兩種糞便隱血檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用探討

史懷娣

摘要：目的 探討鄰聯(lián)甲苯胺法（化學(xué)法）與單克隆膠體金檢測(cè)法（免疫法）檢測(cè)糞便隱血的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 選取本院2015年4月～2016年3月糞便標(biāo)本100例，分別采用鄰聯(lián)甲苯胺法與單克隆膠體金檢測(cè)法進(jìn)行糞便隱血檢測(cè)。2種方法均參考試劑說(shuō)明書并按照全國(guó)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。結(jié)果 100例糞便標(biāo)本中鄰聯(lián)甲苯胺法檢出陽(yáng)性結(jié)果86例（86%），單克隆膠體金檢測(cè)法檢出陽(yáng)性結(jié)果68例（68%），二者一致性符合率為76%，有24% 的不符合率。結(jié)論 鄰聯(lián)甲苯胺法（化學(xué)法）特異性差，敏感性高，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性，而單克隆膠體金檢測(cè)法（免疫法）雖然特異性高，但對(duì)上消化道出血的標(biāo)本容易出現(xiàn)假陰性，兩種檢測(cè)方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，在臨床工作中單獨(dú)使用鄰聯(lián)甲苯胺法或單克隆膠體金檢測(cè)法都可能因其方法學(xué)的限制而產(chǎn)生一定的假陰性（漏檢）或假陽(yáng)性（誤診），如果一份標(biāo)本同時(shí)使用這兩種方法檢測(cè)，能有效避免假陰性和假陽(yáng)性，提高準(zhǔn)確性，避免誤診和漏診，更具有臨床應(yīng)用價(jià)值。

關(guān)鍵詞：糞便潛血；鄰聯(lián)甲苯胺；單克隆膠體金

糞便隱血試驗(yàn)主要用于消化道慢性出血、消化道腫瘤的篩檢。目前，消化道腫瘤的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，危害著人類的健康，而臨床上仍缺乏有效的早期診斷手段[1]。目前，臨床上應(yīng)用的糞便隱血檢測(cè)的方法主要有化學(xué)法和免疫法，化學(xué)法種類較多，如鄰聯(lián)甲苯胺法、愈創(chuàng)木酯法等。化學(xué)法特異性 差[1]，且受飲食和藥物的影響，極易出現(xiàn)假陽(yáng)性，干擾臨床的診斷。免疫法目前應(yīng)用最多的為單克隆膠體金檢測(cè)法，但在某些情況下也會(huì)出現(xiàn)假陰性。故筆者通過(guò)實(shí)驗(yàn)探討2種糞便隱血檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用，為進(jìn)一步說(shuō)明在臨床工作中如果2種方法同時(shí)使用，取長(zhǎng)補(bǔ)短，才能得出更準(zhǔn)確的試驗(yàn)結(jié)果，提高消化道腫瘤的早期檢出率及對(duì)治療效果提供更有意義的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1糞便標(biāo)本來(lái)源 選取本院2015年4月～2016年3月100例無(wú)重復(fù)門診和住院患者的新鮮糞便（糞便從采集到檢測(cè)時(shí)間不超過(guò)1 h），患者年齡在12～91歲，平均年齡（45±12）歲，其中女59例（非月經(jīng)期），男41例。

1.2試劑

1.2.1單克隆膠體金檢測(cè)法 采用艾博生物醫(yī)藥（杭州）有限公司生產(chǎn)的膠體金檢測(cè)試紙，規(guī)格為50人份/盒。

1.2.2鄰聯(lián)甲苯胺法 10g/L鄰聯(lián)甲苯胺冰醋酸溶液和3%過(guò)氧化氫。10 g/L鄰聯(lián)甲苯胺冰醋酸溶液[2]：取鄰聯(lián)甲苯胺1 g，溶于冰乙酸及無(wú)水乙醇各50 ml的混合液中，置棕色瓶?jī)?nèi)，保存于4℃冰箱，可用2～12 w，若有變色，應(yīng)重新配置。

1.3方法

1.3.1單克隆膠體金檢測(cè)法操作方法參見試劑說(shuō)明書 將樣品杯標(biāo)記后放于水平操作臺(tái)面上，加入約0.5 ml的蒸餾水（或去離子水），用采樣棒挑取糞便10～50 mg（相當(dāng)于綠豆粒大小）放入杯內(nèi)，并混勻待用（與蒸餾水混勻的糞便樣本應(yīng)在1 h內(nèi)盡快檢測(cè)）。然后從原包裝鋁箔袋中取出試劑，將試劑箭頭所指的一端浸入樣本溶液中，注意：樣本液面不能超過(guò)試劑條的“MAX”標(biāo)記線。等待紫紅色條帶出現(xiàn)，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)在5 min時(shí)判讀，10 min后判讀結(jié)果無(wú)效。

1.3.2鄰聯(lián)甲苯胺法操作方法[3] 用小木棍挑取少量糞便，涂在消毒棉簽或白瓷板上，滴加10 g/L鄰聯(lián)甲苯胺冰醋酸溶液2～3滴與糞便上，再滴加3%過(guò)氧化氫2～3滴，立即觀察結(jié)果，在2 min內(nèi)顯藍(lán)色為陽(yáng)性。

1.4檢測(cè)原理

1.4.1單克隆膠體金檢測(cè)法的原理 單克隆膠體金采用雙抗夾心法，試劑含有被事先固定于膜上檢測(cè)區(qū)（T）的抗人血紅蛋白抗體和質(zhì)控區(qū)（C）的相應(yīng)抗體，以及固定于標(biāo)記墊上的抗人血紅蛋白抗體。

1.4.2鄰聯(lián)甲苯胺法的原理 血紅蛋白中的亞鐵血紅素有類似過(guò)氧化物酶活性，能催化過(guò)氧化氫作為電子受體使色原（如鄰聯(lián)甲苯胺）氧化而顯色（如鄰聯(lián)甲苯胺氧化成鄰甲偶氮苯顯色藍(lán)色）。

2 結(jié)果

選取的100例新鮮糞便標(biāo)本采用鄰聯(lián)甲苯胺法與單克隆膠體檢測(cè)法同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，鄰聯(lián)甲苯胺法檢出陽(yáng)性結(jié)果86例（86%），單克隆膠體金檢測(cè)法檢出陽(yáng)性結(jié)果68例（68%），如果以單克隆膠體金檢測(cè)法為標(biāo)準(zhǔn)，則鄰聯(lián)甲苯胺法假陽(yáng)性率為18%[（86-68）/100]。二者一致性符合率為76%，有24%的不符合率。統(tǒng)計(jì)兩種檢測(cè)方法符合率的情況，見表1。

3 討論

通過(guò)上面結(jié)果可以看出鄰聯(lián)甲苯胺法（化學(xué)法）的陽(yáng)性率明顯高于單克隆膠體金檢測(cè)法（免疫法），如果以單克隆膠體金檢測(cè)法為標(biāo)準(zhǔn)，則鄰聯(lián)甲苯胺法假陽(yáng)性率為18%[（86-68）/100]。

鄰聯(lián)甲苯胺法（化學(xué)法）根據(jù)其原理可以看出，如果糞便中含有一定量的除人血紅蛋白外的其他具有類似過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)（如動(dòng)物血、魚、肝臟、富含氧化酶的葉綠蔬菜等或服用鐵劑、氧化性藥物等），或糞便標(biāo)本被具有氧化性物質(zhì)污染時(shí)，糞便隱血試驗(yàn)即可出現(xiàn)假陽(yáng)性，如果糞便中含有大量的還原物質(zhì)（如大量維生素C），抵消了人血紅蛋白的類過(guò)氧化物酶活性作用，糞便隱血即可出現(xiàn)假陰性。故，使用鄰聯(lián)甲苯胺法（化學(xué)法）檢測(cè)糞便隱血試驗(yàn)需對(duì)患者飲食有一定限制，才能盡可能避免假陽(yáng)性，避免誤診。但是，鄰聯(lián)甲苯胺法（化學(xué)法）結(jié)果判讀不但能定性還能半定量報(bào)告結(jié)果，更有助于臨床療效觀察。

單克隆膠體金檢測(cè)法（免疫法）根據(jù)其原理可以看出，①特異性高，其檢測(cè)只針對(duì)人血紅蛋白，結(jié)果不受動(dòng)物血紅蛋白和辣根過(guò)氧化物酶等具有氧化性的物質(zhì)、大量維生素C等還原類物質(zhì)干擾，故檢測(cè)前患者不必限制飲食。②靈敏度[1]高血紅蛋白達(dá)到200 mg/L或0.03 mg/g糞便時(shí)即可呈陽(yáng)性。但在某些情況下，單克隆膠體金檢測(cè)法（免疫法）會(huì)出現(xiàn)假陰性的結(jié)果，如消化道大量出血，糞便血紅蛋白濃度過(guò)高，即抗原過(guò)剩（后帶現(xiàn)象）、上消化道出血，血紅蛋白被消化道的某些酶降解變性，喪失原有的免疫原性、糞便留取時(shí)間較長(zhǎng)，血紅蛋白被細(xì)菌分解、試劑上的單克隆抗體與糞便中的血紅蛋白抗原不匹配。當(dāng)使用單克隆膠體金檢測(cè)法（免疫法）時(shí)，對(duì)糞便標(biāo)本稀釋后在測(cè)定，可大大降低“后帶現(xiàn)象”引起的假陰性。單克隆膠體金檢測(cè)法（免疫法）結(jié)果判讀只能定性不能半定量。

一般情況下，上消化道出血時(shí)鄰聯(lián)甲苯胺法（化學(xué)法）比單克隆膠體金檢測(cè)法（免疫法）陽(yáng)性檢出率高，下消化道出血時(shí)單克隆膠體金檢測(cè)法（免疫法）比鄰聯(lián)甲苯胺法（化學(xué)法）靈敏度高[3]。

糞便隱血檢測(cè)對(duì)消化道出血的診斷具有重要的價(jià)值，現(xiàn)常作為消化道腫瘤早期篩檢的一個(gè)重要指標(biāo)，如果常規(guī)體檢中加入糞便隱血試驗(yàn)，一些結(jié)腸癌和直腸癌在早期就可以被檢出，從而可以提高這些癌癥的治愈率[4]，消化道潰瘍病性出血糞便隱血試驗(yàn)為間斷性陽(yáng)性，而消化道惡性腫瘤性出血糞便隱血試驗(yàn)為持續(xù)性陽(yáng)性，以此可作為良性、惡性出血的鑒別診斷。

綜上所述：既然糞便隱血試驗(yàn)如此重要，我們更應(yīng)該努力保證結(jié)果的快速、準(zhǔn)確、可靠，筆者經(jīng)過(guò)本次數(shù)據(jù)分析和探討，總結(jié)出鄰聯(lián)甲苯胺法（化學(xué)法）和單克隆膠體金檢測(cè)法（免疫法）聯(lián)合應(yīng)用，取長(zhǎng)補(bǔ)短，能夠避免一些假陽(yáng)性和假陰性，大大提高了消化道出血的檢出率和準(zhǔn)確性，避免了漏診或誤診，且聯(lián)合應(yīng)用后報(bào)告結(jié)果既能定性又能半定量，更有助于臨床療效觀察。

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編輯/張燕