浸潤(rùn)性乳腺癌患者外周血中25羥維生素D3的測(cè)定及臨床意義

張慧芳，龔華

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬無(wú)錫市婦幼保健院檢驗(yàn)科，江蘇 無(wú)錫 214002)

浸潤(rùn)性乳腺癌患者外周血中25羥維生素D3的測(cè)定及臨床意義

張慧芳，龔華

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬無(wú)錫市婦幼保健院檢驗(yàn)科，江蘇 無(wú)錫 214002)

目的檢測(cè)25羥維生素D3[25(OH)D3]在浸潤(rùn)性乳腺癌外周血中的水平，探討其在浸潤(rùn)性乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的作用。方法收集2015年1～12月間來(lái)我院住院治療的浸潤(rùn)性乳腺癌患者122例(乳腺癌組)，乳腺良性腫瘤患者40例(乳腺良性腫瘤組)和健康體檢者40例(健康對(duì)照組)，乳腺癌組患者均經(jīng)病理檢查確診。采集外周血，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(Elisa法)測(cè)定25(OH)D3的水平；同時(shí)收集122例浸潤(rùn)性乳腺癌患者的腫瘤組織，采用免疫組織染色法測(cè)定組織的石蠟切片中的雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、人表皮生長(zhǎng)因子受體-2(Cerb-2)和p53蛋白(抑癌基因p53)的表達(dá)水平，并分析其與25(OH)D3的關(guān)系。結(jié)果(1)乳腺癌組、乳腺良性腫瘤組和健康對(duì)照組外周血中的25(OH)D3的水平分別為(34.9±12.8)nmol/L、(46.9±11.3)nmol/L和(51.4±13.2)nmol/L，乳腺癌患者的外周血中25(OH)D3的水平明顯低于乳腺良性腫瘤患者和健康者，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；(2)乳腺癌患者外周血中25(OH)D3水平與年齡、PR、VEGF和臨床分期有顯著性相關(guān)(P＜0.05)，而與淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、ER、Cerb-2和p53無(wú)顯著性相關(guān)(P＞0.05)。結(jié)論25(OH)D3在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中具有不可忽視的作用。

25羥維生素D3；乳腺癌；雌激素受體；孕激素受體；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；人表皮生長(zhǎng)因子受體-2；抑癌基因p53

25羥維生素D3[25-hydroxyvitamin D3，25(OH)D3]是一種類固醇衍生物，可以促進(jìn)骨骼生長(zhǎng)，常作為預(yù)防佝僂病的重要藥物而廣泛應(yīng)用。隨著科學(xué)研究的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)維生素D3還與心血管、高血壓和腫瘤等密切相關(guān)[1]。乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)呈年輕化趨勢(shì)。本文分析了我院浸潤(rùn)性乳腺癌、乳腺良性腫瘤和健康體檢者的外周血中25(OH)D3水平以及25(OH)D3與乳腺癌患者中雌激素受體(estrogen receptor，ER)、孕激素受體(progesterone receptor，PR)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor， VEGF)的相關(guān)性，探討25(OH)D3與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及其預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 乳腺癌組：2015年1～12月來(lái)我院治療的浸潤(rùn)性乳腺癌122例，年齡27～73歲。所有患者均經(jīng)病理診斷確診，患者術(shù)前均未接受化療，未服用過(guò)25(OH)D3。乳腺良性腫瘤組：2015年1～12月于我院治療的乳腺良性腫瘤患者40例，均經(jīng)病理確診為乳腺纖維瘤、乳腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤和乳腺腺病等，年齡21～63歲。健康對(duì)照組：2015年1～12月于我院體檢健康女性40例，年齡28～59歲。

1.2 方法 各組受檢者抽取空腹血3 mL，離心，吸取上層血漿，檢測(cè)患者25(OH)D3水平，試劑盒采用艾狄斯試劑盒(英國(guó))，按說(shuō)明書(shū)操作；所有組織標(biāo)本由穿刺活檢或手術(shù)切除獲得，均經(jīng)10%中性緩沖甲醛溶液固定，石蠟包埋后行4 μm切片，ER、PR、VEGF、Cerb-2和p53均購(gòu)自北京中杉金橋公司，操作按說(shuō)明書(shū)。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) (1)ER、PR：細(xì)胞核內(nèi)有棕色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，著色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞1%為陽(yáng)性。(2)VEGF：細(xì)胞漿有著色顆粒為準(zhǔn)，著色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞10%為(++)陽(yáng)性。Cerb-2染色陽(yáng)性位于細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)中，完全沒(méi)著色或≤10%腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞膜著色為-；＞10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)微弱、不完整的細(xì)胞膜著色為+；＞10%的腫瘤細(xì)胞呈弱至中度完整的細(xì)胞膜著色為++；＞10%的腫瘤細(xì)胞呈強(qiáng)的、完整的細(xì)胞膜著色為+++。-～+為陰性，+++為陽(yáng)性，++視為可疑，進(jìn)一步經(jīng)熒光原位雜交(FISH)檢測(cè)確認(rèn)是否為陽(yáng)性。p53以細(xì)胞核內(nèi)有著色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組受檢者外周血中25(OH)D3水平比較 乳腺癌組、乳腺良性腫瘤組和健康對(duì)照組受檢者外周血中25(OH)D3水平分別為(34.9±12.8)nmol/L、(46.9± 11.3)nmol/L和(51.4±13.2)nmol/L，乳腺癌患者外周血中25(OH)D3明顯低于健康對(duì)照組和乳腺良性腫瘤組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.02、5.38，P＜0.05)。

2.2 乳腺癌患者外周血中25(OH)D3與臨床病理的關(guān)系 在浸潤(rùn)性乳腺癌患者中，25(OH)D3水平在年齡≥50歲的患者中明顯高于年齡＜50歲的患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。臨床分期中，Ⅰ期與Ⅱ期患者外周血中25(OH)D3相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；PR陽(yáng)性的患者外周血中25(OH)D3水平明顯低于PR陰性的患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；VEGF＜++的患者外周血中維生素D水平明顯高于VEGF≥++的患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而外周血中25(OH)D3的水平與淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移，腫瘤大小、ER、Cerb-2和p53無(wú)顯著性相關(guān)(P＞0.05)，見(jiàn)表1。

表1 乳腺癌患者外周血25(OH)D3水平與臨床病理的關(guān)系(±s)

表1 乳腺癌患者外周血25(OH)D3水平與臨床病理的關(guān)系(±s)

臨床病理因素年齡(歲)≥50＜50臨床分期Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移例數(shù)25(OH)D3(nmol/L)t值2.93 P值＜0.05 68 54 37.9±14.4 31.2±9.6 56 52 14 32.5±9.2 38.7±14.9 30.6±16.2 2.62(Ⅰ期與Ⅱ期比較) 1.77(Ⅱ期與Ⅲ+Ⅳ期比) 0.58(Ⅰ期與Ⅲ+Ⅳ期比) 0.68＜0.05＞0.05＞0.05＞0.05無(wú)有70 52 35.9±12.7 34.3±13.2 EPR (＋) (－)腫瘤大小(mm)≤2＞2 VEGF＜++≥++以上ER 69 53 64 58 76 46 31.8±9.9 39.2±15.3 34.5±13.5 35.5±12.1 37.3±12.7 29.5±13.3 3.23 0.43 3.23 0.25＜0.05＞0.05＜0.05＞0.05 + -73 49 35.0±13.4 34.4±12.4 Cerb-2 1.17＞0.05 + -81 41 35.7±13.9 32.8±10.6 p53 0.93＞0.05 + -89 33 34.2±11.3 36.7±17.3

3 討論

25(OH)D3是人體的必需維生素之一，維持著體內(nèi)的鈣磷平衡。人體內(nèi)長(zhǎng)期缺乏25(OH)D3可以導(dǎo)致免疫力低下，肥胖癥和抑郁癥等多種疾病。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，人們意識(shí)到25(OH)D3不僅與機(jī)體的免疫相關(guān)，而且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后都有關(guān)系。25(OH)D3可以通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)[2]，故25(OH)D3缺乏可以誘發(fā)乳腺癌、肺癌和結(jié)腸癌等多種腫瘤。

國(guó)外研究顯示，25(OH)D3可以通過(guò)與相應(yīng)受體結(jié)合調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[3]。本文研究顯示，乳腺癌組患者外周血中25(OH)D3水平明顯低于乳腺良性腫瘤患者和健康對(duì)照組患者，而乳腺良性腫瘤組與健康對(duì)照組外周血中25(OH)D3水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，提示25(OH)D3在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著一定的作用。Lue等[4]認(rèn)為體內(nèi)的25(OH)D3水平降低與乳腺癌的發(fā)病相關(guān)，本研究與之相符。

孕激素受體(PR)是雌激素和雄激素受體結(jié)合后誘導(dǎo)的產(chǎn)物，PR可以抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[5]。在乳腺癌中，PR陽(yáng)性預(yù)示著內(nèi)分泌治療效果較高，預(yù)后較好[6]。本文的研究結(jié)果顯示，PR(+)乳腺癌患者外周血中25(OH)D3水平明顯低于PR(-)患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。提示25(OH)D3可能通過(guò)另一種機(jī)制來(lái)調(diào)節(jié)了乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)展與預(yù)后。

臨床分期越高，細(xì)胞分化程度越差。一些研究顯示，外周血中25(OH)D3水平在Ⅲ期和Ⅳ期明顯低于Ⅰ期和Ⅱ期[7]。國(guó)外研究表明，25(OH)D3可以誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞的分化，使其在生物學(xué)或者形態(tài)學(xué)上與成熟細(xì)胞接近，同時(shí)能夠抑制乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和細(xì)胞生成[8-9]。而本文研究結(jié)果顯示，Ⅱ期乳腺癌患者外周血中25(OH)D3的水平最高，Ⅰ、Ⅱ期與Ⅲ+Ⅳ期外周血25(OH)D3水平相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。本研究中Ⅲ+Ⅳ期的病例較少，因?yàn)殡S著現(xiàn)代生活水平和醫(yī)療水平的提高，人們?cè)絹?lái)越注重日常的身體保健，乳腺癌也很少在Ⅲ期和Ⅳ期才被發(fā)現(xiàn)，后面應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)Ⅲ+Ⅳ的病例的研究，來(lái)進(jìn)一步確認(rèn)25(OH)D3與臨床分期的相關(guān)性。而Ⅰ期與Ⅱ期相比較，Ⅱ期患者外周血25(OH)D3平明顯高于Ⅰ期，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Ⅱ期乳腺癌患者外周血中的25(OH)D3水平比Ⅰ期患者高，此結(jié)果是否與年齡因素相關(guān)(Ⅱ期患者年齡多在50～65歲)還需進(jìn)一步研究。本文統(tǒng)計(jì)提示年齡＞50歲的乳腺癌患者外周血中的25(OH)D3水平明顯高于年齡＜50歲的患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快，年輕人忙于事業(yè)而忽視了鍛煉，體內(nèi)25(OH)D3水平較低，也可能是乳腺癌發(fā)病呈年輕化的一個(gè)重要因素。

VEGF被公認(rèn)為是促使腫瘤新血管生成的最重要生長(zhǎng)因子之一。本文的結(jié)果顯示，VEGF＜++的乳腺癌患者外周血中25(OH)D3的水平明顯高于VEGF≥++的乳腺癌患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。這結(jié)果進(jìn)一步預(yù)示了25(OH)D3在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后扮演著重要角色，有可能為臨床治療乳腺癌提供新的途徑。

本文研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者外周血中的25(OH)D3水平與腫瘤的大小，有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER、p53和Cerb-2是否陽(yáng)性無(wú)明顯關(guān)系，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

隨著對(duì)25(OH)D3的抗腫瘤機(jī)制進(jìn)一步深入研究，其對(duì)腫瘤的預(yù)防治療作用日益受到關(guān)注。與放療和化療相比，其損傷小，無(wú)痛苦，可為臨床乳腺腫瘤的輔助治療提供新的思路。

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Clinical significance of detecting 25-hydroxyvitamin D3in peripheral blood of patients with invasive breast cancer

ZHANG Hui-fang,GONG Hua.Department of Clinical Laboratory,Wuxi Maternal and Child Health Care Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Wuxi 214002,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo investigate the level of 25-hydroxyvitamin D3(25(OH)D3)in the peripheral blood of patients and to reveal the occurrence and development of invasive breast cancer.MethodsOne hundred and twenty-two patients with invasive breast cancer,forty healthy volunteers and forty patients with benign breast tumor admitted in our hospital between January 2015 and December 2015 were recruited,and breast cancer patients were diagnosed by pathological examination.The level of 25-hydroxyvitamin D3in their peripheral blood samples were detected by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)method,and the results were statistically analyzed.Immunohistochemistry staining was used to determine the expression level of estrogen receptor(ER),progestrone receptor(PR),vascular endothelial growth factor(VEGF),Cerb-2 and p53 protein in 122 patients with invasive breast cancer,then the relationship between these protein level and 25-hydroxyvitamin D3was analyzed respectively.Results(1)The value of 25-hydroxyvitamin D3in invasive breast cancer patients was(34.9±12.8)nmol/L,which was significant lower than(46.9± 11.3)nmol/L in benign breast tumor patients and(51.4±13.2)nmol/L of healthy volunteers(P＜0.05).(2)The 25-hydroxyvitamin D3level of the peripheral blood in patients with invasive breast cancer was significantly associated with age,PR,VEGF and clinical stage(P＜0.05),but not with the metastasis of lymph node,tumor size,the level of ER, Cerb-2,and P53(P＞0.05).Conclusion25-hydroxy vitamin D3might play an important role in the occurrence and development of breast cancer.

25-hydroxyvitamin D3[25(OH)D3];Breast cancer;Estrogen receptor(ER);Progestrone receptor (PR);Vascular endothelial growth factor;Human epidermal growth factor receptor 2;Tumor suppressor gene p53

R737.9

A

1003—6350（2017）05—0774—03

2016-06-08)

張慧芳。E-mail：78224548@qq.com

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.05.030