阿哌沙班片的含量及有關物質測定分析

高媛

哈藥集團制藥總廠 150000

阿哌沙班片的含量及有關物質測定分析

高媛

哈藥集團制藥總廠 150000

目的：通過科學的方式建立阿哌沙班片這種藥物之中含量以及相關物質的對應檢測方法。方法：在研究的過程之中通過對反相類型的高效液相色譜這一技術的使用，來對藥品進行相應的含量檢測。在檢測過程之中設定流動相為零點零五摩爾每升的乙腈溶液，以及磷酸二氫鉀溶液，并將試驗過程之中的液相流動速度設定為每分鐘一毫升的流動速度，在試驗之中相應檢測波長設定為293nm波長，整個試驗過程之中的柱溫都要保持在二十五攝氏度。結果：通過讓阿哌沙班片這一藥物在設定色譜條件之下運行，能夠使得本次試驗所用藥品之中的主要成分和雜質達到良好的分離效果。在本次試驗之中阿哌沙班片這一藥品的質量在四點三微克每升到四十五微克每升之間的時候，其和相應的數據峰面積能夠呈線性關系；并且在后續的研究過程之中，精密度數值、穩定性數值、重復性試驗數值相應的RSD均小于1.1%；阿哌沙班片這一藥品在進行加樣過程之中的回收率能夠達到99.93%，RSD數據為0.3%。結論：經過科學的分析以及嚴謹的比較，最終確定通過這種試驗方式進行測定，不但能夠具有良好的質量測定效果，還能夠具有良好的靈敏度，從而也就能夠進一步的促進阿哌沙班片這一藥品在質量控制方面的測定效果。

制藥；藥物含量；測定；阿哌沙班片

現階段人們在相應的生活水平方面、飲食條件等方面都有了跳躍式的發展，使得人們生活之中的各個方面都有較為良好的保證，但與此同時，人們也要能夠充分的認識到，在現階段仍存在著眾多的疾病，影響著人們的生活。在對這些疾病進行治療的過程之中，為了能達到良好的治療效果，醫藥領域的研究人員成功的開發出了阿哌沙班，商品名為艾樂通，屬于口服選擇性活化Xa因子抑制劑，為全球第三代口服抗凝藥。該藥由輝瑞公司與百時美施貴寶公司聯合開發研制，2012年通過美國食品與藥品管理局（FDA）批準上市用于降低非瓣膜性房顫患者的卒中和系統性栓塞發生的風險，現有2.5mg和5mg兩種片劑規格。相關調查數據顯示，血栓栓塞性疾病具有高風險、高死亡率的特點。在該藥批準上市前，已有華法林、達比加群、利伐沙班等治療相關疾病的藥物。該藥具有高選擇性、高安全性等特點，預計2017年銷售額能達到42億美元，具有極高的市場經濟價值。目前，國內未見關于該藥質量標準的相關報道，因此，本試驗建立了反相高效液相色譜（RP-HPLC）法測定該藥的含量及有關物質，為建立阿哌沙班片的質量控制標準提供依據。

1.試驗方式以及試驗結果

1.1 色譜條件的設定，色譜柱：WatersXBridgeShieldRP18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（用50%磷酸溶液調節pH至3.0）（20∶80，V/V）；檢測波長：293nm；流速：1.0ml/min；柱溫：25℃；進樣量：10μl。

1.2 試驗所用溶液的制備，對照作用溶液的制備：在制備的過程之中，首先需要實驗人員能夠精確的稱量出阿哌沙班片這一藥品 5毫克，在此基礎上技術人員可以通過使用超聲波促進這一物質的溶解，并最終制成含量為零點零二毫克每毫升的藥物溶液。

供試品作用溶液的制備：在進行制備的時候，拿取兩片本次試驗所用的阿哌沙班片藥品，并將這些藥品通過研缽完全的粉碎，經過反復研磨之后從研缽之中稱量出大約五毫克的藥品，之后將這些藥品放置到一百毫升大小的容量瓶之中，并通過超聲波對這溶液進行震蕩處理，保證藥品能夠在溶液之中混合均勻，之后還需要技術人員能夠通過過濾膜對這一溶液進行過濾。

空白組溶液：在制備空白對照組溶液的過程之中，需要技術人員能夠按照試驗需求將空白輔料放置到容量為一百毫升的容量瓶之中。再加入流動相稀釋至刻度，超聲溶解，濾過（0.50μm濾膜），取續濾液，即得。

1.3 專屬性試驗

分別取對照品、供試品和空白樣品溶液適量，各精密量取10μl，按色譜條件進樣分析，記錄色譜圖。色譜基線平穩，各色譜峰分離度＞1.5，理論板數以阿哌沙班計＞3500，且空白輔料對阿哌沙班測定無干擾。

1.4 線性關系考察

取約5mg阿哌沙班對照品，精密稱定，置于100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，超聲（功率：200W，頻率：40kHz）使完全溶解，分別精密量取0.2、0.5、0.8、1.0、1.2、1.5ml置于10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成梯度濃度溶液，按照色譜條件依次進樣，記錄色譜圖。以阿哌沙班峰面積（y）為縱坐標、質量濃度（x，μg/ml）為橫坐標，進行線性回歸，回歸方程為y＝2.735×104x－1.127 ×10（3r＝0.9994）。結果表明，阿哌沙班的質量濃度在 4.30～45.00 μg/ml范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

1.5 精密度試驗

取阿哌沙班對照品溶液適量，按色譜條件連續測定峰面積6次。結果，阿哌沙班峰面積和其保留時間的RSD分別為0.038%和0.024 %（n＝6），表明儀器的精密度良好。

1.6 穩定性試驗

取供試品溶液，于25℃下放置0、2、4、6、8h時進樣分析，測定阿哌沙班的峰面積。結果，阿哌沙班峰面積和保留時間的RSD分別為1.07%和1.10%（n＝5），表明供試品溶液在8h內穩定。

1.7 重復性試驗

取阿哌沙班片樣品（批號：20140202）細粉適量，共5份，分別按“1.2”項下條件制備供試品溶液，按色譜條件進樣分析，平行操作5次，測定含量。結果，阿哌沙班含量的RSD為0.41%（n＝5），表明本方法的重復性良好。

1.8 加樣回收率試驗

精密稱取9份已知含量的阿哌沙班樣品細粉，置于100ml量瓶中，每3份分別加入4、5、6mg阿哌沙班對照品，再添加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液，得 3組不同濃度的供試品溶液，按色譜條件注入HPLC儀測定，計算回收率。回收率為99.93%，RSD為0.3%，回收率符合要求。

1.9 有關物質測定

每批阿哌沙班片分別取 5片置于研缽中研細、混勻，取細粉適量（約相當于阿哌沙班5mg），置于10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，超聲溶解后制成每1ml中含0.5mg阿哌沙班的溶液，濾過，收集續濾液，即為供試品溶液。按色譜條件注入高效液相色譜儀測定，結果符合規定。

2.討論

阿哌沙班作為第三個上市的新一代口服抗凝藥，能有效地預防血栓，用于接受過髖部或膝部置換手術患者的血栓預防，其安全性和有效性均超出同類藥物，具有極高的經濟價值。據國家食品藥品監督管理總局藥品審評中心查詢，當前已有數十家醫藥企業對其進行原料藥以及制劑的仿制申報。所以建立該藥物完善的質量控制方法具有很好的現實意義。

色譜檢測過程選擇 200～400nm波長進行光譜掃描，發現在293nm檢測波長附近阿哌沙班和相關成分均有最大吸收，因此確定本試驗檢測波長為293nm。

在預實驗中發現，柱溫25℃時拖尾因子為0.89，柱溫30℃時拖尾因子則為1.53。可見柱溫升高會引起色譜峰的拖尾，對測定其有關物質可能會產生不同程度的影響。為確保整個試驗結果的準確性，測定過程中應嚴格控制柱溫參數，防止出現拖尾影響。

綜上所述，本試驗建立的方法操作簡便、結果準確、靈敏度高，適用于阿哌沙班片的含量及有關物質測定，對建立阿哌沙班片的質量控制標準有一定的參考價值。

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[2]張先龍.新型口服抗凝藥物阿哌沙班[J].中華關節外科雜志，2014，8（4）：543.

[3]周建光，周穎奇.新型口服抗凝藥的特點和臨床研究[J].臨床藥物治療雜志，2013，11（5）：8

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1672-5018（2017）02-010-1