鱖魚苗種免疫預(yù)防傳染性脾腎壞死病生產(chǎn)試驗(yàn)

張德順，丁文嶺，方麗君，馬成鑫

（1.揚(yáng)州市江都區(qū)水產(chǎn)管理站，江蘇 揚(yáng)州 225200 2.揚(yáng)州市江都區(qū)小紀(jì)鎮(zhèn)水產(chǎn)站，江蘇 揚(yáng)州 225000）

鱖魚苗種免疫預(yù)防傳染性脾腎壞死病生產(chǎn)試驗(yàn)

張德順1，丁文嶺1，方麗君1，馬成鑫2

（1.揚(yáng)州市江都區(qū)水產(chǎn)管理站，江蘇 揚(yáng)州 225200 2.揚(yáng)州市江都區(qū)小紀(jì)鎮(zhèn)水產(chǎn)站，江蘇 揚(yáng)州 225000）

鱖魚傳染性脾腎壞死病，又稱鱖魚暴發(fā)性傳染病，是以脾腎壞死、腫大，鰓、肝失血變白，肝出血為主要特征的一種病毒性疫病，其病原為傳染性脾腎壞死病毒（Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV）。2013—2016年揚(yáng)州市水產(chǎn)生產(chǎn)技術(shù)指導(dǎo)站與揚(yáng)州市江都區(qū)水生動物預(yù)防控制中心協(xié)作，對鱖魚傳染性脾腎壞死病進(jìn)行了流行性病學(xué)調(diào)查、病原檢測、疫苗免疫等研究和生產(chǎn)試驗(yàn)工作。試驗(yàn)通過三組鱖魚精養(yǎng)塘對不同苗種來源及苗種疫苗免疫養(yǎng)殖模式、方式試驗(yàn)比較和探討，以及周邊精養(yǎng)塘鱖魚傳染性脾腎壞死病流行病學(xué)調(diào)查，試驗(yàn)池塘中，南方鱖魚苗種養(yǎng)殖發(fā)病病死率高達(dá)36.8%以上，長江親本繁殖的后代苗種發(fā)病率為17.2%以上，而南方鱖魚苗種在病害流行季節(jié)前15～20 d，通過疫苗注射，發(fā)病病死率明顯降低，尤其對鱖魚傳染性脾腎壞死病有較強(qiáng)的抗病力。江蘇省鱖魚養(yǎng)殖近年來發(fā)展較快，但鱖魚傳染性脾腎壞死病瀕發(fā)，發(fā)病病死率極高，已成為鱖魚養(yǎng)殖持續(xù)發(fā)展的瓶頸，采用疫苗注射方式對鱖魚傳染性脾腎壞死病進(jìn)行免疫在江蘇省尚為首例。因此，積極開展鱖魚病害檢疫，改良鱖魚苗種，推動鱖魚疫苗商品化生產(chǎn)和應(yīng)用，是發(fā)展鱖魚健康、持續(xù)增長的有效途徑。現(xiàn)將試驗(yàn)情況報告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)池塘苗種及疫苗來源

試驗(yàn)池塘選自揚(yáng)州市江都區(qū)鱖魚養(yǎng)殖重點(diǎn)區(qū)——江都區(qū)的淥洋湖水產(chǎn)養(yǎng)殖場6口鱖魚精養(yǎng)池塘，苗種來源分別為南方苗種、長江親本自繁自育苗種、南方苗經(jīng)本地培育后注射疫苗苗種。疫苗來源為中山大學(xué)生命科學(xué)院鱖魚疫苗中試產(chǎn)品。試驗(yàn)池塘面積、苗種來源、放養(yǎng)規(guī)格、數(shù)量情況見表1。

1.2 疫苗注射

選擇5#、6#池塘作鱖魚注射疫苗的試驗(yàn)塘。2015年6月18日，天氣晴朗，最高氣溫28℃，上午水溫23℃，早期放養(yǎng)的南方鱖魚苗經(jīng)一個多月養(yǎng)殖，規(guī)格已達(dá)30 g/尾。當(dāng)日采用人工拉網(wǎng)兩次，捕獲全塘80%的鱖魚6 480尾，暫養(yǎng)網(wǎng)箱中，采用連續(xù)注射器逐條注射疫苗，2 h后，將注射疫苗的鱖魚2 500尾放于6#池塘，3 980尾注射疫苗的鱖魚和原塘中留存未注射疫苗的鱖魚1 620尾混養(yǎng)于5#池塘。兩個池塘均用二氧化氯消毒，防止拉網(wǎng)受傷及針口感染。

1.3 病害流行情況

自7月份開始，水溫23℃以上，陸續(xù)有池塘開始發(fā)生鱖魚傳染性脾腎壞死病，隨著氣溫升高，持續(xù)陰雨天氣，該病病死率呈幾何級上升，至7月27日，全場600×667 m2鱖魚精養(yǎng)池塘，鱖魚傳染性脾腎壞死病發(fā)病率達(dá)60%，病死率40%。7月27日后，氣溫達(dá)35～38℃后，病魚死亡量明顯減少，8月6日，氣溫降低30℃，一周后，該病發(fā)病率又明顯升高，但病死率較前期減少。

1.4 病魚實(shí)驗(yàn)室檢查

表1 試驗(yàn)池苗種放養(yǎng)情況

發(fā)病池塘起初有幾尾病魚，在水中緩慢游動，對外界反應(yīng)不敏感，撈網(wǎng)較易獲取，多數(shù)病魚頭、鰓蓋、下頜、胸鰭和腹鰭均有不同程度出血，鰓絲呈白色或顏色變淡，當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖戶稱為“白鰓病”。剖開腹部后，肝顏色較正常鱖魚淡，呈灰白色或蒼白色，有紫黑色出血點(diǎn)，被養(yǎng)殖戶稱為“花肝病”。脾臟、后腎、前腎腫大，呈暗紅色；大部分病魚空胃，腸道無食。以上癥狀可作為鱖魚傳染性脾腎壞死病臨床診斷指標(biāo)。

1.5 病原檢測

在試驗(yàn)塘分別取鱖魚不同的生長階段垂死病魚2～5尾，剖開腹部，采集脾、腎組織，冰浴勻漿，取樣依次于離心機(jī)6 000 r/min、8 000 r/min離心，取上清液，通過PCR擴(kuò)增后，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，于凝膠成像系統(tǒng)紫外線觀察，發(fā)現(xiàn)目的條帶，判斷為陽性，否則再進(jìn)行二次擴(kuò)增，若發(fā)現(xiàn)目的條帶，仍判為陽性，未出現(xiàn)條帶則判為陰性。

2 試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果見表2。

3 討論與分析

表2 試驗(yàn)池塘鱖魚發(fā)病死亡情況

試驗(yàn)池塘中，鱖魚魚種經(jīng)注射疫苗后，在病害流行季節(jié)，鱖魚發(fā)病病死率明顯降低，在垂死病魚中，用PCR檢測，雖仍檢測到鱖魚傳染性脾腎壞死病病毒，但病魚鰓、肝臟、脾腎等器官組織未發(fā)現(xiàn)病變和明顯癥狀。試驗(yàn)表明，鱖魚魚種經(jīng)注射疫苗后，機(jī)體產(chǎn)生脾腎傳染性壞死病病毒抗體，具有顯著免疫效果。

試驗(yàn)池塘中，3#、4#池塘苗種自繁自育，親本來自長江良種親本保護(hù)區(qū)，繁殖的后代感染鱖魚傳染性脾腎壞死病有所減少，全區(qū)放養(yǎng)自繁自育苗種池塘有10口，面積70×667 m2，有3口共24×667 m2池塘感染鱖魚傳染性脾腎壞死病，病死率為18%。試驗(yàn)表明，良種親本繁殖的后代苗種對鱖魚傳染性脾腎壞死病雖有一定的抗病力，但在周邊池塘暴發(fā)該病時，也會感染發(fā)病死亡。

試驗(yàn)池塘中，南方苗種在病害流行季節(jié)，尤其在梅雨季節(jié)，氣溫28～30℃期間，發(fā)病病死率急劇上升，呈暴發(fā)性死亡。試驗(yàn)表明，近年的南方苗種對鱖魚傳染性脾腎壞死病抗病力較弱，從全場及周邊鱖魚養(yǎng)殖區(qū)域病害調(diào)查情況統(tǒng)計，發(fā)病率達(dá)65%，病死率達(dá)50%。

由于外地購回的鱖魚苗種生產(chǎn)企業(yè)或個人不注重親本選種、良種更新以及病害檢疫，親本自身攜帶鱖魚傳染性脾腎壞死病病毒，通過垂直方式傳播后代，當(dāng)養(yǎng)殖環(huán)境條件符合發(fā)病條件時，導(dǎo)致暴發(fā)。另外，未經(jīng)選育的親本繁殖的后代對鱖魚傳染性脾腎壞死病抗病力差，在外部養(yǎng)殖條件適宜發(fā)病時，也會導(dǎo)致該病的發(fā)生。

10.3969/j.issn.1004-2091.2017.02.013

2016-08-31）

江蘇省水產(chǎn)三新工程重大項目（Y2013-27、D2015-15）