Foxp3在宮頸癌中的表達及臨床意義

陰春霞,賈云霄,曲紅光,陳明星,辛精衛*,金光華

(1.長春市婦產醫院,吉林 長春130041;2.吉林大學中日聯誼醫院;3.長春市中心醫院 普外科)

Foxp3在宮頸癌中的表達及臨床意義

陰春霞1,賈云霄1,曲紅光1,陳明星2,辛精衛2*,金光華3

(1.長春市婦產醫院,吉林 長春130041;2.吉林大學中日聯誼醫院;3.長春市中心醫院 普外科)

Foxp3(Forkhead box protein 3)是轉錄因子家族中的一個成員，是CD4+CD25+調節性T細胞(Tregs) 特異的標志物[1，2]。在一些腫瘤病人的腫瘤組織和外周血中均存在Foxp3表達增強和Tregs增多的現象[3，4]，其通過協助腫瘤細胞逃避免疫系統的監視，促進腫瘤的免疫逃逸。而Foxp3是Treg發揮作用的關鍵調節基因。本研究通過對宮頸癌、各級別的宮頸癌上皮內瘤變(CIN)以及正常宮頸組織及血液中Foxp3 表達情況的分析,分析Foxp3在宮頸癌發生中的作用。

1 資料與方法

1.1 對象和分組

選取2001- 2013年就診于長春市婦產醫院接受婦產科手術治療病人的血液和術后石蠟標本,其中CIN Ⅰ-Ⅱ級20份( CIN Ⅰ-Ⅱ級組),CINIII級20份( CINⅢ級組) ,宮頸癌60份(宮頸癌組),因宮頸病變行宮頸錐切術術后病理明確為慢性宮頸炎的標本20份(對照組)。CIN Ⅰ-Ⅱ級組病人的年齡30-65歲；CIN Ⅲ級組病人的年齡36-62歲；宮頸癌組病人的年齡39-62歲；對照組病人的年齡43-55歲。各分組之間年齡無明顯差別。宮頸癌組中鱗癌55例,腺癌5例；并根據2009年國際婦產科聯盟(FIGO)分期法分期。

1.2 方法

1.2.1 石蠟標本Foxp3的檢測 入選蠟塊切片,進行Foxp3免疫組織化學染色(SP法),由病理科有經驗的醫師重新閱讀HE染色片,復核病理診斷及組織學分類。

1.2.2 血液標本的處理 采集血樣立即室溫下提取淋巴細胞。實驗操作步驟按照說明書進行。

1.2.3 人血液中Foxp3的檢測 取1×106PBMC細胞懸液離心，甲醛固定后打孔，加入熒光標記的Foxp3抗體標記，4℃避光保存，上機檢測。

1.2.4 免疫組織化學結果判定 采用雙盲法對結果進行觀察。Foxp3定位表達主要在細胞核和細胞質中,鏡下呈棕黃色顆粒。半定量分析標準如下：無陽性的染色細胞為陰性(-)；0-25%為弱陽性(+/-)；25%-50%為陽性(+)；50%-75% 為中等陽性(++)；>75%為強陽性(+++)。

1.2.5 病例隨訪 首次手術時間定為隨訪開始，所有病人均獲得完整隨訪資料。60例宮頸癌病人的中位生存時間是37個月(6-98個月)。

1.3 統計學方法

采用SPSS15.0軟件進行統計學處理(組間比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman秩相關檢驗)。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 Foxp3蛋白的表達

免疫組織化學結果顯示(圖1),在對照組和CIN組中,Foxp3 表達并不明顯；而在宮頸癌組中,Foxp3表達的陽性率為61.7%,與其他三組比較差異均有統計學意義(P>0.01)(表1)。流式細胞術結果顯示在對照組和CIN組中,Foxp3 表達并不明顯;而在宮頸癌組中,Foxp3表達的陽性率為60.0%,明顯高于對照組和CIN組(見圖2)。血液與組織中聯合表達Foxp3的陽性率為45.0%明顯高于對照組和CIN組(表1)。

表1 Foxp3在各組內的陽性表達情況(n,% )

注:組間比較：P<0.05,具有統計學意義。

圖1 組織中Foxp3蛋白的表達

圖2 血液中Foxp3的表達

2.2 宮頸癌病人Foxp3表達與臨床病理學參數的關系

檢測結果顯示,Foxp3表達僅與FIGO分期明顯相關(P=0.038)。而與其他臨床及病理學參數無相關性(P>0.05)。其中,有淋巴結轉移的11例病人中,血液中Foxp3陽性表達病人占72.7%(8/11),組織中Foxp3陽性表達病人占63.6%(7/11)，高于無淋巴結轉移病人(27.3%和36.4%)；而在宮頸鱗癌病人中,血液中Foxp3 表達陽性的比例達60.0%(33/55),組織中Foxp3陽性表達病人占63.6%(35/55)，高于宮頸腺癌病人中的比例(40.0%和36.4%),但上述差異均無統計學意義(P>0.05)(表2)。

表2 宮頸癌病人Foxp3表達與臨床病理學參數的關系(n)

2.3 血液與宮頸癌組織Foxp3表達之間的關系

在癌組織中Foxp3陽性表達的病人中血液Foxp3陽性表達者占51.3%(19/37),血液中Foxp3陽性表達的在組織Foxp3 陽性組中亦高表達(47.2%,17/36),Spearman秩相關檢驗提示二者存在正相關(P=0.017),表明組織及血液中Foxp3的表達具有協同表達的可能性。

3 討論

Foxp3作為Tregs行使功能的決定因子，參與局部免疫應答，其功能過度發揮時反而促進腫瘤的免疫逃逸[3-6]。已有研究證實，在多種腫瘤病人外周血、腫瘤組織以及淋巴結中存在著Foxp3+數量的增加，腫瘤中Foxp3+Tregs的數量多少與腫瘤進展程度和病人預后密切相關[7，8]。 關于Foxp3在宮頸癌腫瘤局部及血液中的表達尚缺乏系統的研究。Woo等[5]報道Foxp3+Tregs在非小細胞宮頸癌外周血表達增高。Schneider等[3]檢測到宮頸癌腫瘤標本和淋巴結標本中Foxp3的表達增多，并伴有NK細胞數目的減少。Shimizu等[4]采用免疫組化對100例非小細胞宮頸癌病人腫瘤組織標本Foxp3的檢測發現，腫瘤浸潤的Foxp3+Tregs數目與較差的無復發生存期密切相關。我們的研究發現在腫瘤局部及血液中均存在Foxp3表達的增高，明顯高于CIN和正常對照組，且血液中Foxp3的表達與腫瘤局部的表達明顯相關。由此我們做出如下假設：在宮頸癌病人的血液中Foxp3表達增高，并在宮頸癌腫局部發揮作用，導致了癌灶局部免疫應答減弱或缺失，促進了腫瘤的免疫逃逸，導致了腫瘤的發生發展。另外CIN病人血液中及腫瘤局部的表達高于正常對照組，但差異無統計學意義。一定程度說明Foxp3參與宮頸癌的發生也是一個漸變的過程。

另外，我們的研究還發現，Foxp3在宮頸癌腫瘤局部和血液的陽性表達與宮頸癌FIGO分期相關，并在淋巴結轉移病人中的表達明顯高于無淋巴結轉移，說明Foxp3誘導的免疫逃逸也參與了宮頸癌病人淋巴轉移的過程，并一定程度上提示病人不好的預后。由此我們認為Foxp3在宮頸癌局部和血液的表達，尤其是血液中Foxp3的表達，可以作為一個輔助的評估病人疾病嚴重程度及術后隨訪的指標。另外CIN病人血液中及局部也存在Foxp3一定程度的增高，從量變到質變的角度考慮，通過生物靶向或免疫療法逆轉CIN病人Foxp3的高表達[9]，能否阻止CIN進一步惡變為宮頸癌甚至進一步使CIN逆轉，有待于進一步的研究。

綜合以上實驗結果，我們研究發現Foxp3在宮頸癌組織及血液中高表達，并與腫瘤的分期及生物學行為密切相關，而且Foxp3在腫瘤組織和血液中的表達顯著正相關，協同促進了宮頸癌的發生發展。由此我們認為Foxp3的表達升高與宮頸癌的發生和發展關系密切,兩者既可作為宮頸癌的篩查、術前疾病評估和術后隨訪的輔助指標，也為臨床靶向干預提供了理論依據。

[1]Brunkow ME,Jeffery EW,Hjerrild KA,et al.Disruption of a new forkhead/winged-helix protein,scurfin,results in the fatal lymphoproliferative disorder of the scurfy mouse[J].Nat Genet,2001,27(1):68.

[2]Li B,Samanta A,Song X,et al.FOXP3 ensembles in T-cell regulation[J].Immunol Rev,2006,212:99.

[3]Schneider T,Kimpfler S,Warth A,et al.Foxp3+ regulatory T cells and natural killer cells distinctly infiltrate primary tumors and draining lymph nodes in pulmonary adenocarcinoma[J].J Thorac Oncol,2011,6(3):432.

[4]Shimizu K,Nakata M,Hirami Y,et al.Tumor-infiltrating Foxp3+ regulatory T cells are correlated with cyclooxygenase-2 expression and are associated with recurrence in resected non-small cell lung cancer[J].J Thorac Oncol,2010,5(5):585.

[5]Woo EY,Yeh H,Chu CS,et al.Cutting edge:Regulatory T cells from lung cancer patients directly inhibit autologous T cell proliferation[J].J Immunol,2002,168(9):4272.

[6]Ohara M,Yamaguchi Y,Matsuura K,et al.Possible involvement of regulatory T cells in tumor onset and progression in primary breast cancer[J].Cancer Immunol Immunother,2009,58(3):441.

[7]Jaberipour M,Habibagahi M,Hosseini A,et al.Increased CTLA-4 and FOXP3 transcripts in peripheral blood mononuclear cells of patients with breast cancer[J].Pathol Oncol Res,2010,16(4):547.

[8]Deng L,Zhang H,Luan Y,et al.Accumulation of Foxp3+T regulatory cells in draining lymph nodes correlates with disease progression and immune suppression in colorectal cancer patients[J].Clin Cancer Res,2010,16(16):4105.

[9]Loddenkemper C，Hoffmann C，Stanke J， et al.Regulatory (FOXP3+)T cells as target for immune therapy of cervical intraepithelial neoplasia and cervical cancer[J].Cancer Sci，2009，100(6)：1112.

吉林省衛生廳課題(2012Z136)

1007-4287(2017)03-0495-03

2016-04-17)

*通訊作者