羅紅霉素顆粒和干混懸劑中降解產物HPLC測定方法建立及降解產物產生原因探討

楊雷

摘 要：建立反相高效液相色譜法測定羅紅霉素顆粒和干混懸劑中降解產物去紅霉糖羅紅霉素的含量。方法：采用奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），磷酸鹽緩沖液-乙腈（25：75）和65%乙腈梯度洗脫為流動相，檢測波長為210nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。結論：本法簡便、準確，可用于羅紅霉素顆粒和干混懸劑中降解產物去紅霉糖羅紅霉素的含量測定。

關鍵詞：羅紅霉素；含量；測定

羅紅霉素是新一代大環內酯類抗生素，主要作用于革蘭氏陽性菌、厭氧菌、衣原體和支原體等[1-2]。羅紅霉素體外抗菌作用與紅霉素相類似，體內抗菌作用比紅霉素強1-4倍。羅紅霉素適用于化膿性鏈球菌引起的咽炎及扁桃體炎；沙眼衣原體引起的尿道炎和宮頸炎；敏感菌所致的鼻竇炎、中耳炎、急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發作等[3-5]。去紅霉糖羅紅霉素為羅紅霉素主要降解產物之一。本文采用高效液相法對羅紅霉素顆粒和干混懸劑中的降解產物去紅霉糖羅紅霉素進行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：LC-5520高效液相色譜儀（北京東西分析儀器有限公司）；HX-06超聲波清洗器（武漢恒信世紀科技有限公司）；UV-6雙光束掃描型紫外可見分光光度計（上海美譜達儀器有限公司）；Precisa XB220A電子分析天平（上海精科天美科學儀器有限公司）；PC 200-G 50恒溫水浴（賽默飛世爾科技（中國）有限公司）；天星進樣瓶清洗機TX-500型（北京天星科儀科技有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：羅紅霉素、去紅霉糖羅紅霉素

1.4 試劑：甲醇（紹興經濟開發區忠良化工有限公司）、磷酸二氫銨（紹興經濟開發區忠良化工有限公司）、冰醋酸（紹興經濟開發區忠良化工有限公司）、三乙胺（武漢市偉琪博星生物科技有限公司）、乙腈（紹興經濟開發區忠良化工有限公司）。

1.5 試藥：羅紅霉素顆粒、羅紅霉素干混懸劑

2 測定方法確定

2.1 色譜條件

依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下[1-5]。流動相：流動相以磷酸鹽緩沖液-乙腈（25：75）為A，65%乙腈為B，按下表梯度洗脫；檢測波長：210nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數按去紅霉糖羅紅霉素峰計算應不得低于2500。

2.2 對照品溶液的制備

取在60℃減壓干燥4 小時的去紅霉糖羅紅霉素對照品適量，精密稱定，加A流動相制成每lml含20μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品適量，精密稱定，加A流動相30毫升超聲處理10分鐘，放冷，濾過，濾液置50ml量瓶中，用A流動相分次洗滌容器和殘渣，洗液濾人同一量瓶中，加A流動至刻度，搖勻，即得。

2.4 精密度試驗

精密稱取去紅霉糖羅紅霉素對照品適量，加A流動相使溶解，制成濃度為20μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.56%，表明本方法精密度良好。

2.5 對照品的線性考察

精密稱取適量去紅霉糖羅紅霉素對照品，加入A流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含5、10、15、20、25、30微克的溶液對照品溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明，羅紅霉素在5～30μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.6 準確度試驗

取對照品適量，精密稱取已知含量的樣品9份，置量瓶中，分別精密加入去紅霉糖羅紅霉素對照品，按項下方法制備成80% 100%、120%。取模擬樣品照“含量測定”項下方法試驗， 計算回收率為95-105%之間，平均回收率為96.5%。

2.7 樣品穩定性試驗

取同一批樣品，按2.3項下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、0.5、1.5、2小時，精密吸取供試品溶液10？滋l 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。結果表明供試品不穩定，需臨用新配。取去紅霉糖羅紅霉素對照品，按2.2項下的對照品制備方法制備對照品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、0.5、1、1.5、2.0小時，精密吸取供試品溶液10？滋l 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定去紅霉糖羅紅霉素峰面積的RSD=0.76%。結果表明對照品2小時內穩定。

2.8 專屬性試驗

取合成原料及合成中間體，照2.3項下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結果在去紅霉糖羅紅霉素出峰處陰性液無色譜峰，結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.9 破壞性試驗

酸分解產物溶液的制備：取羅紅霉素適量，置試管中，加沿管壁緩緩加入1mol/L鹽酸1ml，煮沸10分鐘，冷卻，加流動相A稀釋至10ml，調節溶液pH值至中性，轉移定容至25毫升容量瓶內，用流動相A定容，濾過，取續濾液，即得。堿分解產物溶液的制備：取羅紅霉素適量，置試管中，加1mol/L NaOH溶液1ml，煮沸10分鐘，冷卻，加流動相A稀釋至10ml，調節溶液pH值至中性，轉移定容至25毫升容量瓶內，用流動相A定容，濾過，取續濾液，即得。樣品熱分解產物試驗溶液的制備：取羅紅霉素適量，置試管中，105攝氏度加熱1小時，冷卻，加流動相A稀釋至10ml，轉移定容至25毫升容量瓶內，用加流動相A定容，濾過，取續濾液，即得。羅紅霉素被酸堿破壞后產生大量去紅霉糖羅紅霉素，加熱破壞后無去紅霉糖羅紅霉素產生。破壞性試驗發現羅紅霉素不耐酸堿，羅紅霉素顆粒和干混懸劑PH值偏酸性，這可能是羅紅霉素顆粒和干混懸劑降解的原因之一。

參考文獻

[1]欒連軍，邵青，李士敏，王萍.羅紅霉素顆粒劑、膠囊劑及片劑人體生物利用度測定[J].中國新藥雜志，1999（08）.

[2]李珍，沈意翔，石晶，王卓，范國榮，胡晉紅.國產羅紅霉素膠囊和片劑的藥物動力學和生物利用度比較[J].中國藥房，2000（01）.

[3]張蓉映，李寧.羅紅霉素緩釋片治療社區獲得性呼吸道感染的臨床療效和安全性分析[J].中國中醫藥現代遠程教育，2010（02）.

[4]曹麗華，王慧玲，霍麗，王鎮山，徐啟勇，章輝，劉德夢，劉曉菊.羅紅霉素緩釋片與羅紅霉素片治療急性呼吸系感染的臨床研究[J].大連醫科大學學報，2005（02）.

[5]程曉冬.羅紅霉素緩釋片治療泌尿系統感染的療效及安全性研究[J]. 國際泌尿系統雜志，2009（06）.