高通量血液透析患者淋巴細胞計數及分型表達的分析

王松巖,李春光,馬 爽,馬寅芙,李 兵,王 磊,張世英*

(1.吉林省人民醫院 腎內科，吉林 長春130021；2.長春市中醫院)

*通訊作者

高通量血液透析患者淋巴細胞計數及分型表達的分析

王松巖1,李春光2,馬 爽1,馬寅芙1,李 兵1,王 磊1,張世英1*

(1.吉林省人民醫院 腎內科，吉林 長春130021；2.長春市中醫院)

維持性血液透析患者各種感染及腫瘤的發病率較普通人群均明顯增高，感染和腫瘤的發生與機體的免疫功能低下有一定關系，而淋巴細胞與機體免疫功能相關。本研究旨在探討高通量血液透析患者淋巴細胞計數及分型表達的變化，并進行分析，為臨床上改善患者的免疫功能，減少透析患者感染及腫瘤的發生提供一定的理論依據。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取吉林省人民醫院腎內科于2015年1月-2016年9月間住院且臨床資料完整的患者共67例為研究對象。按腎功能指標將研究對象分為3組，高通量血液透析組(透析齡大于3個月)、腎功能異常未透析組以及腎功能正常組。回顧性分析三組患者淋巴細胞計數及分型表達的情況。其中高通量血液透析組患者共25例(男女比例8∶17)，年齡29-90歲(平均年齡69.680±14.820歲)。透析齡為4月-16年(平均透析齡為5.733±3.763年)。原發病為慢性腎小球腎炎者11例，糖尿病腎病者5例，高血壓良性腎小動脈硬化者3例，慢性腎盂腎炎者1 例，藥物性腎損害4例，痛風腎1例。腎衰竭未透析組患者共22例(男女比例9∶13)，年齡39-83歲(平均年齡67.182±12.861歲)。原發病為慢性腎小球腎炎者10例，糖尿病腎病者3例，高血壓良性腎小動脈硬化者7例，慢性腎盂腎炎者1 例，藥物性腎損害1例。肌酐范圍210-1146 μmol/L，平均為487.068±254.036 μmol/L。腎功能正常組患者共20例(男女比例7:13)，年齡28-92歲(平均年齡59.9±15.573歲)。原發病為慢性腎小球腎炎者7例，糖尿病腎病者2例，高血壓良性腎小動脈硬化者5例，腎病綜合征4 例，動脈硬化2例。

高通量血液透析患者以動靜脈內瘺或長期深靜脈導管為血管通路。高通量血液透析器采用德國Fresenius公司生產的High-Flux FX-80透析器，膜表面積為1.8 m2。采用標準碳酸氫鹽透析液，超純凈透析用水。Fresenius 4008 B透析機，透析液流量500 mL/min，血流量220-280 mL/min，透析溫度36.0-37.0℃，透析時間4小時/次，3次/周，以干體重為目標設置超濾量。低分子肝素抗凝。規律血液透析基礎上給予常規藥物治療。所有入組患者入組時無感染、腫瘤及應用免疫制劑。

1.2 實驗材料

細胞表面標志單克隆抗體CD3/CD4/CD8三標(即CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PE-CY5)、CD3-FITC/CD19-PE、CD3-FITC/(CD16+56)-PE，溶血素Optilyse C等購于Beckman Coulter公司。

1.3 實驗方法

所有患者于入院當日或次日空腹靜脈采血檢測血常規及淋巴細胞分型。其中血常規檢查應用日本SYSMEX公司常規血細胞自動分類計數儀；淋巴細胞分型檢測應用美國Beckman Coulter公司生產的EPICS XL型流式細胞儀。將100 μl EDTA抗凝全血加20 μl抗體，室溫避光孵育15分鐘；加入500 μl溶血素，混勻，室溫避光孵育10分鐘；加入PBS 2 ml，混勻，1 500轉/分鐘離心5分鐘，棄上清液，加500 μl PBS上流式細胞儀檢測。

1.4 統計學處理

白細胞計數及淋巴細胞分型屬于計量資料，數據以均數±標準差表示，應用SPSS 17.0統計軟件進行統計學分析，透析組、未透析組及腎功正常組三組之間比較采用單因素方差分析，檢驗水準取α=0.05，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組患者白細胞及淋巴細胞總數的變化(見表1) 三組患者白細胞總數均在正常范圍，三組比較無明顯差異。與腎功能正常組比較，未透析組下降，高通量血液透析組降至最低。高通量血液透析組患者淋巴細胞總數較腎功正常組明顯降低，P=0.003，差異顯著。高通量血液透析組患者淋巴細胞比率較腎功正常組明顯降低，P=0.033，差異顯著。

表1 三組患者白細胞及淋巴細胞計數情況

注： 與腎功正常組比較*P<0.01，#P<0.05。

2.2 三組患者淋巴細胞分型表達的變化(見表2) (1)與腎功正常組患者比較，CD3+淋巴細胞所占比率在腎衰未透析組水平升高，P<0.05，差異顯著；高通量血液透析組較未透析組有所下降，但與腎功正常組患者比較差異不顯著。(2)與腎功正常組患者比較，高通量血液透析組及未透析組患者CD3+CD8+淋巴細胞所占比率有所升高，但差異不顯著。(3)高通量血液透析組及未透析組患者CD3+CD4+淋巴細胞所占比率與腎功正常組患者比較無明顯差異。(4)隨著腎功能進展，NK細胞所占比率呈降低趨勢。與腎功能正常組患者比較，腎衰未透析組患者NK細胞所占比率明顯降低，差異顯著；高通量血液透析組患者NK細胞所占比率較腎衰未透析組水平明顯升高，P=0.03，差異顯著，基本達到腎功正常組水平。(5)隨著腎功能進展，B淋巴細胞所占比率呈降低趨勢，與腎功能正常組患者比較，未透析組患者B淋巴細胞所占比率明顯降低，高通量血液透析組亦明顯降低。三組之間兩兩比較P=0，差異顯著。

表2 三組患者淋巴細胞分型表達情況

注：與腎功正常組比較,*P<0.01，#P<0.05。

3 討論

研究表明尿毒癥毒素及干預性治療可使尿毒癥及血液透析患者出現免疫功能異常[1,2]。本研究將高通量血液透析患者與腎功能正常患者及腎功能異常但未行透析的患者進行比較，來探討高通量血液透析對患者淋巴細胞計數及分型表達的影響。

既往研究表明血液透析患者與健康對照組相比淋巴細胞減少[3,4]。我們的研究也得出了一致的結果：三組患者盡管白細胞總數均在正常范圍，但是隨著腎功能進展，淋巴細胞總數呈下降趨勢，高通量血液透析患者淋巴細胞計數及比率均較腎功能正常組患者明顯下降，差異顯著。而關于CD3+、CD3+CD4+及CD3+CD8+所占比率在慢性腎臟病患者與健康對照組的比較，目前不同的研究結果結論尚不完全相同[3,5,6]。本研究結果表明隨著腎功能進展，CD3+、CD3+CD4+及CD3+CD8+所占比率呈升高趨勢，CD3+淋巴細胞所占比率在腎衰未透析組水平較腎功正常組明顯升高，差異顯著；高通量血液透析后，CD3+、CD3+CD4+及CD3+CD8+所占比率較未透析組有所下降，但仍高于腎功能正常組，差異不顯著。CD4+/CD8+三組間差異不顯著。

既往文獻報道血液透析患者B淋巴細胞數低于正常對照組[7,8]。在本研究中，三組患者B淋巴細胞所占比率隨著腎功能的進展呈降低趨勢，與腎功能正常組患者比較，腎衰未透析組患者明顯降低，高通量血液透析組患者降至最低，三組之間兩兩比較差異顯著。項方方等曾研究B細胞數和有效腎小球濾過率(eGFR)的關系，并證實二者呈獨立正相關[5]，本研究進一步證明了這種相關性。也有體外研究表明尿毒癥(包括透析與未透析)患者B淋巴細胞減少可能部分歸因于與Bcl-2基因表達下降相關的細胞凋亡[8]。

自然殺傷(NK)細胞為機體提供了針對感染和腫瘤的第一線免疫防御。NK細胞不僅具有殺傷功能，在某些病理條件下還可以分泌細胞因子參與機體的免疫調節。本研究NK細胞分析結果表明：與腎功正常組患者比較，腎衰未透析組患者NK細胞所占比率明顯降低，差異顯著；高通量血液透析組患者明顯升高，基本達到腎功正常組水平。未透析組患者NK細胞計數降低可能與腎臟的清除能力降低相關[9]；而血液透析患者盡管NK細胞計數與腎功正常組比較沒有差異，但血液透析患者的慢性炎癥狀態可使NK細胞zeta鏈下調，導致NK細胞活性降低[10],這或許是血液透析患者容易發生感染、腫瘤等的一個原因，而長期透析可以改善NK細胞的細胞毒活性[9]。

綜上，本研究結果表明，高通量血液透析患者存在淋巴細胞總數及分型表達異常，包括淋巴細胞總數下降及B淋巴細胞所占比率下降等，而NK細胞所占比率盡管與腎功正常組無明顯差異，但可能存在活性降低。這些因素可能是導致高通量血液透析患者免疫功能低下，易于發生感染、腫瘤等疾病的一個原因。因此，在臨床上可以采取相應的干預措施來調節血液透析患者的淋巴細胞功能，增強免疫力，改善預后。

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1007-4287(2017)03-0519-03

2016-12-22)