乳腺癌HER-2免疫組化檸檬酸高溫高壓抗原修復(fù)手工操作的最佳條件

朱國(guó)良，石麒麟

乳腺癌HER-2免疫組化檸檬酸高溫高壓抗原修復(fù)手工操作的最佳條件

朱國(guó)良，石麒麟

抗原修復(fù)；有效修復(fù)時(shí)間；手工操作；檸檬酸；免疫組織化學(xué)

免疫組化技術(shù)是臨床病理診斷中重要的輔助技術(shù)之一，對(duì)于判斷腫瘤的來源、分類、預(yù)后和鑒別診斷以及指導(dǎo)和評(píng)估臨床治療起著重要作用，而正確的抗原修復(fù)是免疫組化結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵步驟。對(duì)常規(guī)10%中性福爾馬林固定的石蠟切片進(jìn)行抗原熱修復(fù)是廣泛接受的抗原修復(fù)方式。全自動(dòng)多功能組織病理檢測(cè)系統(tǒng)具有染色著色均勻、定位準(zhǔn)確、可重復(fù)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)[1]，但設(shè)備昂貴，試劑成本高，使用范圍受到限制，基層醫(yī)院病理科目前仍普遍使用手工操作方法。目前手工操作中各科的修復(fù)方法不盡相同[2]，即使相同的方法修復(fù)細(xì)節(jié)也有很大的差別。現(xiàn)以本科室HER-2檢測(cè)為例，對(duì)大家普遍使用的檸檬酸高溫高壓抗原修復(fù)方法[3]的細(xì)節(jié)進(jìn)行對(duì)比，觀察不同修復(fù)條件下的結(jié)果差別，探討檸檬酸高溫高壓抗原修復(fù)的最佳條件，確立大家能廣泛接受的相對(duì)統(tǒng)一的手工抗原熱修復(fù)方法。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 選取2014年1月～2015年6月湖州市第一人民醫(yī)院病理科存檔的經(jīng)10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋的78例乳腺癌組織，均行HER-2免疫組化檢測(cè)，每例標(biāo)本均連續(xù)3 μm厚切片，各切9張，分為9組，其中第9組加入已知染色結(jié)果為3+、2+、1+、0乳腺癌組織切片作為對(duì)照，65 ℃烤箱烤片2 h。

1.2 試劑 一抗HER-2(SP3即用型)、二抗免疫組化試劑盒(MaxVision2)、檸檬酸鹽抗原修復(fù)液(粉劑，規(guī)格：2 000 mL每包，稀釋后相當(dāng)于pH 6.0工作液)、DAB顯色劑、PBS(0.1 mol/L，pH 7.2～7.4)，均購(gòu)自福州邁新公司；一抗HER-2(4B5即用型)和XT ultraView檢測(cè)試劑盒購(gòu)自羅氏公司。

1.3 儀器 市售家用壓力鍋(蘇泊爾牌，不銹鋼，內(nèi)徑18 cm)工作壓力均為90 kPa；不銹鋼切片架；美的家用電磁爐；全自動(dòng)多功能組織病理檢測(cè)系統(tǒng)(美國(guó)Ventana公司)。

1.4 方法 將組織切片脫蠟至水后，放入0.3%H2O2處理15 min，再入蒸餾水備用。具體修復(fù)方法見表1。修復(fù)完成后，后續(xù)步驟按照MaxVision2試劑盒操作說明書執(zhí)行。對(duì)照第9組進(jìn)行Ventana機(jī)器染色，按設(shè)備使用說明操作。免疫組化結(jié)果判斷參照《乳腺癌HER-2檢測(cè)指南(2014版)》[4]。

2 結(jié)果

第9組對(duì)照組織檢測(cè)結(jié)果與原判讀結(jié)果一致。第1組陽性率降低，且有12例不同程度掉片；第2組與第9組相比，判讀結(jié)果最為接近，其中1例3+判讀為2+，1例2+判讀為1+，其余病例全部吻合，且組織無掉片，定位準(zhǔn)確，背景清晰；第3組陽性強(qiáng)度略下降，部分組織出現(xiàn)非特異性著色；第4～6組陽性強(qiáng)度明顯下降，出現(xiàn)大量假陰性；第7組出現(xiàn)假陽性，且有8例出現(xiàn)背景著色；第8組陽性率及陽性強(qiáng)度明顯提高，出現(xiàn)假陽性，且普遍出現(xiàn)背景著色及個(gè)別組織掉片(表2)。

3 討論

由于在組織固定過程中，甲醛與蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)形成醛交聯(lián)蛋白，這種化合物封閉了抗原，導(dǎo)致抗體對(duì)抗原的特異性反應(yīng)降低，從而導(dǎo)致假陰性，因此抗原修復(fù)對(duì)于免疫組化是不可或缺的，可直接影響染色結(jié)果。各實(shí)驗(yàn)室采用哪種抗原修復(fù)方法視具體情況而定，但不論采用哪種方法均應(yīng)以準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為最佳選擇。熱抗原修復(fù)雖然可提高敏感性，但操作不當(dāng)亦可產(chǎn)生假陽性。高壓鍋法因成本低、操作簡(jiǎn)單易行、染色效果理想的優(yōu)點(diǎn)而被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用，但也具有耗時(shí)和極易受溫度影響的缺點(diǎn)。而抗原修復(fù)的關(guān)鍵因素主要是抗原修復(fù)液的選擇和抗原修復(fù)的溫度與時(shí)間，即不管何種修復(fù)方式跟有效修復(fù)時(shí)間[5]的長(zhǎng)短關(guān)系密切。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明檸檬酸高溫高壓抗原修復(fù)的方法因有效修復(fù)時(shí)間的不同，而產(chǎn)生完全不同的結(jié)果：第1組實(shí)驗(yàn)功率過高的電磁爐抗原修復(fù)易掉片及產(chǎn)生細(xì)胞核假陽性的風(fēng)險(xiǎn)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[6]；第2組實(shí)驗(yàn)結(jié)果與第9組Ventana機(jī)器的結(jié)果最為吻合，第9組18例3+的病例第2組檢測(cè)結(jié)果為17例3+、1例2+，第9組15例2+的病例第2組檢測(cè)結(jié)果為14例2+，1例1+，其余病例檢測(cè)結(jié)果一致，且第2組所有檢測(cè)結(jié)果定位準(zhǔn)確，結(jié)構(gòu)清晰，不掉片；第3組實(shí)驗(yàn)因電磁爐功率過低則間接延長(zhǎng)了修復(fù)時(shí)間，從而導(dǎo)致容易出現(xiàn)非特異性的背景著色；第4～6組實(shí)驗(yàn)由于有效修復(fù)時(shí)間不足，從而導(dǎo)致結(jié)果完全不同，相差甚遠(yuǎn)；第7、8組實(shí)驗(yàn)由于明顯延長(zhǎng)有效修復(fù)時(shí)間，從而導(dǎo)致陽性率升高，且出現(xiàn)假陽性，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[7]。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了溫度及有效修復(fù)時(shí)間的重要性。

表1 抗原修復(fù)不同手工操作方法比較

表2 Ventana機(jī)器染色和8組不同修復(fù)時(shí)間的手工染色結(jié)果比較

本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，第2組結(jié)果與Ventana機(jī)器的結(jié)果最為吻合，且定位準(zhǔn)確，結(jié)構(gòu)清晰，不掉片，是理想的HER-2檸檬酸高溫高壓抗原修復(fù)手工操作方法，適合基層醫(yī)院使用。

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浙江省湖州市第一人民醫(yī)院病理科，湖州 313000

朱國(guó)良，男，主管技師。E-mail: blzgl@126.com

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1001-7399(2017)02-0219-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.02.027

接受日期：2016-10-28