T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測在肺外結(jié)核診斷中的應(yīng)用價(jià)值

龔覓++路穎

[摘要]目的 探討肺外結(jié)核應(yīng)用T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測的診斷價(jià)值。方法 選取我院2013年1月～2016年8月收治的200例疑似肺外結(jié)核患者作為研究對象，所有患者均接受結(jié)核抗體檢測、T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)，以臨床確診結(jié)果作為對照，計(jì)算并比較結(jié)核抗體檢測、T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對肺外結(jié)核的診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度。結(jié)果 T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對肺外結(jié)核的診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為96.45%、93.55%、96.00%，與結(jié)核抗體檢測的診斷靈敏度（53.85%）、特異度（64.52%）、準(zhǔn)確度（55.50%）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)診斷肺外結(jié)核的結(jié)果與臨床確診結(jié)果之間的一致性為Kappa=0.725，而結(jié)核抗體檢測與臨床確診結(jié)果之間的一致性為Kappa=0.435。結(jié)論 采用T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)可對肺外結(jié)核完成快速、準(zhǔn)確的診斷，在肺外結(jié)核診斷中具有顯著的診斷價(jià)值，可作為肺外結(jié)核的重要輔助診斷方法。

[關(guān)鍵詞]肺外結(jié)核；診斷；T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)

[中圖分類號] R446.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）02（c）-0123-03

Application value of T cell spot test in the diagnosis of extrapulmonary tuberculosis

GONG Mi1 LU Ying2

1.Hepatology Institute，the Third People′s Hospital of Shenzhen City，Shenzhen 518040，China；2.Department of Clinical Laboratory，the 401st Hospital of PLA，Shandong Province，Qingdao 266071，China

[Abstract]Objective To discuss the diagnostic value of T cell spot test in the diagnosis of pulmonary tuberculosis.Methods 200 cases of suspected pulmonary tuberculosis from January 2013 to August 2016 in our hospital were selected as the object of study review，all patients were detected by T cell spot test and tuberculosis antibody detection，clinical diagnosis result was set as reference，the diagnostic sensitivity，specificity and accuracy of extrapulmonary tuberculosis were calculated and compared between tuberculosis antibody and T cell spot test.Results The diagnostic sensitivity，specificity and accuracy of T cells spot test in extrapulmonary tuberculosis were 96.45%，93.55% and 96.00%，and compared with the sensitivity （53.85%），specificity （64.52%） and accuracy （55.50%） in the diagnosis of tuberculosis antibody detection，the difference was statistically significant（P<0.05）.The consistency between the results of the T cell spot test for the diagnosis of extrapulmonary tuberculosis and the clinical outcome was Kappa=0.725，and the agreement between the results of TB antibody detection and clinical diagnosis was Kappa=0.435.Conclusion The T cell spot test can be used for rapid and accurate diagnosis of pulmonary tuberculosis，it has significant diagnostic value in the diagnosis of pulmonary tuberculosis，which can be used as an important auxiliary diagnosis method for the diagnosis of pulmonary tuberculosis.

[Key words]Pulmonary tuberculosis；Diagnosis；T cell spot test結(jié)核病屬于臨床上最為常見的慢性傳染病之一，肺外結(jié)核主要是指發(fā)生在肺外的結(jié)核病變的統(tǒng)稱，包括淋巴結(jié)核、結(jié)核性腦膜炎、結(jié)核性腹膜炎等多種類型，其起病較為隱匿，加上發(fā)生在肺外部位，臨床癥狀不典型，在臨床診斷過程中容易出現(xiàn)漏診和誤診，對患者的病情控制較為不利[1-2]，因此，臨床上應(yīng)積極尋求對肺外結(jié)核可準(zhǔn)確、快速診斷的方法。T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-spot.TB試驗(yàn)）是近年來應(yīng)用于結(jié)核病診斷中的一種新型檢測手段，本研究對我院的疑似肺外結(jié)核患者進(jìn)行回顧性研究，對其診斷資料進(jìn)行分析，旨在探討T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對肺外結(jié)核的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取我院2013年1月～2016年8月收治的200例臨床癥狀疑似肺外結(jié)核患者作為研究對象，其中男性125例，女性75例；年齡8～79歲，平均（41.05±16.81）歲。經(jīng)痰涂片結(jié)核桿菌培養(yǎng)、X線胸片、實(shí)驗(yàn)室檢查，最終確診為肺外結(jié)核的患者共有169例，包括58例淋巴結(jié)核、41例結(jié)核性胸膜炎、39例結(jié)核性腹膜炎、31例結(jié)核性腦膜炎。所有患者的臨床資料（包括診斷資料）均保存完整，未出現(xiàn)缺失。

1.2方法

所有患者均接受結(jié)核抗體檢測、T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)，其中，結(jié)核抗體檢測主要是對血清標(biāo)本中的38 kD-IgG進(jìn)行測定，采集患者的清晨空腹靜脈血液作為標(biāo)本，以3500 r/min的速度進(jìn)行離心處理，取血清，采用結(jié)核分枝桿菌抗體膠體金檢測試劑盒進(jìn)行檢測，檢測步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作，如采用葡萄球菌A蛋白膠體金綴合物標(biāo)記后，結(jié)核IgG顯示為紅色即為陽性；T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)主要是對外周血抗凝全血中的結(jié)核特異抗原活化效應(yīng)T細(xì)胞進(jìn)行測定；采集患者的外周靜脈血液5 ml置于肝素抗凝管中，采用密度梯度離心法對血液標(biāo)本中的單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行分離，采用T-spot.TB試劑盒，分別在4個(gè)孔中加入陰性對照、陽性對照、抗原A、抗原B，再分別加入單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行孵育，16～20 h后進(jìn)行PBS洗滌，再分別加入抗干擾素抗體進(jìn)行2 h孵育，PBS洗滌，顯色，對斑點(diǎn)數(shù)進(jìn)行計(jì)算，如陰性對照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)為0～5個(gè)且抗原A和抗原B孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)超出陰性對照≥7個(gè)，或陰性對照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)>5個(gè)且抗原A和抗原B孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)至少為陰性對照孔的2倍，即可判定為陽性[3]。

1.3觀察指標(biāo)

對兩種檢測方法的診斷結(jié)果進(jìn)行分析，以臨床確診結(jié)果作為對照，計(jì)算并比較結(jié)核抗體檢測、T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對肺外結(jié)核的診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度，其中，靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性），特異度=真陰性/（真陰性+假陽性），準(zhǔn)確度=（真陽性+真陰性）例數(shù)/總例數(shù)；計(jì)算結(jié)核抗體檢測、T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)與肺外結(jié)核臨床確診結(jié)果之間的一致性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)表示，采用χ2檢驗(yàn)，診斷結(jié)果之間采用Kappa一致性檢驗(yàn)，Kappa<0.4表示一致性較差，Kappa為0.4～0.7表示一致性中等，Kappa>0.7表示一致性良好，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1結(jié)核抗體檢測、T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對肺外結(jié)核診斷結(jié)果的比較

T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對肺外結(jié)核的診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為96.45%、93.55%、96.00%，與結(jié)核抗體檢測的診斷靈敏度（53.85%）、特異度（64.52%）、準(zhǔn)確度（55.50%）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1、表2）。

2.2結(jié)核抗體檢測、T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)與肺外結(jié)核臨床確診結(jié)果之間的一致性分析

T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)診斷肺外結(jié)核的結(jié)果與臨床確診結(jié)果之間的一致性Kappa=0.725，而結(jié)核抗體檢測與臨床確診結(jié)果之間的一致性Kappa=0.435。

3討論

結(jié)核病是臨床上十分常見的一種慢性傳染病，主要由結(jié)核分枝桿菌感染所致，病變多位于肺內(nèi)，同時(shí)，也可累及全身各個(gè)系統(tǒng)和器官，臨床上根據(jù)結(jié)核病患者的病灶分布位置，將結(jié)核病分為肺結(jié)核、肺外結(jié)核[4-6]。肺外結(jié)核主要包括淋巴結(jié)核、結(jié)核性胸膜炎、結(jié)核性腹膜炎、結(jié)核性腦膜炎等，其起病相對較為隱匿，發(fā)病時(shí)由于分布位置的區(qū)別，存在不同的臨床癥狀，且癥狀不具有典型性，導(dǎo)致肺外結(jié)核容易被誤診為其他病變，耽誤患者治療結(jié)核病的最佳時(shí)機(jī)，治療效果欠佳，對患者病情控制十分不利[7-8]，因此，臨床上應(yīng)對肺外結(jié)核的早期診斷方法進(jìn)行積極研究和探討。

目前，臨床上診斷肺外結(jié)核的方法主要為痰涂片結(jié)核桿菌培養(yǎng)，但由于痰涂片結(jié)核桿菌培養(yǎng)的靈敏度較低，對結(jié)核分枝桿菌的檢出率較低，無法對活菌、死菌以及非結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行區(qū)分，往往需要結(jié)合臨床病史、影像學(xué)檢查、實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行綜合診斷，部分患者由于缺乏警惕性，其病史收集并不全面，診斷較為困難，同時(shí)，痰涂片結(jié)核桿菌培養(yǎng)所需時(shí)間較長，不利于及時(shí)對患者進(jìn)行診斷[9-10]。結(jié)核抗體檢測是肺外結(jié)核的常用血清學(xué)檢測手段，主要是利用38 kD抗原對結(jié)核IgG抗體進(jìn)行檢測，但在發(fā)病早期對肺外結(jié)核進(jìn)行診斷，容易出現(xiàn)漏診，導(dǎo)致部分肺外結(jié)核患者未能得到及時(shí)的治療，以至于病情惡化，引發(fā)嚴(yán)重后果[11]。

T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)是一種新型的結(jié)核分枝桿菌感染檢測方法，可對外周血中單個(gè)核細(xì)胞受到抗原刺激后釋放的細(xì)胞因子進(jìn)行有效檢測，從而對患者機(jī)體內(nèi)是否存在結(jié)核分枝桿菌感染進(jìn)行判斷，是當(dāng)前臨床診斷結(jié)核分枝桿菌感染最靈敏的一種方法[12-13]。T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)可在結(jié)核分枝桿菌感染早期階段對結(jié)核特異抗原活化效應(yīng)T細(xì)胞進(jìn)行測定，靈敏度較高，可對肺外結(jié)核病變情況予以靈敏反映，減少漏診，且檢測耗時(shí)相對較短，通常在24 h內(nèi)可得到檢測結(jié)果，有利于對患者病情做出快速診斷，使患者盡早得到較為明確的診斷結(jié)果，并及時(shí)實(shí)施有效治療，避免病情惡化[14-15]。本研究結(jié)果顯示，T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對肺外結(jié)核的診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為96.45%、93.55%、96.00%，均高于結(jié)核抗體檢測結(jié)果（P<0.05），提示T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對肺外結(jié)核具有較高的靈敏度、特異度，在診斷肺外結(jié)核時(shí)作為參考，可有效減少因結(jié)核抗體檢測而出現(xiàn)的漏診、誤診，為肺外結(jié)核的臨床治療提供科學(xué)依據(jù)；T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)診斷結(jié)果與肺外結(jié)核臨床確診結(jié)果之間的一致性Kappa=0.725，而結(jié)核抗體檢測與臨床確診結(jié)果之間的一致性Kappa=0.435，提示T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對肺外結(jié)核的診斷結(jié)果與臨床確診結(jié)果較為一致，且其一致性優(yōu)于結(jié)核抗體檢測，在一定程度上反映了T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對肺外結(jié)核的診斷準(zhǔn)確度，提示在有條件進(jìn)行T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)時(shí)，可將T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)診斷肺外結(jié)核的結(jié)果作為參考，以更加準(zhǔn)確地判斷肺外結(jié)核。

綜上所述，采用T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)可對肺外結(jié)核完成快速、準(zhǔn)確的診斷，在肺外結(jié)核診斷中具有顯著的診斷價(jià)值，可作為肺外結(jié)核的重要輔助診斷方法。

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（收稿日期：2017-01-18 本文編輯：祁海文）