±11.7 ng/mL，P<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清及胸腔積液ANXA2明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(血清：35.2±16.1ng/mL vs. 30.5±11.3 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：88.6±20.7 ng/mL vs. 59.3±11.5 ng/mL，P<0.05)；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者血清及胸腔積液ANXA2明顯高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者(血清：37.4±9.6ng/mL vs. 29.1±6.8 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：82.2±12.3ng/mL vs. 65.9±18.7 ng/mL，P<0.05)。血清ANXA2診斷肺癌的AUC為0.712， cut-off值為40.2 ng/mL；而胸腔積液ANXA2水平診斷肺癌的AUC為0.822，cut-off值為78.2 ng/mL。血清和胸腔積液ANXA2水平與肺癌呈正相關(guān)(血清：r=0.706，P<0.05；胸腔積液：r=0.812，P<0.05)。結(jié)論 肺癌患者血清和胸腔積液中ANXA2水平明顯上升，對(duì)于肺疾病合并胸腔積液者, 血清及胸水ANXA2測(cè)定,有助于肺癌鑒別診斷和分期。

肺癌；膜聯(lián)蛋白A2；早期診斷

我國(guó)目前處于老年化社會(huì)，國(guó)內(nèi)肺癌的發(fā)病率和死亡率逐年上升[1]。肺癌是一種起源于支氣管黏膜上皮的惡性腫瘤。鱗癌、腺癌和大細(xì)胞癌等非小細(xì)胞肺癌占我國(guó)肺癌發(fā)病總數(shù)的絕大部分[2]。非小細(xì)胞性肺癌患者早期缺乏特征性的臨床表現(xiàn)，目前傳統(tǒng)的檢測(cè)手段(主要是胸片、CT和支氣管鏡等)難以實(shí)現(xiàn)腫瘤的早期診斷[3]。膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2)是人體內(nèi)主要的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子，屬于膜聯(lián)蛋白多基因家族中的成員，由339個(gè)氨基酸組成，分子量約為36kDa，主要表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞，并可以由細(xì)胞分泌進(jìn)入循環(huán)中[4-5]。ANXA2的生理學(xué)作用主要是負(fù)責(zé)胞飲、胞吐和膜蛋白運(yùn)輸?shù)纫幌盗屑?xì)胞內(nèi)外物質(zhì)交換機(jī)制，由于ANXA2具有肌動(dòng)蛋白微絲F-actin的結(jié)合位點(diǎn)，因此也可以調(diào)控細(xì)胞骨架網(wǎng)絡(luò)[6-7]。無(wú)限制的增殖和分裂是腫瘤細(xì)胞的基本特征之一，細(xì)胞骨架改變與細(xì)胞惡變、粘附以及癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。近期部分研究發(fā)現(xiàn)ANXA2在一些肺癌組織中異常表達(dá)，比如李璟波等學(xué)者發(fā)現(xiàn)人類(lèi)肺癌組織中ANXA2明顯升高，有助于肺癌的早期鑒別診斷[8]。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)通過(guò)RNA干擾下調(diào)肺癌細(xì)胞株內(nèi)ANXA2水平可以明顯抑制肺癌細(xì)胞的增殖[9]。目前對(duì)于肺癌患者循環(huán)中ANXA2水平改變情況研究報(bào)道較少。本研究以ANXA2為切入點(diǎn)，綜合分析不同病理類(lèi)型、分期肺癌患者血清及胸水ANXA2水平改變。現(xiàn)總結(jié)如下。

資料與方法

一、一般資料

本研究連續(xù)性收錄2013年1月至2015年12月期間于我院腫瘤科就診的60例肺癌患者，以及40例肺部良性病變患者。肺癌組包括40例非小細(xì)胞肺癌(包括19例鱗癌、14例腺癌和7例腺鱗癌)和20例小細(xì)胞肺癌。TNM分級(jí)顯示，肺癌組包括15例Ⅰ期患者，15例Ⅱ期患者，20例Ⅲ期患者，以及10例Ⅳ期患者。良性肺部疾病組包括肺炎和肺結(jié)核等。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡在18-80歲；②經(jīng)過(guò)病理確診肺癌類(lèi)型；③肺癌組患者未合并肺炎等肺部良性疾病；④兩組患者合并胸腔積液。排除標(biāo)準(zhǔn)：①心、肝腎和血液功能異常的患者；②考慮其它部位惡性腫瘤轉(zhuǎn)移；③資料不全或丟失的患者；④入組后1個(gè)月死亡患者。

二、研究方法

所有納入本研究患者經(jīng)胸腔穿刺方法獲取胸腔積液，在胸穿前采取患者的血標(biāo)本。血液和胸腔積液標(biāo)本于4℃，5000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘后取上清液儲(chǔ)存在-80℃冰箱，直至被檢測(cè)。癌胚蛋白(CEA)和細(xì)胞角色素21-1(CYFRA21-1)由我院檢驗(yàn)科完成檢測(cè)。ANXA2水平通過(guò)ELISA測(cè)定，試劑盒購(gòu)自上海希美化學(xué)有限公司，貨號(hào)為NO503919，檢測(cè)操作完全按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

一、一般資料結(jié)果

兩組患者在年齡和性別分布上未見(jiàn)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。與良性肺病組相比，肺癌組中血清及胸腔積液內(nèi)CEA(血清：11.5±7.5 ng/mLvs. 3.5±1.2 ng/mL，P<0.05；胸腔積液： 12.2±4.7 ng/mLvs. 6.3±3.1 ng/mL，P<0.05)、CYFRA21-1(血清：10.4±5.5 ng/mLvs. 3.2±1.0 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：26.7±11.5ng/mL vs.9.1±4.7 ng/mL，P<0.05)和ANXA2(血清：32.3±14.0 ng/mLvs.16.8±6.5 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：66.8±14.7 ng/mLvs.25.2±12.6 ng/mL，P<0.05)的含量均顯著上升，同時(shí)，肺癌患者胸腔積液中CYFRA21-1(10.4±5.5 ng/mL vs. 26.7±11.5 ng/mL，P<0.05)及ANXA2(32.3±14.0 ng/mL vs. 76.8±14.7 ng/mL，P<0.05)的水平均要顯著高于血清(P<0.05)。(見(jiàn)表1)。

二、ANXA2水平與肺癌患者臨床資料的關(guān)系

根據(jù)性別、腫瘤分期、淋巴結(jié)以及遠(yuǎn)處組織轉(zhuǎn)移情況等將肺癌患者分組，比較血清及胸腔積液ANXA2在組間的差異。如表2所示，在性別上，男性與女性之間血清及胸腔積液ANXA2無(wú)差異(P>0.05)；病理分型上，小細(xì)胞癌和非小細(xì)胞癌患者之間血清及胸腔積液ANXA2無(wú)差異(P>0.05)。TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移方面，可見(jiàn)TNM分期Ⅰ-Ⅱ期患者血清及胸腔積液ANXA2明顯低于Ⅲ-Ⅳ期患者(血清：29.1±12.1 ng/mL vs. 34.7±16.2 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：61.6±18.8 ng/mL vs.78.5±11.7 ng/mL，P<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清及胸腔積液ANXA2明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(血清：35.2±16.1ng/mL vs. 30.5±11.3 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：88.6±20.7 ng/mL vs. 59.3±11.5 ng/mL，P<0.05)；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者血清及胸腔積液ANXA2明顯高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者(血清：37.4±9.6ng/mL vs. 29.1±6.8 ng/mL，P<0.05；胸腔積液：82.2±12.3ng/mL vs. 65.9±18.7 ng/mL，P<0.05)。(見(jiàn)表2)。

表1 兩組患者一般資料比較

三、ROC曲線分析

通過(guò)ROC曲線分析比較血清和胸腔積液ANXA2水平y(tǒng)與肺癌、TMN分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及病理類(lèi)型的相關(guān)性。如表3所示，以AUC大于0.7為基準(zhǔn)，可見(jiàn)血清ANXA2水平診斷肺癌的AUC為0.712，95%CI為0.564-0.824，cut-off值為40.2 ng/mL；而胸腔積液ANXA2水平診斷肺癌的AUC為0.822，95%CI為0.676-0.899，cut-off值為78.2 ng/mL；診斷TMN分期(Ⅰ-Ⅱ期)的AUC為0.772，95%CI為0.664-0.856，cut-off值為63.3ng/mL；診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC為0.711，95%CI為0.614-0.803，cut-off值為63.3 ng/mL；診斷遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的AUC為0.702，95%CI為0.632-0.851，cut-off值為85.1 ng/mL。(見(jiàn)表3)。

表2 血清及胸腔積液ANXA2水平與肺癌患者臨床資料的關(guān)系

表3 ROC曲線分析

四、相關(guān)性分析

通過(guò)Spearman相關(guān)性分析比較血清和胸腔積液ANXA2水平與肺癌、TMN分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及病理類(lèi)型等的相關(guān)性。結(jié)果如表4所示，可見(jiàn)血清和胸腔積液ANXA2水平與肺癌呈正相關(guān)(血清：r=0.706，P<0.05；胸腔積液：r=0.812，P<0.05)。其他方面未見(jiàn)明顯相關(guān)性。(見(jiàn)表4)。

表4 相關(guān)性分析

討 論

肺癌是一個(gè)多基因突變、多因素、多通路、多步驟的病變過(guò)程。腫瘤的早期診斷和分期評(píng)估是患者臨床預(yù)后的關(guān)鍵因素。但肺癌患者早期往往無(wú)明顯臨床癥狀和影像學(xué)表現(xiàn)，同時(shí)易誤診為肺部良性病變，從而耽誤病情。相當(dāng)一部分肺癌患者在臨床確診時(shí)已處于中晚期，治療效果不佳。本研究以血清ANXA2為切入點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)肺癌患者循環(huán)和胸水中的ANXA2水平較肺部良性病變患者明顯升高，對(duì)于肺癌和相應(yīng)的臨床分期等具有一定的早期診斷評(píng)估價(jià)值。

ANXA2的分子結(jié)構(gòu)主要包括一個(gè)33kD大小的C端結(jié)構(gòu)域和一個(gè)3kD大小的N端結(jié)構(gòu)域。C-端結(jié)構(gòu)域具有4個(gè)重復(fù)序列，可與鈣離子和磷酯等結(jié)合，參與細(xì)胞骨架的重組裝和細(xì)胞膜相關(guān)變化反應(yīng)。而細(xì)胞骨架改變與細(xì)胞惡變、粘附以及癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)肺癌患者血清和胸腔積液ANXA2水平明顯高于良性肺部病變患者。部分研究發(fā)現(xiàn)ANXA2在一些腫瘤組織中表達(dá)異常增加，比如郝立強(qiáng)等學(xué)者發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌患者腫瘤組織中磷酸化ANXA2的水平與腫瘤分期和臨床特征密切相關(guān)[10]。張海健等學(xué)者通過(guò)下調(diào)ANXA2表達(dá)水平比較肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為改變，發(fā)現(xiàn)下調(diào)ANXA2表達(dá)明顯下調(diào)肝癌細(xì)胞S期比例，抑制細(xì)胞增殖、遷移潛能和侵襲潛能，并且裸鼠移植瘤模型顯示干擾ANXA2表達(dá)后腫瘤重量明顯下降[11]。ANXA2在肺癌中的具體調(diào)控機(jī)制尚未明確。ANXA2可能通過(guò)調(diào)控蛋白激酶C的磷酸化，影響DNA復(fù)制、細(xì)胞增殖進(jìn)而細(xì)胞周期的進(jìn)程[5, 12-14]。

目前，關(guān)于ANXA2與肺癌的關(guān)系報(bào)道較少，現(xiàn)有的研究報(bào)道多集中于腫瘤組織中的ANXA2水平改變，對(duì)于肺癌的早期診斷并無(wú)太多臨床價(jià)值[15]。本研究以肺癌患者血清和胸腔積液為研究點(diǎn)，提示胸腔積液中ANXA2水平明顯上升，胸腔積液ANXA2水平有助于區(qū)分不同TMN分期的患者和淋巴或是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者，但血清與胸水ANXA2水平在小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌患者之間沒(méi)有差異。

綜上所述，肺癌患者血清和胸腔積液中ANXA2水平明顯上升，有助于肺癌的診斷和分期預(yù)測(cè)。

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Diagnostic value of ANXA2 in serum and pleural effusion in patients with lung cancer

JINGao-wa,QINYing-chun,GEYong-li,LUANWei,WUYUNGao-wa

DepartmentofInternalMedicine-Oncology,InnerMongoliaAutonomousRegionPeople'sHospital,Huhhot,InnerMongolia010000,China

Objective To estimate the diagnosis value of ANXA2 in serum and pleural effusion in patients with lung cancer. Methods 60 lung cancer patients and 40 pneumonia benign disease patients were enroll in this study. The levels of ANXA2 in serum and pleural effusion were measured and recorded. Correlation analysis was used to evaluate the association between ANXA2 and tumor stage, lymphatic metastasis and distant metastasis. Results The levels of ANXA2 in serum and pleural effusion in the lung cancer group were significantly higher than those in the control group (serum: 32.3±14.0 ng/mL vs.16.8±6.5 ng/mL,P<0.05; pleural effusion: 66.8±14.7 ng/mL vs.25.2±12.6 ng/mL,P<0.05). The contents of serum ANXA2 were higher than those of pleural effusion in lung cancer patients (32.3±14.0 ng/mL vs. 76.8±14.7 ng/mL,P<0.05). In comparison with stage Ⅲ-Ⅳ patients, the ANXA2 levels of both serum and pleural effusion in Ⅰ-Ⅱ patients were increased(serum: 29.1±12.1 ng/mL vs. 34.7±16.2 ng/mL，P<0.05；pleural effusion: 61.6±18.8 ng/mL vs.78.5±11.7 ng/mL，P<0.05). The lung cancer patients with lymphatic metastasis had a higher levels of ANXA2 in serum and pleural effusion compared with those without lymphatic metastasis (serum: 35.2±16.1ng/mL vs. 30.5±11.3 ng/mL,P<0.05; pleural effusion: 88.6±20.7 ng/mL vs. 59.3±11.5 ng/mL,P<0.05). ROC analysis showed that the AUC for lung cancer diagnosis of serum and pleural effusion of ANXA2 were 0.712 and 0.822 respectively, which cut-off value were 40.2 ng/mL and 78.2 ng/mL, respectively. Correlation analysis showed that both serum and pleural effusion of ANXA2 were positively related with lung cancer (serum: 0.706,P<0.05; pleural effusion:r=0.812,P<0.05). Conclusion The levels of serum and pleural effusion ANXA2 are elevated in lung cancer patients, which may be used for early detection and stage prognosis.

lung cancer; ANXA2; early diagnosis

10.3969/j.issn.1009-6663.2017.05.014

010000 內(nèi)蒙古 呼和浩特，內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科

2016-09-05]