黎藥裸花紫珠與膽木組合的藥效學研究高香奇李誠叢

周星

【摘要】目的：篩選出黎藥裸花紫珠和膽木最佳藥效組合，為開發新藥做準備。方法：對裸花紫珠和膽木提取物的組合進行包括抗炎、鎮痛、抗菌和解熱等藥效學研究。結果：裸花紫珠和膽木的水、醇提取物的單方和組方在劑量為052g/kg·bw時，對小鼠均有一定的抗炎、鎮痛作用；劑量為04g/kg·bw時，兩者單方對內毒素致熱家兔具有解熱作用；組方裸花紫珠醇提物-膽木醇提物（026g/kg：026g/kg）對內毒素致熱家兔的解熱效果更佳；兩者的水、醇提取物單方和組方均有一定的抑菌作用。結論：組方裸花紫珠醇提物-膽木醇提物（026g/kg：026g/kg）的抗炎、鎮痛、解熱和抗菌等作用最佳。

【關鍵詞】黎藥；裸花紫珠；膽木；最佳組合；藥效學

【中圖分類號】R2855【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）06-0034-05

裸花紫珠（Callicarpa nudiflora Hooket Arn）為馬鞭草科植物，主要分布在我國的廣東、廣西和海南。裸花紫珠的藥用歷史悠久，在海南黎族民間也廣泛的應用，海南黎族稱裸花紫珠為“雅介龍”，應用在各種創傷流血、婦科炎癥、腰骨痛及皮膚疥瘡等[1]。裸花紫珠含有黃酮甙、酚類等多種成分，研究表明，裸花紫株可抑制毛細血管通透性，對早期的炎癥滲出、腫脹有明顯的抗炎性反應作用[2]；能明顯縮短出、凝血時間，止血效果顯著[3-4]；還能抑制多種細菌，可預防繼發性感染的發生[4]。

膽木（Nauclea officenalis Pierre ex Pitard）為茜草科植物，其枝、樹皮等具有藥用價值，主要分布于廣東、海南及廣西等省區，含有黃酮苷、酚類，主要用于外感發熱、急性黃疸、胃痛、急性扁桃體炎及咽喉炎等。從莖分離物（主要為生物堿）具有一定的抑菌作用。

裸花紫珠和膽木一般都單獨使用，這在很大程度上限制了二者在臨床上的廣泛應用，本研究將對二者組合的藥效學進行研究，針對性地協同增強二者的抗炎、鎮痛、解熱和抗菌等主要功效，篩選出二者的最佳藥效學組合，增強藥效的同時，以其減少藥物使用量。現將研究結果報道如下。

1儀器與材料

11儀器AEG-120G型電子分析天平（島津）；UV-2401PC紫外分光光度計（島津）；YLS-5Q臺式超級控溫燙傷儀；HW-3智能熱原儀（天大天發）。

12藥物裸花紫珠水提取物（簡稱A）、裸花紫珠60%乙醇提取物（簡稱B）、膽木水提取物（簡稱C）、膽木60%乙醇提取物（簡稱D），以上提取物由海南省藥物研究所自制。實驗受試物根據具體實驗要求配制。陽性對照藥阿司匹林腸溶片（批號：20080106，規格：25mg/片，昆明云健制藥有限公司）。

13動物SPF級昆明種小鼠、普通級家兔，由長沙市開福區東創實驗動物科技服務部提供，生產許可證號：SCXK（湘）2009-0012。

2方法

21組方抗炎作用篩選實驗

211小鼠腹腔毛細血管通透性試驗[5]取小鼠240只，雌雄各半，體重為18～22g，隨機分成24組，每組10只，依次為陰性對照組、陽性對照組、A～D四種提取物的各劑量（026g/kg、052g/kg和104g/kg）組和A∶C（039g/kg∶013g/kg）、A∶C（035 g/kg∶017 g/kg）、A∶C（026 g/kg∶026 g/kg）、A∶C（017 g/kg∶035 g/kg）、A∶C（013 g/kg∶039 g/kg）、B∶D（039 g/kg∶013 g/kg）、B∶D（035 g/kg∶017 g/kg）、B∶D（026 g/kg∶026 g/kg）、B∶D（017 g/kg∶035 g/kg）、B∶D（013 g/kg∶039 g/kg）等各組合組各組分別按20mL/kg的容積灌胃給藥，灌服相應的藥液，每天1次，各組小鼠連續灌胃給藥3d。末次給藥后1h，[JP]各鼠尾靜脈注射05%伊文思藍生理鹽水01mL/10g，隨即腹腔注射06%醋酸02mL/只。20min后小鼠脫臼處死。剖開腹腔，用6mL生理鹽水數次沖洗腹腔，收集并合并沖洗液于離心管內，加入生理鹽水至于10mL，[JP2]以3000r/min，離心15min，取出上清液于分光光度計590nm波長處比色，以吸光度表示伊文思藍滲出量。

212小鼠鼠耳腫脹試驗[6]取小鼠240只，雌雄各半，體重為18～22g，隨機分成24組，每組10只，[JP2]各組分別按20mL/kg的容積灌胃給藥，灌服相應的藥液，每天1次，各組小鼠連續灌胃給藥3d。末次給藥后1h，給小鼠右耳涂以二甲苯003mL/只，左耳作對照，20min后處死小鼠，用直徑6mm的打孔器將雙耳同部位等面積切下，精密稱量，按以下公式計算各值。腫脹度=右耳重量-左耳重量。每組劑量均以浸膏計。[JP]

22組方鎮痛作用篩選實驗[7]

221熱板法小鼠篩選：調節恒溫燙傷儀，使溫度控制在（55±05）℃，取雌性小鼠300只，每次1只放在熱板上，測自小鼠放入在熱板上至出現舔足所需時間，作為該鼠的痛閾值，凡舔后足時間小5s或大于30s或跳躍者棄之不用，選合格小鼠240只。取合格小鼠240只，分為24組，每組10只。實驗前各組每只小鼠測其正常痛閾值。試驗時各組小鼠按擬定劑量灌胃，1次/d，連續3d，末次給藥后60min將小鼠放在熱板上（55±05）℃測其痛閾值，如60s仍無反應，則痛閾值以60s計，計算鎮痛率，鎮痛率=（給藥組痛閾值一對照組痛閾值）/對照組痛閾值×100%。

222扭體實驗取健康小鼠240只，隨機分成24組，每組10只，雌雄各半。各組小鼠每日按04mL/20g的容積灌胃1次，連續給藥3d，于末次給藥后60min，腹腔注射05%醋酸02mL/只，觀察15min內各組小鼠由醋酸引起的扭體次數。

23組方的體外抗菌作用篩選研究[6]實驗菌株：大腸埃希菌（2株）、金黃色葡萄球菌（2株）、鏈球菌（1株）、白色假絲酵母菌（2株）、解脲支原體（2株），均來自海南醫學院附屬醫院檢驗科臨床微生物室。培養基采用血瓊脂平板、沙保弱平板和M-H肉湯。試驗方法采用肉湯稀釋法。藥物濃度依次為02、01、005、0025、00125g/mL。

24組方的解熱作用篩選[8]取家兔，雌雄不限（雌兔應未孕），實驗前對家兔進行預選，家兔單獨裝盒，只固定頸部，探頭插人直腸，深度約6cm，測溫探頭整個實驗過程中均保持在家兔直腸內；室溫保持在20℃，每隔30min記錄體溫1次，共測8次，選取體溫在380～396℃之間，體溫波動不大于04℃的家兔96只，隨機分成16 組，每組6只，實驗當日停食2h，相隔30min測量2次體溫，取平均值作為初始體溫，然后分別按相應劑量灌胃給藥1次，05h后靜脈注射致熱劑 （取細菌內毒素工作標準品，用氯化鈉注射液溶解，配成10 EU/mL溶液） 1mL/kg，于注射致熱劑給藥后每30min記錄體溫1次，共測8次，計算每只家兔各個時間的溫度與其初始體溫的差值，即為體溫的變化值，若為負值，計為0 ℃，計算各組體溫的變化值。

25統計學方法數據用SPSS 100軟件處理，以平均數±標準差（x[TX-*3]±s）表示，采用方差分析法，P<005表示差異有統計學意義。

3結果

31組方抗炎作用篩選實驗

311小鼠腹腔毛細血管通透性試驗除劑量為026g/kg的A～D組以外，其余各組與溶劑對照組比較，明顯抑制醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性的增高，減少滲出（P<005）；阿司匹林組，劑量為104 g/kg 的A～D各組、 D組（劑量052g/kg）和B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]1）組的效果明顯（P<001）。見表1。

312小鼠鼠耳腫脹試驗除劑量為026g/kg的A～D組以外，其余各組與溶劑對照組比較，對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有制作用（P<005）；阿司匹林組，劑量為104 g/kg 的A～D各組、 D組（劑量052g/kg）、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]1）和B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]2）組的效果明顯（P<001）。

32組方鎮痛作用篩選實驗

321熱板法各組給藥后痛闕值與給藥前比較，各給藥組與溶劑對照組比較，給藥劑量為052g/kg的 C和D組、A∶[KG-*3/5]C（1∶[KG-*3/5]3）、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]1）、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]2）等各組均能明顯延長小鼠熱板舔足反應潛伏期（P<005）；阿司匹林組、給藥劑量為104g/kg的 C～D組和B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]3）能顯著延長小鼠熱板舔足反應潛伏期（P<001），其余各組均無明顯抑制作用。見表2。

322扭體實驗與溶劑對照組比較，由05%醋酸引起的小鼠扭體次數，劑量為052g/kg 的C和D、A∶[KG-*3/5]C（1∶[KG-*3/5]3）、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]1）、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]2）等各組均能明顯抑制由05%醋酸引起的小鼠扭體次數（P<005）；阿司匹林組、劑量為104g/kg的C和D組、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]3）能顯著由05%醋酸引起的小鼠扭體次數（P<001）；其余各組均無明顯抑制作用。

34組方的解熱作用篩選裸花紫珠和膽木的提取液，與溶劑對照組比較，單方A、C、D（劑量：04 g/kg）在注射內毒素4h后，能抑制家兔體溫升高（P<005）；B（劑量：04 g/kg）在注射內毒素3h和4h后，均能抑制家兔體溫升高（P<005）。各組方與溶劑對照組比較，A∶C（3∶1）和B∶D（2∶1）在注射內毒素4h后，能抑制家兔體溫升高（P<005）；A∶C（2∶1）在注射內毒素3h和4h后，均能抑制家兔體溫升高（P<005）；A∶C（1∶1）和B∶D（3∶1）在注射內毒素2h～4h后，均能抑制家兔體溫升高（P<005）；B∶D（1∶1）在注射內毒素1～4h后，均能抑制家兔體溫升高（P﹤005）。結果顯示，裸花紫珠和膽木提取液單方和各組方對家兔具有一定的解熱作用，其中組方B∶D（1∶1）效果更明顯。

4討論

本研究考察了裸花紫珠和膽木的水和醇提取物單方和組方的抗炎、鎮痛、解熱、抑菌作用。結果顯示，在體內抗炎藥理實驗中，兩者單方劑量052、104g/kg·bw和各組方（總劑量為052g/kg·bw）對冰醋酸引起的小鼠腹部毛細血管通透性增加和二甲苯所致的小鼠耳腫脹具有一定抑制作用，且裸花紫珠醇提物：膽木醇提物（026g/kg ： 026g/kg）在抑制炎癥方面協同增效的趨勢更為明顯。在鎮痛藥理實驗中，采用熱板法和扭體實驗對兩者進行藥效評價，裸花紫珠水提和醇提取液無明顯的鎮痛作用，膽木水和醇提取液單方在劑量052g/kg·bw時，具有鎮痛作用，且鎮痛作用與劑量呈正關系；組方A∶C（1∶3）、B∶D（1∶1）、B∶D（1∶2）和B∶D（1∶3）均對小鼠亦有一定的鎮痛作用。在體外抗菌作用研究中，試驗結果顯示，裸花紫珠和膽木提取液單方、各組方對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、白色假絲酵母菌、解脲支原體均有一定的抑菌作用。在組方解熱作用篩選試驗中，總劑量為04g/kg·bw時，兩者單方和組方均能降低細菌內毒素致熱家兔體溫的升高（P<005），裸花紫珠醇提物：膽木醇提物（026 g/kg∶026g/kg）對內毒素致熱家兔的解熱效果更佳。

裸花紫珠又稱紫珠，主要成分為黃酮類、縮合鞣質[9]，可抑制毛細血管通透性，對早期的炎癥滲出、腫脹有明顯的抗炎性反應作用，同時可縮短出、凝血時間，止血效果顯著，還能抑制多種細菌可預防繼發性感染的發生，具有保肝降酶的作用。膽木的主要含有黃酮苷、酚類，主要用于治療外感發熱、急性黃疸、胃痛、急性扁桃體炎以及咽喉炎等，其分離物生物堿還具有一定的抑菌作用。前期通過對裸花紫珠和膽木水和60%乙醇提取物進行活性成分分析，發現60%乙醇提取物裸花紫珠的出膏率、總黃酮和鞣質含量均高于水的提取物；膽木的60%乙醇提取物的出膏率、總黃酮和生物堿含量均高于水的提取物。本次實驗結果顯示，裸花紫珠和膽木的60%乙醇提取物較水的提取物藥效更佳，且兩者的組合物裸花紫珠醇提物：膽木醇提物（026g/kg∶026g/kg）在抗炎、鎮痛、解熱和抗菌作用方面協同增效明顯，可減少單方使用的劑量，具有開發的潛能。因此，裸花紫珠和膽木的聯合使用可協同增強抗炎、鎮痛、解熱和抗菌作用，且與主要成分總黃酮、鞣質和生物堿含量成一定的量效關系。可考慮將組方裸花紫珠醇提物：膽木醇提物（026g/kg∶026g/kg）開發出復合型藥物組合物，針對性地協同增強二者的抗炎、鎮痛、解熱和抗菌等主要功效，進行下一步的研究開發，開發出新品種藥物，以期能縮短病程、降低并發癥的發生率，使用方便，且無藥物不良反應，創立海南南藥和黎族醫藥新的品牌。

參考文獻

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[2]陳穎，楊國才.裸花紫珠抗炎作用及增強免疫力功能的實驗研究[J].廣東微量元素科學，2006，13（8）：39-41.

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[9]白晶.中藥裸花紫珠研究現狀[J].中國中醫藥現代遠程教育，2009，7（2）：8-9.

（收稿日期：2017-01-13編輯：梁志慶）