HPLC法測定清熱顆粒中蘆丁的含量

張麗云 張建云

【摘要】目的：研究清熱顆粒中蘆丁含量和測定方法。方法：采用 HPLC 法分別對6個批次的樣品中蘆丁含量進行測定。色譜法條件為ZORBAX SB-C18柱（200mm×46mm，5μm），以甲醇-05%磷酸溶液為流動相進行梯度洗脫，檢測波長為 358nm，柱溫為 30℃。結果：蘆丁進樣量在0206～206μg范圍內與峰面積呈線性關系，平均回收率為9986%，r =09994，RSD為117%（n=6）。結論：HPLC法簡便、可靠、準確，可用于清熱顆粒的質量控制。

【關鍵詞】清熱顆粒； 蘆丁； 含量測定

【中圖分類號】R284【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）06-0029-02

清熱顆粒為廣西柳州市中醫院院內制劑（批準文號為桂藥制字Z02060094），由桑葉、野菊花、紫花地丁、九里明、蒲公英、崗梅根六味藥組方，具有清熱解毒、抗菌消炎、清肝明目、疏風散熱的功效，用于感冒發熱、目赤頭痛、上呼吸道感染，咽喉腫痛及各種疥瘡，臨床療效顯著。桑葉為桑科植物桑Morus alba L的干燥葉，具有疏散風熱、清肺潤燥、清肝明目的功效，用于風熱感冒、肺熱燥咳、頭暈頭痛、目赤昏花[1]。其含有黃酮類、生物堿類、苯丙素類、有機酸類、甾體及三萜類等多種化合物[2]。桑葉為方中君藥，蘆丁是其主要化學成分。為了更好的控制制劑的質量，保證其療效，研究用高效液相色譜法測定清熱顆粒中蘆丁的含量。

1儀器與材料

11儀器Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；XS205Du分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；HH-S恒溫水浴鍋（江蘇金壇醫療儀器廠）；RE-52AA旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）。

12材料蘆丁對照品（批號：100080-201408，含量902%，中國藥品生物制品檢定所）；清熱顆粒（批號：20160725、20160801、20160912、20161025、20161125、20161201，本院自制）；甲醇（色譜純，賽默飛世爾科技有限公司）；磷酸（分析純，廣州化學試劑廠）。

2方法

21溶液的配制

211對照品溶液的配制精密稱定蘆丁對照品2575mg于25mL容量瓶中，加甲醇溶解制成103 mg/mL的溶液，搖勻，精密量取1mL，移至10mL的容量瓶中，加甲醇溶解制成濃度為0103mg/mL的對照品溶液，即得。

212供試品溶液的配制取10袋清熱顆粒內容物，研細，混勻取約2g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加甲醇50mL，加熱回流30min，濾過，濾渣再用甲醇50mL，同法提取2次，合并濾液。減壓回收溶劑，殘渣用甲醇溶解，轉移至25mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，過045μm濾膜，取續濾液，即得。

213陰性對照品溶液的制備以相同的處方比例取除桑葉外的藥材，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

22色譜條件色譜柱：ZORBAX SB-C18柱（200mm×46mm，5μm）；流動相：以甲醇為流動相A，以05%的磷酸溶液為流動相B，按表1進行梯度洗脫；流速：1mL/min；檢測波長：358nm；柱溫：30℃。

23方法學考察

231線性關系取0103mg/mL蘆丁對照品溶液分別進樣 2、5、75、10、125、20μL測定峰面積。以峰面積為縱坐標，質量為橫坐標繪制標準曲線，得蘆丁回歸方程：Y=20E+9X-13E+5，r=09994。結果蘆丁在0206～206μg范圍內線性關系良好。

24樣品測定精密稱取6個批號的樣品各適量，按供試品制備方法制備樣品溶液，在色譜條件下測定，用外標法計算蘆丁的含量。結果批號為20160725、20160801、20160912、20161025、20161125、20161201的樣品中蘆丁的含量分別為0130mg/袋，0152mg/袋，0175mg/袋，0128mg/袋，0142mg/袋，0126mg/袋，平均為0142mg/袋。

3討論

將蘆丁對照品的甲醇溶液在200nm～600nm 的范圍內進行掃描，蘆丁在215nm、258nm、358nm 處出現 3 個吸收峰，考慮到在短波長位置，處方中其它的組分干擾太大，結合文獻報道[1，3-4]，選擇358nm作為檢測波長。

研究還對含量測定中流動相的條件進行了考察，曾采用甲醇-水（40∶60），甲醇-1%冰醋酸溶液（35∶65）及 甲醇-05%磷酸溶液（35∶65）作為測定條件，但峰出現拖尾。選用流動相為甲醇-05%磷酸溶液進行梯度洗脫[1]，分離效果好，分離度大于15，理論塔板數大于3000，且陰性無干擾，故選擇本系統為流動相。

在提取溶劑的選擇上，采用甲醇、乙醇、水作為提取溶劑，通過比較單一溶劑和混合溶劑，最后選定甲醇溶液作為最佳提取溶劑。考察了加熱回流提取時間的影響，結果發現加熱回流處理20、30、40min 差別不大，為了提取完全同時又節約時間，故選擇加熱回流提取30min為宜。

綜上，采用HPLC法測定清熱顆粒中蘆丁的含量，該方法簡便、可靠、準確，可用于清熱顆粒的質量控制。

參考文獻

[1]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典（一部）[M]. 北京：中國醫藥科技出版社，2015：297.

[2]王曉靜，王元書，邱進，等.桑葉化學成分研究 [J].食品與藥品，2007 （1） ：9.

[3]曾森，劉虹，張德芹，等.對市售桑葉藥材中蘆丁的含量調查[J].中醫藥導報，2010，16（4）：77-78.

[4]郭玉，唐國濤，陳淑嫻，等.槐花米中蘆丁提取方法的比較研究[J].中成藥，2007，29（11）：1675-1677.