高效液相色譜法測定葉酸片中葉酸含量

中山大學附屬第一醫院（510080）黃潔文 雷會雯

葉酸功能主治貧血，療效較好[1]。葉酸片中的葉酸含量，決定藥物治療效果[2]。有研究表明，采用高效液相色譜法，可有效測定葉酸片中的葉酸含量，效果好，準確度高[3]。本文采用甲醇-水-冰醋酸系統作為流動相，通過試驗的方法，在利用高效液相色譜法的基礎上，對葉酸片中的葉酸含量進行了分析，試驗報告如下。

1 測定儀器與試劑

1.1 測定儀器 測定采用高效液相色譜儀作為主要儀器。另外配合以下儀器完成試驗：①UV檢測器。②超聲波清洗器。③電子天平。④蒸餾器。

1.2 測定試劑 測定包括如下試劑：①葉酸片。②葉酸對照品。③甲醇。④氨水。⑤冰乙酸。

2 測定方法與結果

2.1 測定準備

2.1.1 溶液的配制 共配制兩種溶液，一種為供試品溶液，即葉酸片溶液，另一種為對照品溶液，即由所準備的葉酸對照品配制的溶液。供試品溶液配制：①取葉酸片，共30片。②稱量，并研磨。③取研磨后的供試品2.5mg置于容量瓶中。④加入氨水（0.5%/15ml）。⑤超聲15min。⑥稀釋，搖勻并過濾。⑦過濾直至達到溶液要求標準。對照品溶液配制：①取葉酸對照品25.1mg置于容量瓶中。②采用氨水（5%）溶解。③稀釋，搖勻并過濾。④過濾直至達到溶液要求標準。

2.1.2 色譜條件 流動相：甲醇-水-冰乙酸。色譜柱：Diamonsil C18柱。柱溫：室內溫度。流速：1.0ml/min。進樣量：20μl。

2.2 測定方法 以試驗為主要測定方法，高效液相色譜法為主要測定依據，展開試驗，具體測定葉酸含量。包括色譜行為與系統適應性試驗、線性關系試驗、精密度試驗、重復性試驗、穩定性試驗、回收率試驗與樣品含量測定試驗。色譜行為與系統適應性試驗方法：①室內試驗。②流速：1.0ml/min。進樣量：20μl。③記錄色譜圖。線性關系試驗方法：①取葉酸對照品溶液0.5ml～4.5ml，（每次增加量為1ml）。②將所取對照品溶液置于容量瓶中。③以水稀釋，并搖勻。④進樣量：20μl。⑤觀察峰面積。⑥做線性回歸。精密度試驗方法：①取葉酸對照品溶液0.5ml～4.5ml，（每次增加量為1ml）。②重復進樣。③進樣量：20μl。④觀察峰面積。重復性試驗方法：①取葉酸樣品。②以2:2為標準，制備溶液。③進樣量：20μl。④觀察峰面積。穩定性試驗方法：①以溶液放置時間為變量，測定溶液的穩定性。②取葉酸樣品溶液。③控制室溫平衡。④放置0h、1h、4h、6h、8h、24h。⑤進樣量：20μl。⑤觀察峰面積?；厥章试囼灧椒ǎ孩偃∪~酸樣品。②將樣品分為9份。③以2:2為標準，制備溶液。④進樣量：20μl。⑤觀察峰面積。⑥計算回收率。葉酸含量測定試驗方法：①取葉酸樣品30片。②研磨。③以2:2為標準，制備溶液。④進樣量：20μl。⑤觀察色譜圖。⑥取葉酸對照品，重復上述試驗步驟。⑦觀察峰面積。

2.3 測定結果 ①色譜行為與系統適應性試驗測定結果 葉酸保留時間10min，與相鄰峰分離度在1.5以上，拖尾因子1.03。②線性關系試驗測定結果 葉酸在20.8～180.72μg/ml范圍內，線性關系良好。③精密度試驗測定結果 RSD=0.43%，測定結果表明測定儀器具有較好的精密度。④重復性試驗測定結果 RSD=1.7%，測定結果表明重復性較好。⑤穩定性試驗測定結果 RSD=0.59%，測定結果表明溶液穩定性較好。⑥回收率實驗測定結果 RSD=1.5%，測定結果表明測定準確度較高。⑦葉酸含量試驗測定結果 葉酸片標示百分含量為100.5%。

3 結論

采用高效液相色譜法，測定葉酸片的葉酸含量，需同時制備葉酸樣品與對照品兩種溶液，針對兩種溶液同時展開試驗，結果準確度更高[4]。試驗過程中，控制色譜條件中的進樣量較重要，另外，在某些試驗中，需控制好室內溫度，避免增加變量，影響測定結果的準確度[5]。本文研究發現，根據試驗條件的不同，葉酸的穩定性也呈現出了差異：①稀堿條件：葉酸穩定性強，易溶。②水溶液條件下：葉酸穩定性差。

綜上所述，高效液相色譜法測定葉酸片中葉酸含量可靠性強、準確度高，可將其用于葉酸片葉酸含量的測定中，提高測量結果準確度，可以以此作為葉酸片葉酸含量的檢測方法，評價葉酸片臨床應用效果，進一步提高我國藥物研制領域發展水平，并為貧血等的治療，提供質量更高的藥物作為依靠。