野生和林下種植金線蓮的體外抗氧化活性研究

趙立 楊彬君 龐文生 胡娟

【摘要】目的：研究野生和林下種植金線蓮的體外抗氧化活性。方法：采用紫外分光光度法，檢測野生金線蓮和林下種植金線蓮水提液及醇提液對DPPH自由基的清除能力。結(jié)果：野生金線蓮和林下種植金線蓮對DPPH自由基具有一定的清除作用，其活性均為水提液優(yōu)于醇提液；野生金線蓮與林下種植金線蓮對DPPH自由基的清除活性總體差異不大。結(jié)論：林下種植可以作為緩解金線蓮資源緊張的重要途徑。

【關(guān)鍵詞】金線蓮；林下種植；抗氧化活性

【中圖分類號】R284【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）06-0015-03

金線蓮（Anoectochilus roxburghii）為蘭科開唇蘭屬（Anoectochilus）地生型多年生草本植物，是民間常用的珍稀草藥，享有“藥王”、“金草”等美稱。金線蓮以全草入藥，性平、味甘，具有清熱、涼血、解毒、祛風(fēng)除濕的功效[1]。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)金線蓮具有降低低密度脂蛋白的氧化易感性、清除活性氧自由基等抗氧化活性[2-3]。

金線蓮的種子發(fā)芽率低，生長繁殖也較為緩慢，近年來掠奪式的開采使金線蓮生長的植被遭到破壞，棲息地減少，導(dǎo)致金線蓮野生資源銳減，處于瀕危狀態(tài)[4]。《國家重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄》（第二批）將其列為二級保護(hù)植物[5]。金線蓮的野生資源亟待保護(hù)，為了拯救瀕危植物，解決金線蓮資源緊張問題。設(shè)施栽培、林下種植和盆栽等人工栽培模式被應(yīng)用于金線蓮的種植。林下種植金線蓮是以林地資源為依托，利用林木枝葉適當(dāng)?shù)恼谑a效果，形成有利于金線蓮生長的環(huán)境進(jìn)行栽培種植[6]。其具有充分利用林地資源空間，不占用糧食用田，單位生產(chǎn)成本較低等特點(diǎn)，林下種植金線蓮正日益增多。本研究采用DPPH自由基清除法，以水和乙醇為提取溶劑，對野生和林下種植金線蓮進(jìn)行比較分析，評價(jià)抗氧化活性的差異。

1儀器與材料

11儀器UV-3200型紫外分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司）；AE240S電子分析天平（梅特勒-托利多上海有限公司）；L-530低速離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀開發(fā)有限公司）；KQ2200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；恒溫水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

12材料野生金線蓮1號購于泉州葉之典生物科技有限公司；野生金線蓮2號購于福建虎伯寮生物集團(tuán)有限公司；林下種植金線蓮1號產(chǎn)自仙游金線蓮林下種植示范基地，林下種植6個(gè)月，購于仙游中青生物科技有限公司；林下種植金線蓮2號產(chǎn)自武平梁野山林下種植金線蓮基地，林下種植6個(gè)月，購于福建金草生物集團(tuán)股份有限公司；1，1-二苯基苦基苯肼（DPPH）購于美國Sigma公司；L-抗壞血酸（VC）、乙醇均為分析純，購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

2方法

21金線蓮水提液的制備稱取金線蓮5g，加水350mL浸泡10min，煎煮5min，過濾取上清液；藥渣加水200mL，繼續(xù)煎煮5min，過濾；第三次加少許水煎煮5min，最后合并濾液至500mL；即得濃度為001g/mL的金線蓮水提液。

22金線蓮醇提液的制備稱取金線蓮1g，加入30mL乙醇浸泡30min，使藥材與溶劑充分接觸，超聲提取2h后，離心（4000r/min，10min），取上清液，藥渣重復(fù)提取2次，合并上清液，乙醇定容至100mL；即得濃度為001g/mL的金線蓮醇提液。對醇提液進(jìn)行濃縮，分別取上述制備的金線蓮醇提液50mL，放入蒸發(fā)皿中，65℃水浴揮發(fā)濃縮，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中乙醇定容，得到濃度為005g/mL的金線蓮醇提液。

23清除自由基活性測定分別取金線蓮水提取液00、300、600、900μL于具塞試管中，加水至1mL，分別加入DPPH溶液2mL，搖勻，得到金線蓮水提液濃度分別為0、1、2、3mg/mL的待測樣品溶液，室溫下避光靜置30min；分別取金線蓮醇提液00、300、600、900μL于具塞試管中，加無水乙醇至1mL，分別加入DPPH 2mL，搖勻，同樣得到金線蓮醇提液濃度分別為0、1、2、3mg/mL的待測樣品溶液，室溫下避光靜置30min。用2mL無水乙醇代替2mL DPPH溶液作空白對照，采在517nm波長處測定吸光度，以下式計(jì)算清除率。

DPPH清除率計(jì)算公式：DPPH清除率=[A0-（A1-A2）]/A0×100%

公式中 Ao為空白對照吸光度；A1為樣品溶液吸光度；A2為樣品對照吸光度。

3結(jié)果

31野生和林下種植金線蓮水提液對DPPH自由基清除活性的影響通過實(shí)驗(yàn)對4個(gè)金線蓮樣品水提液的DPPH自由基清除活性進(jìn)行測定，結(jié)果見表1。在實(shí)驗(yàn)研究的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，4種樣品對DPPH自由基的清除能力隨質(zhì)量濃度的增大而上升。林下種植金線蓮與野生金線蓮水提液對DPPH自由基的清除活性相比相差不大，其IC50值均在2～3mg/mL。

4討論

41提取時(shí)間的選擇實(shí)驗(yàn)對金線蓮不同提取時(shí)間得水提液的DPPH自由基清除率進(jìn)行比較，提取時(shí)間依次為1、3、5、10、15、20、30、40min。結(jié)果發(fā)現(xiàn)1～15min內(nèi)其對DPPH自由基清除率逐漸增加。提取時(shí)間為15min時(shí)其清除率最高，當(dāng)金線蓮濃度為2mg/mL時(shí)，其清除率為4202%。提取時(shí)間超過15min后DPPH自由基清除率逐漸降低。金線蓮在長時(shí)間的煎煮時(shí)，可能使其抗氧化活性成分被破壞。因此，以金線蓮作為茶飲時(shí)，其煎煮時(shí)間不宜過長，以15min為宜。

42實(shí)驗(yàn)濃度的選擇實(shí)驗(yàn)過程中金線蓮水提液濃度在3mg/mL時(shí)，其對DPPH自由基清除率已達(dá)到50%，而金線蓮醇提液的清除率僅為15%左右，對其進(jìn)行濃縮。當(dāng)金線蓮醇提液濃度在15mg/mL時(shí)，其對DPPH自由基清除率才高于50%。因此，金線蓮醇提液的實(shí)驗(yàn)濃度為1～15mg/mL。由此也可以看出金線蓮水提液清除DPPH自由基效果高于醇提液，這也符合金線蓮在民間以水煎作為茶飲的食用習(xí)慣。并且其水煎液色澄明味清香，受到廣大人民的青睞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為金線蓮的資源開發(fā)提供一定理論依據(jù)。

隨著金線蓮健康產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，其需求量不斷上升。林下種植金線蓮可以充分利用林地資源空間，不占用糧食用田，降低單位生產(chǎn)成本。有利于金線蓮實(shí)現(xiàn)規(guī)模化，產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展。該研究發(fā)現(xiàn)野生金線蓮與林下種植金線蓮對DPPH自由基的清除活性總體差異不大。林下種植可以作為緩解金線蓮資源緊張的重要途徑和手段，同時(shí)也有利于其野生資源的保護(hù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為金線蓮林下種植產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供了一定的依據(jù)和基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2017-01-13編輯：穆麗華）