MMP-2和HBME-1在分化型甲狀腺癌中的表達(dá)及其臨床意義

張笑男 曹萬輝 張曉平

(吉林大學(xué)第一臨床醫(yī)院甲狀腺外科，吉林 長春 130021)

甲狀腺癌是最常見的頭頸部惡性腫瘤，臨床常見病例為分化型甲狀腺癌。盡管手術(shù)是治療分化型甲狀腺癌最有效的手段，但侵襲和轉(zhuǎn)移確實(shí)被認(rèn)為是復(fù)發(fā)和死亡的主要原因。因此其他治療方法如放療也被采用，但是隨著分子生物化學(xué)技術(shù)的發(fā)展，研究者們熱忠研究甲狀腺癌特異性標(biāo)志的蛋白質(zhì)和基因，但尚無進(jìn)展。因此，人們通過不同標(biāo)志物的聯(lián)合檢測來達(dá)到比較和互補(bǔ)。本研究的目的是觀察基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2和間皮瘤相關(guān)抗體-1(HBME-1)的聯(lián)合表達(dá)，并探索他們?cè)谠\斷和預(yù)后中的作用。

1 材料和方法

1.1組織樣本 50例甲狀腺癌病例取自吉林大學(xué)第一醫(yī)院2006～2009年手術(shù)切除病理科成檔的在蠟標(biāo)本，其中男14例，女36例，中位年齡44歲，未經(jīng)治療。另外55例良性甲狀腺濾泡組織包括15例增生的結(jié)節(jié)，15例濾泡性腺瘤，25例正常甲狀腺濾泡組織。磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗設(shè)陰性對(duì)照。

1.2臨床病理資料 有關(guān)甲狀腺癌的分期，目前最常用的是TNM 分期。根據(jù)1997年國際抗癌聯(lián)盟和美國癌癥協(xié)會(huì)2002年第6次修定的TNM 分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ+Ⅱ期33例，Ⅲ+Ⅳ期17例。所有癌癥病例中<45歲者33例，≥45歲者17例；腫瘤直徑≤2 cm者27例，腫瘤直徑>2 cm者23例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者21例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者29例；

1.3結(jié)果判斷 所有免疫組織化學(xué)切片均由甲狀腺外科醫(yī)生和病理科醫(yī)生雙盲診斷，差異為5%～10%，然后共同決定診斷。以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)和(或)細(xì)胞膜上有棕黃色顆粒且染色強(qiáng)度高于背景的非特異性著色者為陽性細(xì)胞。每張切片均選取5個(gè)高倍視野(×400),分別計(jì)數(shù)每一視野中陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)。5個(gè)視野陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，為該陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)結(jié)果。參考Cheung等〔1〕介紹的方法，根據(jù)著色程度和范圍，以無著染細(xì)胞或著染細(xì)胞<10%計(jì)為陰性，陽性病例分為：“+”為著染細(xì)胞數(shù)≥10%而<25%；“”為著染細(xì)胞數(shù)≥25%而<50%；“”為著染細(xì)胞數(shù)≥50%而<75%。其中“+”“”“”和“”合計(jì)為陽性例數(shù)。HBME-1染色表現(xiàn)為基底膜和管腔表面染色〔2〕，MMP-2表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)染色。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS10.0軟件，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，靈敏度=癌的陽性例數(shù)/癌的總數(shù)×100%;特異度=良性的陰性例數(shù)/良性的總例數(shù)×100%；準(zhǔn)確度=(癌的陽性例數(shù)+良性的陰性例數(shù))/(癌的總例數(shù)+良性的總例數(shù))。

2 結(jié) 果

2.1MMP-2、HBME-1的表達(dá) 50例分化型甲狀腺癌中MMP-2陽性(64%)明顯高于對(duì)照組(25%，P<0.01)。乳頭狀癌(82.9%)高于濾泡狀癌(20.0%，P<0.01)。 50例分化型甲狀腺癌中98%HBME-1表達(dá)陽性，高于對(duì)照組(6.7%，P<0.01)。HBME-1在乳頭狀癌與濾泡狀癌中均高表達(dá)(100%，93.3%，P>0.05)。

2.2HBME-1、MMP-2在不同分化型甲狀腺癌臨床病理特征表達(dá) 見表1。

表1 MMP-2 及HBME-1在不同臨床病理特征甲狀腺癌中的表達(dá)〔n(%)〕

2.3HBME-1及MMP-2診斷分化型甲狀腺癌的敏感性、特異性及準(zhǔn)確性 50例中有49例分化型甲狀腺癌HBME-1陽性，22例MMP-2陽性。在分化型甲狀腺癌組及良性疾病作為對(duì)照組中HBME-1及MMP-2具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。對(duì)比MMP-2及HBME-1敏感性(64%，98%)、特異性(89.1%，96.4%)和準(zhǔn)確性(76.2%，97.2%)，說明HBME-1作為分化型甲狀腺癌的標(biāo)志物優(yōu)于MMP-2。但是HBME-1鑒別分化型甲狀腺癌的亞型——乳頭狀癌和濾泡狀癌時(shí)存在缺陷。然而，HBME-1與 MMP-2聯(lián)合檢測可以達(dá)到這個(gè)目的。

3 討 論

鑒別濾泡狀癌與濾泡狀腺瘤及乳頭狀癌與良性乳頭狀疾病非常具有挑戰(zhàn)性。盡管大多數(shù)人認(rèn)為免疫組化是診斷甲狀腺癌的輔助技術(shù)，但有人持相反觀點(diǎn)認(rèn)為尋找最佳檢測或聯(lián)合檢測鑒別分化型甲狀腺癌。本研究證實(shí)了HBME-1的作用，并且聯(lián)合檢測HBME-1和 MMP-2對(duì)于診斷分化型甲狀腺癌有較高的敏感性。HBME-1是針對(duì)間皮細(xì)胞微絨毛表面的單克隆抗體，盡管這一抗體最開始應(yīng)用于間皮瘤標(biāo)志物，但后續(xù)用于惡性甲狀腺疾病的診斷〔3〕。

腫瘤侵襲是一系列的觸發(fā)事件，包括從它的原始位置并通過周圍基質(zhì)侵入淋巴血管通路，盡管這些都與細(xì)胞外基質(zhì)降解相關(guān)，細(xì)胞基底膜成分的蛋白質(zhì)水解需要特異性蛋白酶。大量研究表明MMPs在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中起很重要的作用〔4〕。MMP-2的表達(dá)在一系列腫瘤侵襲的指標(biāo)中尤其重要〔5〕。從其他非實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ陀^察及臨床研究說明MMP-2在腫瘤侵襲中的重要性〔6〕。事實(shí)上，高水平的MMP-2表達(dá)與食管癌、胰腺癌、前列腺癌、肺癌及卵巢癌腫瘤侵襲行為及分型相關(guān)〔7～11〕。國外的一些研究〔12〕提出MMP-2的高表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)、較高的臨床分期、甲狀腺外侵犯及血管侵犯具有相關(guān)性。Maruyama等〔13〕通過免疫組織化學(xué)及定量檢測的方法評(píng)估MMP-2在甲狀腺良性及惡性疾病中的表達(dá)。這些結(jié)果表明了MMP-2與甲狀腺癌惡性進(jìn)展或轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。我們的研究得出如下結(jié)論：MMP-2的高表達(dá)與年齡與性別無關(guān)，但對(duì)腫瘤大小、包膜侵襲，臨床分期和轉(zhuǎn)移有提示意義，這與之前的報(bào)告不相符〔14〕。在這個(gè)研究中揭示了MMP-2在鑒別乳頭狀癌中的應(yīng)用，同時(shí)也是分化型甲狀腺癌良好的標(biāo)記物。HBME-1與MMP-2可以相互彌補(bǔ)。對(duì)于分化型甲狀腺癌HBME-1是優(yōu)于MMP-2的標(biāo)記物，因此，當(dāng)兩個(gè)標(biāo)記物都呈陽性表達(dá)，那么乳頭狀癌的可能性就很大。當(dāng)MMP-2強(qiáng)陽性表達(dá)時(shí)，很有可能揭示較差的預(yù)后。

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