不同溫度、時間制備新鮮冰凍血漿中的凝血因子含量分析

廖云

【摘要】 目的：觀察不同溫度和不同時間制備新鮮冰凍血漿對血漿中凝血因子含量的影響。方法：在15 ℃和2 ℃～6 ℃的溫度下制備血漿各25份，每一試管留取血液5 ml。將同一溫度的血漿分別在6、8、10 h速凍標(biāo)本，72 h內(nèi)將速凍成固體的血漿在37 ℃的水中解凍，立即采用血凝法檢測各凝血因子的活性。結(jié)果：15 ℃下保存的血液在6～10 h纖維蛋白原、FⅦ、FⅨ、FⅩ等因子活性降低不明顯，F(xiàn)Ⅴ和FⅧ因子在6～10 h活性下降顯著，與其他同一溫度下的因子活性降低值相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。2 ℃～6 ℃下保存的血漿在6、8和10 h內(nèi)FⅤ、FⅦ、FⅨ、FⅩ、纖維蛋白原等均在正常范圍內(nèi)，各凝血因子降低不明顯。結(jié)論：在2 ℃～6 ℃環(huán)境下制備的新鮮冰凍血漿中凝血因子活性優(yōu)于15 ℃下制備的新鮮血漿中凝血因子的活性，2 ℃～6 ℃冷藏環(huán)境6～10 h及15 ℃下8 h內(nèi)制備的新鮮冰凍血漿可作為制備冷沉淀的原料血漿。

【關(guān)鍵詞】 溫度； 時間； 新鮮冰凍血漿； 凝血因子含量

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.5.033 文獻標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）05-0061-02

血漿是血液中的非細胞成分，其含有多種成分，主要包括水分、糖類、無機物、非蛋白含氮化合物、蛋白質(zhì)等。臨床中所用血漿多為血站提供，用于制造血液制品的主要是血漿站提供，血站主要為臨床提供新鮮冰凍血漿、病毒滅活冰凍血漿、普通冰凍血漿等[1]。新鮮冰凍血漿主要指采集后儲存在冷藏環(huán)境中的全血，時間最好在6 h以內(nèi)。血漿站采集后的血漿放置于-35 ℃以下的冷庫在2 h內(nèi)速凍成形。不同時間和溫度制備的新鮮冰凍血漿中的凝血因子有所不同。本次研究旨在探討不同溫度、時間制備新鮮冰凍血漿中的凝血因子含量的差異，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

隨機抽取2015年5-8月筆者所在血漿站采集符合《藥典》健康要求的580 ml血漿，血漿分別放置在2 ℃～6 ℃和15 ℃的溫度下各取樣本血漿25份。將血漿放置在制備室，采用十萬級凈化密閉環(huán)境中取樣，每個試管中留樣5 ml，2 ℃～6 ℃的血漿在6、8、10 h內(nèi)冰凍，將其保存在儲存冰箱中，15 ℃的血漿在6、8、10 h內(nèi)冰凍，溫度由室內(nèi)空調(diào)設(shè)定和調(diào)控。血漿冰凍72 h內(nèi)將雪漿在37 ℃的水溫下解凍，解凍后立即檢測各凝血因子的含量。

1.2 儀器與試劑

所用儀器包括：血漿分離器、大型低溫離心機、全自動血液成分分離機、低溫操作臺、大型低溫冰箱、試劑冰箱、sysmex-CA-7000全自動血凝儀。試劑選用FⅤ、FⅦ、FⅨ、FⅩ、纖維蛋白原測定試劑盒、一次性采血漿袋等。

1.3 方法

采用凝固法測定凝血因子含量。將新鮮冰凍血漿標(biāo)本在37 ℃水溫下解凍，解凍后觀察血漿性狀，血漿如整體顏色呈淡黃色、色澤無異常、無纖維蛋白析出，則可立即檢測各凝血因子。凝血因子含量的檢測采用凝固法進行測定。對新鮮冰凍血漿中FⅤ、FⅦ、FⅨ、FⅩ、纖維蛋白原（Fib）等同時進行檢測。判斷標(biāo)準(zhǔn)依照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB18469-2012《全血及成分血質(zhì)量要求》。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 17.0軟件做統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

不同時間和不同溫度下制備的新鮮冰凍血漿中的凝血因子的活性進行比較。結(jié)果詳見表1和表2。15 ℃下保存的血液在6～10 h纖維蛋白原、FⅦ、FⅨ、FⅩ等因子活性降低不明顯，F(xiàn)Ⅴ和FⅧ因子在6～10 h內(nèi)活性下降顯著，與其他同一溫度下的因子活性降低值相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。從表中可看出，2 ℃～6 ℃下保存的血漿在6、8和10 h內(nèi)FⅤ、FⅦ、FⅨ、FⅩ、纖維蛋白原等均在正常范圍內(nèi)，各凝血因子降低不明顯。

3 討論

血漿是醫(yī)學(xué)中必備的物品，血漿質(zhì)量也是保障臨床治療療效的關(guān)鍵，因此血漿在制備過程中要確保其質(zhì)量，血漿從制備到保存、運輸以及輸注都需嚴格按照相關(guān)規(guī)定進行，將其建立在科學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化的操作規(guī)程范圍內(nèi)，確保每個環(huán)節(jié)的正確無誤，避免影響到血漿輸注效果，建立起全過程的質(zhì)量控制保證體系，提高血漿的應(yīng)用療效。新鮮冰凍血漿在臨床中應(yīng)用較為廣泛，可應(yīng)用于各種凝血因子缺乏的病癥。新鮮冰凍血漿中有多種凝血因子，可保存多種不穩(wěn)定的凝血因子活性，部分凝血因子較為穩(wěn)定、部分凝血因子則不穩(wěn)定，容易喪失活性[2]。冰凍血漿在臨床中也得到廣泛應(yīng)用，其與新鮮冰凍血漿相比具有的不足之處是其只可保持穩(wěn)定的凝血因子的活性，不穩(wěn)定的FⅧ、FⅤ等凝血因子安活性則無法有效保持[3]。血漿中不穩(wěn)定的凝血因子體外半衰期較短，僅能夠保持8～12 h，超過這個時間段則容易喪失活性，血漿凝血因子接觸異物表面會有不同程度被激活而失去活性[4]。臨床輸注新鮮冰凍血漿時會將不穩(wěn)定凝血因子的活性作為評估新鮮冰凍血漿的重要質(zhì)量指標(biāo)。新鮮冰凍血漿也可用來制備冷沉淀的血漿。在不同溫度和不同時間制備新鮮冰凍血漿會直接影響新鮮冰凍血漿中凝血因子的活性[5]。本次研究中，分別在15 ℃和2 ℃～6 ℃下制備新鮮血漿，觀察其在不同時間血漿中凝血因子的活性。結(jié)果顯示2 ℃～6 ℃下保存的血漿在6、8和10 h內(nèi)FⅤ、FⅦ、FⅨ、FⅩ、纖維蛋白原等均在正常范圍內(nèi)，各凝血因子降低不明顯。因此新鮮冰凍血漿在制備冷沉淀時最好選用6～10 h內(nèi)的血漿。新鮮冰凍血漿采血后為保證凝血因子的活性應(yīng)盡快制備，冷藏環(huán)境盡量選擇2 ℃～6 ℃的冷藏環(huán)境。新鮮冰凍血漿常需要進行冷沉淀，冷沉淀是新鮮冰凍血漿溶化后分離出沉淀在血漿中的冷不溶解物質(zhì)，含有多種凝血因子[6]。冷沉淀對多種病癥均有良好的治療效果，如纖維蛋白原缺乏癥、彌漫性血管內(nèi)凝血、產(chǎn)婦大出血以及甲型血友病等[7]。另外，病毒滅活血漿中凝血因子活性在不同溫度、時間下制備凝血因子也會受到影響。有研究顯示，血漿滅活前、后有效成分的含量會發(fā)生改變，血漿中的凝血因子會受亞甲藍的影響含量出現(xiàn)降低[8]。血漿經(jīng)病毒滅活后會影響凝血因子中的不穩(wěn)定因子的療效。血漿病毒滅活可以有效降低傳染病毒性疾病的不安全因素，從而有效降低因輸注血漿引起的輸血風(fēng)險。

因此，由于制備新鮮冰凍血漿不同時間和溫度會影響到凝血因子的活性，因此制備新鮮血漿時需充分考慮到時間和溫度這兩方面影響因素。新鮮冰凍血漿采血后需及時制備，確保凝血因子的活性受到的影響最小，嚴格遵循GB18469-2012《全血及成分血質(zhì)量要求》中對血液保存在冷藏環(huán)境中制備新鮮冰凍血漿的要求，確保所制備的新鮮冰凍血漿的有效性。

綜上所述，不同時間、不同溫度制備新鮮冰凍血漿會對凝血因子的活性產(chǎn)生不同影響，制備冷沉淀血漿應(yīng)用15 ℃、8 h內(nèi)和2 ℃～6 ℃6～10 h制備的新鮮冰凍血漿作為原料血漿，這可使血漿中凝血因子的活性得到有效保持。

參考文獻

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（收稿日期：2016-10-20）