高效液相測定注射用環磷腺苷葡胺中環磷腺苷含量

劉云娜+李巖

摘 要：目的：建立環磷腺苷葡胺葡萄糖注射液中環磷腺苷含量的HPLC檢測方法。方法：采用Agilent 1200高效液相色譜儀，Agilent ZORBAX SB-C18柱（150x4.6mm，5μm），流動相為乙腈：pH2.5磷酸緩沖液（95：5），流速為1 ml/min，檢測波長為259 nm，柱溫為30℃進行測定。結果：環磷腺苷濃度在0.01082～0.2104 mg/ml范圍內時，濃度與峰面積線性關系良好，方程相關系數r=0.9999，平均回收率99.7 %，RSD=1.22%。結論：用該方法檢測注射用環磷腺苷葡胺中環磷腺苷含量準確，簡便，高效。

關鍵詞：HPLC；環磷腺苷葡胺注射液；環磷腺苷

環磷腺苷葡胺注射液非洋地黃類強心劑，具有正性肌力作用，能增強心肌收縮力，改善心肌泵血功能，有擴張血管作用，可降低心肌耗氧量；改善心肌細胞代謝，保護缺血、缺氧的心肌；能夠改善竇房屋結P細胞功能等作用[1]。環磷腺苷葡胺由環磷腺苷和葡甲胺兩種成分組成[2]。環磷腺苷葡胺注射液的含量測定在現行質量標準中為紙色譜法[3]，但由于紙色譜法耗時長，操作過程復雜，人為因素過多，精確度差，靈敏性低。高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC） 有“三高、一廣、一快”的特點：高壓、高效、高靈敏度；應用范圍廣；分析速度快、載液流速快；本文采用高效液相的方法對注射用環磷腺苷葡胺中環磷腺苷的含量進行測定。

1.儀器與試劑

1.1儀器

電子天平（BSA224S賽多利斯）；高效液相色譜儀（1200美國安捷倫公司）；ZORBAX SB-C18 柱（150 x 4.6 mm， 5 μm 美國安捷倫公司）；紫外分光光度計TU—1901（北京普析通用儀器有限責任公司生產）；pH計（PHS-3C上海雷磁儀器廠）。

1.2試劑

環磷腺苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號140709-201404，純度為99.9%）；環磷腺苷葡胺注射液（亞寶藥業集團股份有限公司，規格2 ml：30 mg，批號20151012）；磷酸（分析純）；乙腈（色譜純）；水（注射水）。

2.方法與結果

2.1 色譜條件

Agilent ZORBAX SB-C18 柱 （長度×直徑：150 x 4.6 mm，粒徑：5μm）；以乙腈：pH2.5磷酸緩沖液（95：5）為流動相；檢測波長為259 nm；柱溫：30℃；流速：1 ml/min；進樣量：10 μl。

2.2 樣品配置

對照品溶液的配置：精密稱取適量的環磷腺苷對照品，加流動相稀釋制成濃度為0.1mg/ml的溶液，作為對照品溶液。

供試品溶液的配置：精密量取適量的本品，加流動相稀釋制成環磷腺苷濃度為0.15mg的溶液，作為供試品溶液。

2.3 線性關系考察

精密稱取適量的環磷腺苷對照品，加流動相稀釋制成濃度為0.1mg/ml的溶液，作為對照品溶液；然后精密量取0.5，1，2，4，6，8 ml至10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。再各取上述溶液10 μl注入液相色譜儀中，最后以藥物峰面積A對濃度C（mg/ml）進行線性回歸。得到的回歸方程：A=1650C+862，r=0.9999，結果表明環磷腺苷照品濃度在0.01082～0.2104 mg/ml范圍內，濃度與藥物峰面線性關系良好。

2.4 精密度考察

精密吸取對照品溶液10 μl，按照設定色譜條件重復進樣8次，記錄峰面積結果見表1，計算的RSD=0.58%。

2.5 重復性實驗

精密量取2.2項中供試品溶液， 按照設定色譜條件重復進樣6次，對照品溶液，進樣1次，每次進樣10 μl，記錄峰面積，計算的結果（見表2）平均含量為100.37%，RSD=0.35%。結果表明此方法具有良好的重復性。

表2、重復性實驗結果

2.6穩定性實驗

精密量取2.2項中供試品溶液1份，分別在0、1、2、4、8、12 h進樣品10 μl，記錄峰面積結果見表3，計算的RSD=0.87%。結果表明樣品至少在12 h內是穩定的。

2.7回收率實驗

按環磷腺苷葡胺注射液處方工藝80%、100%、120%的含量模擬制成樣品各3 份： 精密稱取稱取環磷腺苷對照品與相應比例混合輔料混勻，加水溶解定量稀釋至50 mL，每個濃度平行制備3 份；另外精密稱取環磷腺苷對照品10 mg，加流動相稀釋制成濃度為0.1 mg/ml的溶液，作為對照品溶液；取供試品與對照品溶液各去10 μl注入液相色譜儀中，按照設定色譜條件測定，按外標法測定峰面積，計算回收率，結果（見表4）顯示，磷腺苷葡胺注射液中的環磷腺苷含量測定加樣回收率均在99%～101%之間，平均回收率為99.7%，RSD為1.22%（RSD≤2.0%）符合要求，說明此檢測方法具有良好的回收率。

3 .討論

環磷腺苷葡胺葡萄糖注射液是以臨床常用和較穩定的治療藥物制成治療型輸液供臨床使用，可以避免臨時使用時將一些小針劑加到輸液中使用帶來的如熱原、微粒、PH變化等諸多醫療隱患；操作更簡便、安全，并可有效地避免二次交叉污染[4-5]。同時對原小水針質量標準進行了提高，含量測定由原紙色譜法改為高效液相色譜法，確保臨床用藥安全有效[6-8]。

本文中通過對環磷腺苷葡胺葡萄糖注射液中環磷腺苷的含量測定，對HPLC法進行方法建立及考察，結果表明該方法線性及重復性良好、精確度及回收率高，可行性強。

參考文獻

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[2]張義林， 宣疆英. 環磷腺苷葡胺對老年心力衰竭患者心功能及BNP水平的影響[J]. 心腦血管病防治， 2014（1）：74-76.

[3]國家食品藥品監督管理局. 國家食品藥品監督管理局標準（試行）[S].YBH02142005.

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[7] 劉磊. 對環磷腺苷葡胺注射劑含量測定方法的探討[J]. 科學與財富， 2015（2）：367-367.

[8] 尹菁， 紀宇. HPLC法測定注射用環磷腺苷葡胺中葡甲胺含量[J]. 中國藥品標準， 2015（4）：257-260.

作者簡介：劉云娜，黑龍江威凱洱生物技術有限公司，職稱：助理工程師，單位郵編：150028，學歷：本科，1986年出生。