食品中氯霉素標準檢測方法的研究綜述

張國翠

（大連標準檢測技術研究中心，遼寧大連 116000）

食品中氯霉素標準檢測方法的研究綜述

張國翠*

（大連標準檢測技術研究中心，遼寧大連 116000）

對食品中氯霉素檢測標準方法進行了分析，介紹了液相色譜串聯質譜法、氣相色譜-質譜法、酶聯免疫法、氣相色譜法及液相色譜法的檢測原理及應用范圍，同時綜合闡述了各自的優越性及局限性，并對其在實際檢測工作中的應用提出了建議，將酶聯免疫法與色譜-質譜方法相結合，既能夠實現快速篩查，又能夠保證結果的準確性、可靠性，這將是未來氯霉素檢測技術的發展趨勢。

氯霉素；標準方法；優越性；局限性

氯霉素是由委內瑞拉鏈絲菌產生的抗生素。由大衛·戈特利布于1947年從南美洲委內瑞拉土壤內的委內瑞拉鏈霉菌中成功分離，再于1949年合成并引入臨床試驗。氯霉素是世界上首種完全由合成方法大量制造的廣譜抗生素，對很多不同種類的微生物均起作用。因其價格低廉，曾在水產養殖及畜牧行業被廣泛應用，但氯霉素有較強的毒副作用，如果氯霉素在食用動物中殘留，可通過食物鏈傳給人類，長期微量攝入氯霉素，能使人體腸道內的正常菌群失調，甚至會引起致命的再生不良性貧血，特別對新生兒的影響尤為嚴重，對人類的健康造成潛在危害。目前，世界上許多國家都禁止將此藥用于食用動物，歐盟、美國、日本等國家均在法規中對氯霉素殘留限量作出了嚴格規定。我國農業部第235告公告及農辦質4號文件中都明確規定了氯霉素不得檢測。

1 氯霉素的標準檢測方法研究

氯霉素殘留的檢測方法一直是人們關注研究的重點，對食品中氯霉素的標準檢測方法進行分析，結果表明，現行有效的28個標準（包括國家標準、行業標準、地方標準）中，覆蓋的產品種類有水產品、畜禽產品及其他相關產品。根據檢測技術的不同，主要分為以下幾種（對應的檢測標準個數）：液相色譜串聯質譜法（11個）、氣相色譜-質譜法（7個）、酶聯免疫法（5個）、氣相色譜法（5個）、液相色譜法（1個）。2015年12月31日國家標準委員會廢止了放射受體分析法，出臺了新的快速篩查方法——商品化試劑盒檢測方法，其原理基礎是酶聯免疫法。本文針對這幾種檢測方法做相應的分析論述。

1.1 液相色譜串聯質譜法（LC-MS法）

隨著檢測技術的發展，LC-MS法被廣泛應用于獸藥殘留及農藥殘留的檢測。LC-MS法是美國食品和藥物管理局推薦的氯霉素確證方法，同時也是國內實驗室能力驗證的推薦標準檢測方法。在牛奶、雞蛋、蜂蜜、肉制品、水產品及其他食品中都有相應的利用LC-MS測定氯霉素的標準方法，如GB/T 20756—2006《可食動物肌肉、肝臟和水產品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》就成為檢測機構測定水產品及肉制品中氯霉素殘留的首選方法。液相色譜串聯質譜法測定氯霉素的主要原理是：樣品中氯霉素在堿性條件下，用乙酸乙酯提取，提取液旋轉蒸干后，殘渣用水復溶，經正己烷液液分配脫脂，然后經液相色譜串聯質譜儀測定。質譜的靈敏度明顯優于熒光檢測器，本方法的檢出限能夠達到0.1 μg/kg，滿足農辦質4號文件及相關食品法規中對氯霉素的嚴格限定。因氯霉素容易殘留，所以檢測過程中易受污染，液相色譜串聯質譜法的前處理流程相對GC-MS簡單，在一定程度上降低了樣品在檢測過程中被污染的風險，保證了結果的穩定性、可靠性。因此利用LC-MS法測定食品中氯霉素，定性定量均比較準確。

1.2 氣相色譜-質譜法（GC-MS法）

氣相色譜-質譜法是氯霉素檢測較成熟的方法。目前，在蜂蜜、水產品的檢測標準有一部分是利用GC-MS法，并被許多檢驗室采用。如農業部958號公告-14-2007在水產品中檢測的應用。GC-MS檢測的原理是：樣品中的氯霉素用乙酸乙酯提取，用正己烷脫脂，經C18柱凈化，BSTFA+TMCS（99+1） 衍生后，用 GC-MS測定，主要采用電子轟擊源（EI） 和負離子化學源（NCI）。農業部 781號公告 -1-2006中采用NCI源測定雞肉、雞肝中氯霉素，檢出限能夠達到 0.1 μg/kg，在 0.5 μg/kg～5 μg/kg 添加濃度的回收率為60%～110%。由于氣相色譜-質譜法測定氯霉素的前處理過程涉及過凈化柱和衍生，所以回收率不高，而且也增加了檢測過程中被污染的風險。不過由于各個檢驗室條件的限制，該方法在其適用范圍內也常被采用，是農業部能力驗證的推薦方法之一。

1.3 酶聯免疫法（ELISA法）

酶聯免疫法檢測技術發展比較迅速，目前，很多學者對此方法進行不斷的研究與探索，如張勝幫等人的《酶聯免疫檢測法測定水產品中殘留氯霉素的研究》。因此該方法在氯霉素的檢測標準方法中占有一定的比例，適用范圍包括蜂蜜、蜂王漿及其他食品。GB/T 18932.21—2003《蜂蜜中氯霉素殘留量的測定方法 酶聯免疫法》中氯霉素的檢出限為0.30 μg/kg，滿足食品法規中氯霉素限定的要求。酶聯免疫法測定的基礎是抗原抗體反應。微孔板包被有針對兔IgG（氯霉素抗體） 的羊抗體。加入氯霉素抗體、氯霉素酶聯記物、氯霉素標準或樣品溶液，游離氯霉素與氯霉素酶聯記物競爭氯霉素抗體結合位點，同時氯霉素抗體也與固定的羊抗體結合。沒有結合的氯霉素酶聯記物在洗滌步驟中被去除，將酶結合物加入到孔中并孵育，結合的氯霉素酶聯記物將無色的酶結合物轉化為藍色的產物，加入反應終止液后使顏色由藍色變成黃色。用酶聯分析儀于波長450 nm處進行吸光度測定。應用ELISA技術研發出氯霉素檢測商品化試劑盒，檢測下限可達50 ng/L。市場上比較知名的品牌有 BF（德國 R-Biopharm公司出品）、ED（EURO-DIAGNOSTICA公司出品）、RD（美國公司出品）、PRK（大連普瑞康公司出品） 等。有相關文獻對不同試劑盒法檢測水產品中氯霉素的測定結果進行了分析比較，檢測結果均比較接近。1998年9月德國§35 LMBG（01.006 8） 法規里關于奶類產品中氯霉素殘留檢測的參考方法正式出臺。2017年7月1日，我國國家質檢總局正式實施SN/T 4537.2—2016《商品化試劑盒檢測方法》。酶聯免疫法具有靈敏度高、精密度高、特異性強、對儀器設備和人員素質要求低以及樣品前處理簡單等優點，適于現場監控和大規模樣品篩選。但該方法的影響因素較多，易出現假陽性的結果。因此，可利用本方法作篩查，再用LC-MS或GC-MS確證，可獲得更加準確的檢測結果。

1.4 氣相色譜法及液相色譜法

氣相色譜法及液相色譜法屬于比較早的、國際公認的氯霉素檢測方法。液相色譜法穩定性高、假陽性少，但是由于檢測器的限制，檢出限不夠理想。氣相色譜法靈敏度高，分離效果好，但是由于前處理過程需要衍生，操作比較繁瑣，限制了氣相色譜法的應用。從檢測標準的層面上可以看出，氣象色譜法及液相色譜法相對LC-MS、GC-MS而言，現階段的應用還有一定差距，一方面隨著質譜技術的不斷發展，檢測技術越來越向高靈敏度、高精密度發展；另一方面由于世界各國對食品中氯霉素殘留問題的重視，氯霉素殘留檢測方法的檢出限已經在國際貿易合作中成為新的技術壁壘，因此快速靈敏的檢測技術是十分必需的，這就限制了氣相色譜法及液相色譜法在氯霉素殘留檢測中的廣泛應用。

2 總結與建議

通過對食品中氯霉素標準檢測方法的分析比較，可見質譜法已成為目前檢測氯霉素的主要標準方法，對于各個檢測機構而言，利用LC-MS法或GC-MS法測定食品中氯霉素，已成為首選的標準檢測方法。但質譜法仍需不斷完善，以求簡化操作過程，降低檢測成本。隨著檢測技術的不斷發展以及突發現場樣品量大的問題，ELISA技術的快速篩查也成為必要的檢測方法，它屬于半確證的篩查方法。由于每一種方法都有各自的優越性及一定的局限性，所以將酶聯免疫法與色譜-質譜方法相結合，既能夠實現快速篩查，又能夠保證測定結果的準確性、可靠性，這是未來檢測技術的發展趨勢。2017年，國家衛計委和食藥監總局對食品及食品相關標準進行了整合、修訂、廢止，其中廢止了大部分氯霉素的地方檢測標準及進出口行業標準，使檢測標準更加規范化，在檢測技術上體現了與時俱進，同時為食品監管工作提供了有力的技術保障。

［1］高林，陸怡，史賢明.水產品中氯霉素殘留檢測技術的研究進展［J］.現代農業科技，2009（20）：340-341.

［2］陳世鐸.石室秘密錄［M］.上海:上海第二軍醫大學出版社，2005.

［3］國家質量監督檢驗檢疫局.SN/T 4537.2—2016商品化試劑盒檢測方法氯霉素 方法二［S］.北京：中國標準出版社，2016：1-3.

［4］曹巧玲，楊凱，武澤新.氯霉素的毒性作用和檢測方法研究進展［J］.職業與健康，2013，29（16）：2 095-2 097.

［5］ 中華人民共和國秦皇島出入境檢驗檢疫局.GB/T 20756—2006可食動物肌肉、肝臟和水產品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法［S］.北京：中國標準出版社，2006：1-7.

［6］趙健，桂文君，王美英，等.食品中氯霉素檢測方法研究進展［J］.安徽農學通報，2007，13（17）:39-41.

［7］中華人民共和國農業部.農業部1025號公告-26-2008動物源食品中氯霉素殘留檢測酶聯免疫吸附法［S］.北京：中國標準出版社，2009：1-3.

［8］高茂根，楊瑞章，王太全，等.3種ELISA試劑盒檢測動物產品中氯霉素殘留的應用［J］.中國獸醫雜志，2009，45（9）:57-58.

Areview ofthe standard methods for the determination ofchloramphenicolin food

ZHANGGuocui*
（Dalian standard testingtechnologyresearch center，LiaoningDalian 116000，China）

In this paper,the standard method of chloramphenicol detection in food was analyzed,and the detection principle and application scope are introduced about liquid chromatographytandemmass spectrometry,gas chromatography-mass spectrometry,enzyme-linked immunoassay,gas chromatography and liquid chromatography.At the same time,the advantages and limitations of each are elaborated,and some suggestions are put forward for practical testing.Combining enzyme-linked immunoassay and chromatography-mass spectrometry method can achieve rapid screening and ensure the accuracy and reliability of the results,and it is the future development trend of chloramphenicol detection.

chloramphenicol；standard method；superiority；limitation

TS207.4

A

1673-6044（2017）03-0013-02

10.3969/j.issn.1673-6044.2017.03.006

*張國翠，女，1983年出生，2010年畢業于東北電力大學應用化學專業，工程師。

2017-08-06