CTHRC1在子宮內膜癌組織中的表達及其臨床意義

馮春翠 周 琦 徐伏蘭 廣 怡

CTHRC1在子宮內膜癌組織中的表達及其臨床意義

馮春翠 周 琦 徐伏蘭 廣 怡

目的 探討膠原三股螺旋重復蛋白1(CTHRC1)在子宮內膜癌中的表達情況及其臨床意義。方法 選取子宮內膜癌(癌癥組)、子宮內膜不典型增生(增生組)及正常子宮內膜(對照組)患者各50例，采用免疫組化法和酶聯免疫吸附測定(ELISA)法檢測CTHRC1蛋白在子宮內膜組織中的表達情況，并比較其表達情況與子宮內膜癌病理分級、臨床分期及是否有淋巴結轉移的關系。結果 CTHRC1主要表達在細胞質中，少許表達在細胞核中，其在癌癥組陽性表達43例(86%)，增生組陽性表達4例(8%)，對照組無陽性表達。CTHRC1蛋白在癌癥組中的表達明顯高于增生組及對照組(P<0.05)。CTHRC1在子宮內膜癌中的表達在病理分級、臨床分期及是否有淋巴結轉移方面差異有統計學意義(P<0.05)。結論 CTHRC1在子宮內膜癌患者體內高表達，且其表達與患者病理分級、臨床分期及是否有淋巴結轉移有關，有望成為子宮內膜癌發生發展的檢測指標之一。

子宮內膜癌；免疫組化；ELISA；表達

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:221～223)

子宮內膜癌是女性生殖道三大惡性腫瘤之一，其發病率逐年上升。歐美最近研究發現子宮內膜癌的發生率接近宮頸癌，且有年輕化的趨勢[1]。目前普遍認為在缺乏孕激素的狀態下，長期的雌激素刺激會增加子宮內膜癌的發病幾率，但是其具體的發病機制及疾病的發生發展仍不清楚。腫瘤的復發和轉移是導致癌癥患者死亡的主要原因[2]。近年來多項研究表明，膠原三股螺旋重復蛋白1(collagen triple helix repeat containing 1，CTHRC1)參與腫瘤的浸潤和轉移，并在多種實體腫瘤中檢測其高表達[3]。本研究采用免疫組化法分析CTHRC1在子宮內膜癌中的表達，并采用ELISA法檢測患者血清中CTHRC1水平，分析其與病理分級、臨床分期及是否有淋巴結轉移的關系，報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取子宮內膜癌(癌癥組)、子宮內膜不典型增生(增生組)及正常子宮內膜(對照組)患者各50例，子宮內膜癌組患者年齡52～70(60.87±7.97)歲；增生組患者年齡40～58(48.95±5.67)歲；正常組患者年齡53～71(61.87±3.28)歲。3組間年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 標本來源 子宮內膜癌組及增生組組織標本來源于治療前病理檢查標本；正常組標本來源于因功血、子宮肌瘤及子宮脫垂行子宮切除的患者。標本經過甲醛溶液固定后，經石蠟包埋，切片厚度3 μm。所有患者的血清均為空腹靜脈血，之前未接受治療。血液室溫自然凝固10～20 min，離心20 min取上層液即為血清，1∶20稀釋作為樣品。

1.2.2 試劑來源 CTHRC1酶聯免疫吸附測定(ELISA)試劑盒購于上海研卉生物科技有限公司，酶標板購自于JETPLATES公司。采用免疫組織化學SABC法，CTHRC1多克隆抗體購自Santa cruz公司，細胞免疫組化(SABC)和二氨基聯苯胺(DAB)試劑盒購自美國博士德生物工程有限公司。

1.2.3 實驗方法 ELISA采用間接法，按照試劑盒操作步驟包被、加樣、加酶標抗體、加底物液顯色、終止反應及結果判定進行。免疫組化采用SABC法按照試劑盒操作說明進行，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照，該試劑公司提供的陽性切片作為CTHRC1陽性對照。

1.3 結果判定

ELISA結果判定是測定吸光度(OD450)值。免疫組化所有標本均由2位病理醫生評定：CTHRC1主要在細胞質表達，少數表達于細胞核，光鏡下觀察到細胞質有棕黃色顆粒沉淀為陽性，不染色為陰性。評分參照王輝等[4]的評定方法進行評估，采用二級計分方式，取5個以上高倍鏡視野，根據陽性細胞所占視野比例計數：5%～24%為1分，≥25%～49%為2分，≥50%～75% 為3分，> 75%為4分。染色強度分類:淡黃色為1 分，黃或深黃色為2 分，褐或棕褐色為3 分。兩者計分相乘>1 為陽性。

1.4 統計學處理

采用SPSS 13.0進行統計學處理。計數資料間比較采用t檢驗或方差分析，組間比較采用q檢驗。χ2檢驗分析不同臨床病理因素(病理分型、臨床分級及有無淋巴結轉移)的CTHRC1表達情況，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 CTHRC1在不同子宮內膜組織中的表達情況

CTHRC1蛋白陽性表達呈棕黃色顆粒樣物質，主要表達在細胞質中，少數表達于細胞核。正常子宮內膜組織無表達；子宮內膜不典型增生中有極少量的表達；子宮內膜癌組織中細胞質和包膜上均有較強表達，少數細胞核上有表達。其陽性表達率在癌癥組、增生組及對照組中逐漸下降，CTHRC1在血清中的表達即OD450的表達量也逐漸下降，而且其表達量在癌癥組中與其他組別相比，差異有統計學意義(P<0.05)(表1)。

表1 CTHRC1在不同內膜組織中的表達

2.2 CTHRC1表達與子宮內膜癌不同臨床病理特征的關系

CTHRC1在癌癥組織中的表達與病理分級、臨床分型及有無淋巴結轉移有關(P<0.05)(表2)。

表2 CTHRC1的表達與子宮內膜癌不同臨床病理特征關系

3 討論

子宮內膜癌是女性生殖道常見的三大惡性腫瘤之一，其發病率逐年上升。歐美最近研究發現子宮內膜癌的發生率接近宮頸癌，且有年輕化的趨勢。目前子宮內膜癌的發病機制及其病因目前尚不清楚，因此，尋找子宮內膜癌發生發展機制、評估其預后的標志性分子，對于臨床指導子宮內膜癌的治療與病情預后的轉歸具有重要的意義。

膠原三股螺旋重復蛋白1(collagen triple helix repeat containing 1，CTHRC1)在大鼠損傷組織中首次被發現，主要表達在成纖維細胞和平滑肌細胞中，正常組織中未見其表達。Tang等[3]最先報道了CTHRC1 在惡性黑色素瘤中表達升高，且在轉移性黑色素瘤中的表達更高，同時發現抑制CTHRC1 的表達可以抑制腫瘤細胞遷移。隨后開始其在人實體腫瘤，如肝癌、大腸癌、宮頸癌等中研究，發現其表達與腫瘤的臨床分期、病理分級及是否有淋巴結的轉移等相關。

本研究探討CTHRC1在子宮內膜癌患者體內的表達情況。免疫組化及ELISA法均提示CTHRC1在子宮內膜癌患者體內高表達，且其表達水平隨疾病的嚴重程度而逐漸增加，各組間蛋白表達的差異均有統計學意義(P<0.05)；而且CTHRC1蛋白的表達與腫瘤的病理分型、臨床分期及有否轉移有關。由此推測CTHRC1可能參與子宮內膜癌的發生與發展。近年的研究發現CTHRC1參與癌細胞的發生發展及轉移的可能機制有：①血管的生成是腫瘤細胞生長發展及轉移的基礎，CTHRC1主要通過抑制膠原蛋白的沉積及促進細胞的遷移，進而促進血管重構，參與腫瘤發生發展和轉移[5]。②參與Wnt/PCP信號通路，促進細胞的遷移，減少膠原的沉積，而促進腫瘤的發展[6-7]。③CTHRC1誘發腫瘤細胞發生形態學改變，使其黏附及增殖增加，改善其生活環境，使其生存能力增加。④TGF及BMP4能夠誘導CTHRC1的表達，并能促進腫瘤細胞遷移[8]。其具體的作用機理仍需大量研究證實，其是否為腫瘤患者的特異性分子，亦需進一步的研究。

[1] 楊 曦，馬 珂，吳 成.子宮內膜癌的流行病學及高危因素〔J〕.實用婦產科雜志,2015，31(7)，485-488.

[2] Kim K,Ryu SY.Major clinical research advances in gynecologic cancer in 2009〔J〕.J Gynecol Oncol,2009,20(4):203-209.

[3] Tang L1,Dai DL,Su M,et al.Aberrant expression of collagen triple helix repeat containing 1 in human solid cancers〔J〕.Clin Cancer Res,2006,12(12):3716-3722.

[4] 王 輝，許 青.CTHRC1在食管鱗癌中的表達及其臨床意義〔J〕.臨床腫瘤學雜志,2015，20 (6)，531-534.

[5] Leclair RJ,Durmus T,Wang O,et al.CTHRCI is a novel inhibitor of transforming growth factor-beta signaling and neointimal lesion formation〔J〕.Circ Res,2007,100(6):826-833.

[6] S Yamamoto，O Nishimura，K Misaki,et al.Cthrcl selectively activates the planar cell polarity pathway of wnt signaling by stabilizing the wnt-receptor〔J〕.Complex Developmental Cell,2008,15(1):23-36.

[7] Tan F,Liu F,Liu H,et al.CTHRC1 is associated with peritonealcarcinomatosis in colorectal cancer:a new predictor for prognosis〔J〕.Med Oncol,2013,30(1):473.

[8] Pyagay P，Heroult M，Wang Q，et al.Collagen triple helix repeat containing 1,a novel secreted protein in injured and diseased arteries,inhibits collagen expression and promotes cell migration〔J〕.Circ Res，2005，96(2)：261-268.

(編輯：甘 艷)

Expression and Clinical Significance of CTHRC1 in Endometrial Cancer

FENGChuncui，ZHOUQi，XUFulan,etal.

CenterHospitalofXiaogan，Xiaogan，432100

Objective To explore the expression and clinical significance of CTHRC1 in endometrial cancer.Methods50 cases of endometrial cancer,50 cases of atypical endometrial hyperplasia and 50 cases of normal patients were selected.Using immunohistochemical method and ELISA method to detect the expression of CTHRC1 protein,and compared its expression with pathological grades,clinical stages and lymph node metastasis.Results CTHRC1 was mainly expressed in cytoplasm，with the positive expression rate of 86%(43 cases) in endometrial cancer group,8%(4 cases)in atypical endometrial hyperplasia group and 0 in the control group.The positive expression rate in endometrial cancer group was significantly different from that in the atypical endometrial hyperplasia and the control group(P<0.05).There was significant difference in CTHRC1 protein expression with pathological grades,clinical stages and lymph node metastasis(P<0.05).Conclusion CTHRC1 is highly expressed in endometrial cancer,and is correlated with pathological grades,clinical stages and lymph node metastasis,and it is expected to become one of the important indicators predicting the development of endometrial cancer.

Endometrial cancer；Immunohistochemistry；ELISA；Expression

432100 湖北省孝感市中心醫院

徐伏蘭

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.02.014

R737.33

A

1001-5930(2017)02-0221-03

2016-03-04

2016-08-02)