黔產草珊瑚中黃酮類提取物的體外抗氧化研究

摘 要 目的：研究黔產草珊瑚中黃酮類化合物的體外抗氧化活性。方法：采用鐵氰化鉀還原法、DPPH自由基、羥基自由基和超氧陰離子自由基清除試驗，研究黔產草珊瑚黃酮的體外抗氧化活性。結果：黔產草珊瑚黃酮還原能力隨著其質量濃度的增加而增強；對DPPH自由基清除能力強于VC弱于BHT；對·OH 清除能力弱于BHT，同VC清除能力相當；對O2-·清除能力同VC相當，而弱于BHT。結論：黔產草珊瑚黃酮具有較強的體外抗氧化活性。

關鍵詞 黔產草珊瑚；黃酮提取物；抗氧化性；抗菌活性

中圖分類號：Q946.8；S567.9 文獻標志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2017.31.024

草珊瑚[Sarcandra glabra （Thunb.）Nakail]系金粟蘭科植物草珊瑚的全草，又名腫節風、接骨金粟蘭、九節茶、接骨木，為多年生常綠草本或亞灌木，莖葉藥用，長江以南各省均有分布，可人工種植。草珊瑚分布廣，資源的蘊藏量較大，有廣闊的開發前景[1]。草珊瑚總黃酮具有抗菌消炎、清熱解毒、抗腫瘤、促進骨折愈合等多種生物活性。毒理學研究表明，草珊瑚及其提取物具有較好的安全性[2]。

草珊瑚黃酮類化合物具有多種生物活性，應用及其廣泛，本試驗對經大孔樹脂純化后的草珊瑚總黃酮提取物進行體外抗氧化試驗，為闡明草珊瑚黃酮類化合物生物學活性及開發利用提供鋪墊。

1材料與方法

1.1材料與儀器

1.1.1 材料

草珊瑚全草（干品）購于安順花鳥市場。

1.1.2 試劑

食用酒精，體積分數95%；其余試劑均為分析純、化學純或生化試劑。

1.1.3 儀器

ALC-210.3型電子天平（賽多利斯艾科勒公司），UV-1700型紫外-可見分光光度計、DHG-9070A型熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司），R-200型旋轉蒸發儀（北京科偉公司），SHB-II型循環水式真空泵（鄭州長城科工貿有限公司），超凈工作臺（上海市純昱科學儀器有限公司）

1.2試驗方法

1.2.1 草珊瑚黃酮提物的制備

精確稱取草珊瑚全草制粗粉5 g，用體積分數為75%乙醇回流提取3次，每次3 h，過濾，合并濾液，減壓回收乙醇至無醇味，趁熱過濾，經X-5型大孔樹脂純化，得總黃酮提取液[3-4]。

1.2.2 黃酮質量濃度測定方法

利用硝酸鋁顯色法測定提取液中黃酮的質量濃度。根據標準曲線方程y=0.012 8x+0.008，R2=0.999 8（y為吸光度；x為蘆丁濃度，mg·mL-1）計算出結果[5]。

1.3草珊瑚黃酮體外抗氧化活性的研究

1.3.1 還原能力的測定

取不同濃度的黃酮溶液2.5 mL于10 mL離心管，分別加入2.5 mL 0.2 mol·L-1磷酸鹽緩沖液（pH=6.6）和2.5 mL l%鐵氰化鉀，搖勻后于置于50 ℃水浴20 min，加入2.5 mL 10%三氯乙酸溶液，3000 r·min-1離心10 min。取2.5 mL上清液，加2.5 mL蒸餾水和0.5 mL 0.1%的三氯化鐵，混勻后于700 nm波長處測量吸光值。吸光值大小反應樣品的還原能力。

1.3.2 DPPH自由基清除試驗

取不同濃度的黃酮溶液2 mL于10 mL試管中，加入2 mL 2×10-4 mol·L-1 DPPH，搖勻，室溫下避光反應30 min，在517 nm測定吸光度A2，用2 mL乙醇代替樣品做空白測定其吸光度A1，測定2 mL黃酮溶液和2 mL乙醇混合液的吸光度A3，根據下式計算樣品對DPPH的抑制率（%）。

DPPH的抑制率=

1.3.3 羥基自由基清除試驗

在10 mL試管中依次加入2 mmol·L-1 FeSO4溶液2 mL、1 mmol·L-1 H2O2溶液2 mL和6 mmol·L-1水楊酸溶液3 mL，搖勻，置于37 ℃水浴15 min，在510 nm測定吸光度A1，再向試管中加入草珊瑚總黃酮溶液后，搖勻，置于37 ℃水浴15 min，測定吸光度A2，用蒸餾水取代H2O2作對照試驗測得的吸光度為A3，根據下式計算樣品對羥基自由基的清除率（%）。

羥基自由基的清除率=

1.3.4 超氧陰離子自由基清除試驗

采用鄰苯三酚自氧化體系評價草珊瑚黃酮清除超氧陰離子自由基能力的強弱，參照文獻[6]的方法進行，在320 nm波長處測定反應至5 min時的吸光度。標準對照為丁基羥基茴香醚（BHA），清除超氧陰離子SC（%）的計算公式如下：

式中，A0、A1分別為加草珊瑚總黃酮（或BHA）前后體系的吸光度。

如圖1可知，草珊瑚黃酮表現出較好的還原能力，其還原能力隨著草珊瑚黃酮濃度的增加而增強。Fe3+可以被草珊瑚黃酮提供的電子還原成Fe2+，草珊瑚黃酮是良好的電子供應者。

2.2清除DPPH自由基試驗結果

由圖2可知，在10～35 μg·mL-1的濃度范圍內，草珊瑚黃酮質量濃度與清除DPPH自由基的能力存在量效關系。以20 μg·mL-1的VC和BHT作為對照，測得BHT的清除能力明顯強于草珊瑚黃酮和VC，在此濃度下BHT的清除率達到70.6%，而草珊瑚黃酮的清除率為39.2%，VC的清除能力僅為17.8%。

2.3清除羥基自由基試驗結果

由圖3可知，不同質量濃度的草珊瑚黃酮對·OH的清除能力，隨著質量濃度的增加而增強。以20 μg·mL-1的VC和BHT作為對照，測得BHT對·OH的清除能力強于樣品和VC，在此濃度下的清除率為79.6%，而樣品的清除能力（52.4%）和VC的清除能力（51.8%）相當。

2.4清除超氧陰離子自由基試驗結果

由圖4可知 ，不同質量濃度的草珊瑚黃酮對O2-·具有較好的清除能力，并隨著草珊瑚黃酮含量的增加對O2-·清除能力增強。以20 μg·mL-1的VC和BHT作為對照，測得BHT對O2-·的清除能力（80.6%）略強于樣品（78.9%），而VC的清除能力（48.2%）弱于樣品。

3結論

草珊瑚黃酮提取物抗氧化活性試驗結果表明：其具有較明顯的抗氧化作用，抗氧化能力隨著黃酮質量濃度增大而增強。在DPPH清除試驗中，草珊瑚黃酮清除能力強于VC弱于BHT，20 μg·mL-1草珊瑚黃酮提取物清除率為39.2%；通過·OH清除試驗可看出，草珊瑚黃酮清除能力弱于BHT，同VC清除能力相當，當濃度為20 μg·mL-1時，清除率為52.4%；從O2-·清除試驗可知，20 μg·mL-1草珊瑚黃酮提取物和BHT清除率分別為78.9%和80.6%，說明草珊瑚黃酮提取物具有較強的清除O2-·能力。

參考文獻：

[1]李松林，崔熙，喬傳卓，等.中國草珊瑚屬植物研究概況及探討[J].藥學實踐雜志，1992（3）：49-51.

[2]孫建琴，孫曉紅，王惠群，等.草珊瑚的毒性研究[J].貴陽醫學院學報，1998，23（1）：43-44.

[3]張睿，徐雅琴，時陽.黃酮類化合物提取工藝研究[J].食品與機械，2003（1）：21-22.

[4]郁建生，李英倫.草珊瑚總黃酮提取工藝比較研究[J].江蘇農業科學，2006（5）：136-138.

[5]郁建生，郁建平.草珊瑚總黃酮提取工藝及其含量動態變化[J].中國中藥雜志，2007，32（4）：307-309.

[6]許申鴻，杭瑚，李運平.超氧化物歧化酶鄰苯三酚測活法的研究及改進[J].化學通報，2001（8）：516-519.