宮頸微小浸潤癌上皮及間質細胞基質金屬蛋白酶-2、α-平滑肌肌動蛋白的表達及意義

郭業兵，張廷國

(1山東大學，濟南250012；2東阿縣人民醫院)

宮頸微小浸潤癌上皮及間質細胞基質金屬蛋白酶-2、α-平滑肌肌動蛋白的表達及意義

郭業兵1,2，張廷國1

(1山東大學，濟南250012；2東阿縣人民醫院)

目的 觀察基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)在宮頸高級別上皮內瘤變(CIN Ⅲ)、宮頸微小浸潤癌(MIC)上皮及間質細胞的表達情況，探討二者對MIC鑒別診斷的臨床意義。方法 選取正常宮頸組織20例(對照組)、CIN Ⅲ50例、MIC 30例的石蠟標本，采用免疫組化通用二步法檢測三種組織上皮及間質細胞中的MMP-2、α-SMA表達，并分析MMP-2與α-SMA表達的關系。結果 對照組、CIN Ⅲ組、MIC組上皮、間質細胞MMP-2表達差異有統計學意義(P均<0.01)。三組上皮細胞均無α-SMA表達，三組間質細胞α-SMA表達差異有統計學意義(P<0.01)。三組上皮及間質細胞中MMP-2與α-SMA表達呈正相關(P均<0.05)。結論 聯合檢測宮頸上皮、間質細胞MMP-2、α-SMA表達能有效鑒別CINⅢ與MIC，對指導MIC的臨床治療有重要意義。

宮頸微小浸潤癌；宮頸上皮細胞內瘤變； 基質金屬蛋白酶-2；α-平滑肌肌動蛋白

高危型人乳頭瘤病毒及宮頸上皮內瘤變(CIN)與宮頸癌的發生緊密相關，并且在多種因素協同作用下誘發和促進宮頸疾病的進展[1]。近年來隨著社會經濟發展、人們防癌意識提高及篩查技術的廣泛普及，越來越多的CIN及微小浸潤癌(MIC)被檢出，經過適當干預及處理，阻斷了疾病的進展，獲得良好的預后。由于高級別CIN(CIN Ⅲ)與MIC的臨床處理原則及預后不同，因此準確診斷至關重要；而兩者在形態學診斷上存在交叉，故鑒別診斷存在許多困難。本研究通過探討基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)在CIN Ⅲ、MIC上皮及間質細胞中的表達情況，探索兩者對CIN Ⅲ、MIC鑒別診斷的意義，從而為MIC的臨床診治提供可靠依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2013年1月～2015年10月在山東大學齊魯醫院和東阿縣人民醫院宮頸錐切及子宮全切組織石蠟標本100例，患者年齡27～72歲，中位年齡43.5歲；其中正常宮頸組織(對照組)、CIN Ⅲ、MIC分別為20例、50例、30例。患者均為首發病例，術前未接受放療及化療。CIN Ⅲ及MIC患者80例術前經陰道鏡多點活檢，病理診斷為CINⅡ～CIN Ⅲ，其中68例行宮頸錐切，12例行筋膜外子宮全切術，大體標本檢查均未見淋巴脈管間隙侵犯。30例MIC中，17例為CIN Ⅲ 不能除外早期浸潤，術后證實為MIC；其余13例活檢均未能術前診斷。MIC按照2009年FIGO子宮頸腫瘤標準分類：IA 1期18例，IA 2期12例。CIN Ⅲ及MIC患者除7例失訪外，其余均未有復發。

1.2 MMP-2、α-SMA表達檢測 所有標本經10%中性甲醛固定，常規石蠟包埋、切片,HE染色。MMP-2、α-SMA表達檢測采用免疫組化通用二步法，兔抗MMP-2(多克隆)購自北京中杉公司，鼠抗α-SMA(克隆號1A4)購自福建邁新公司。陽性對照為已知陽性切片，磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對照。選擇5個有代表性的高倍鏡視野，按照MP-2、α-SMA陽性細胞百分比和染色強度綜合判讀。染色強度：無染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。每個視野再分別計數100個細胞，計算陽性細胞百分比；陽性細胞百分比<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分。兩項評分相加，0分為-，1～2分為+，3～4分為++,5～6分為+++。

1.3 統計學方法 應用SPSS18.0統計軟件。等級資料用例數和百分比表示，組間比較采用非參數統計的Kruskal-Wallis檢驗；MMP-2與α-SMA表達的關系采用Spearman相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組上皮及間質細胞MMP-2表達 MMP-2表達主要定位于胞質。對照組、CIN Ⅲ組、MIC組上皮細胞中MMP-2表達陽性率分別為80%、96%、100%，差異有統計學意義(χ2=32.19，P<0.01)。MMP-2在間質細胞中表達主要集中于腫瘤周圍的成纖維細胞。對照組、CIN Ⅲ組、MIC組間質細胞中MMP-2表達陽性率分別為50%、92%、100%，差異有統計學意義(χ2=40.20，P<0.01)。見表1。

表1 三組上皮及間質細胞MMP-2表達(例)

2.2 三組上皮及間質細胞α-SMA表達 三組上皮細胞均不表達α-SMA,在間質細胞中不同程度表達。在CIN Ⅲ和MIC的間質細胞中，α-SMA在瘤灶周圍的纖維母細胞彌漫表達。三組間質細胞陽性率分別為10%、70%、86.6%，差異具有統計學意義(χ2=33.41，P<0.01)。見表2。

表2 三組間質細胞α-SMA表達比較(例)

2.3 MMP-2與α-SMA表達的關系 Spearman等級相關分析顯示，上皮細胞MMP-2表達與間質細胞MMP-2表達存在中度正相關(r=0.486，P<0.05)。上皮細胞MMP-2表達與間質細胞α-SMA表達存在低度正相關(r=0.266，P<0.05)，間質細胞MMP-2表達與間質細胞α-SMA表達存在低度正相關(r=0.324，P<0.05)。

3 討論

根據《2015年 NCCN宮頸癌臨床實踐指南》的要求，CIN Ⅲ患者首先推薦冷刀宮頸錐形切除術，然后視切緣及淋巴脈管間隙有無浸潤決定下一步的診治方案。無手術禁忌證的MIC患者推薦行擴大的子宮切除術(即筋膜外子宮切除術)；而有保留生育功能需求者，依據切緣及淋巴脈管間隙有無浸潤來決定下一步的治療措施[2]。目前，陰道鏡檢查、醋酸白實驗、影像學檢查、腫瘤標志物檢測及細胞學檢測對于CIN Ⅲ、MIC鑒別診斷意義不大。病理形態學上肯定宮頸癌浸潤的診斷標準包括腫瘤性間質細胞反應(間質細胞水腫、淋巴細胞浸潤、促纖維組織增生)、局部異常成熟的鱗狀上皮細胞(有人稱逆向分化)突破基底膜、上皮細胞-間質細胞界面不規則的“爪樣”外觀；并且CIN病變的間質細胞中嗜酸細胞浸潤常高度提示浸潤癌存在。但在實際工作中，由于對標準的把握存在很大的主觀性，相當一部分病例診斷的可重復性較差。

研究表明，腫瘤的發生、發展是由上皮細胞和間質細胞相互作用所構成的腫瘤宿主界面微環境的平衡狀態決定[3,4]。在腫瘤形成過程中，間質細胞改變往往早于其他細胞病變，不僅充當被動結構支架和功能的支持角色，而且在一定程度上誘發腫瘤的發生[5]。MMP是一組參與細胞外基質降解的鋅離子依賴性內鈦酶家族，其中MMP-2能特異降解細胞外基質和基底膜,被認為是腫瘤侵襲轉移過程中最直接和最重要的酶[6]。MMP-2在人體內廣泛表達，主要促進生長因子釋放，加強對血管基底膜分解，誘導形成新生血管網，并抑制細胞凋亡，促進腫瘤的侵襲、轉移,與腫瘤突破基底膜發生侵襲、轉移密切相關[7]。孫孝媛等[8]研究表明，MMP-2在乳腺癌的上皮細胞及間質細胞中均有不同的表達，且在腫瘤浸潤前沿高表達，提示其參與了乳腺癌的浸潤和轉移。本研究中發現MMP-2在對照組、CIN Ⅲ、MIC中的上皮細胞及間質細胞的表達呈上調趨勢并存在統計學差異，可以推斷MMP-2的表達增強與腫瘤的侵襲密切相關。近年研究發現，腫瘤相關纖維母細胞(CAFs)是腫瘤間質細胞中重要的功能細胞,能分泌多種蛋白酶和細胞因子,是主要的腫瘤基質產生細胞,其表型發生了顯著變化，可表達α-SMA,促進腫瘤上皮細胞發生功能和形態改變，在腫瘤的生長、浸潤、轉移中發揮重要作用[9～12]。侯文靜等[13]用膠原酶消化法成功分離純化出CAFs，用蛋白質印跡法檢測宮頸癌CAFs高表達α-SMA，證明其具有成纖維細胞和平滑肌細胞雙重特性。多項研究證實，CAFs在乳腺癌、胃癌、直腸癌的發生、發展、轉移以及上皮與間質細胞轉化等過程中發揮重要作用[14，15]。本研究中α-SMA在正常宮頸間質細胞很少表達，在CIN Ⅲ中明顯表達增加，MIC中全部表達。表明上皮細胞惡變過程中，間質細胞轉化成為CAFs，其分泌蛋白溶解酶，破壞ECM和基底膜，促進腫瘤的浸潤和轉移。本研究還顯示，三組上皮細胞與間質細胞MMP-2表達、上皮細胞與間質細胞α-SMA表達、間質細胞與間質細胞α-SMA表達存在低度正相關。提示α-SMA陽性的CAFs可能除自身分泌MMP-2外，還能促進其周圍的癌細胞分泌MMP-2，共同參與細胞浸潤和轉移。

總之，MMP-2、α-SMA在不同宮頸病變中的表達存在差異，二者與宮頸癌的發生、發展密切相關。結合組織形態學特征，聯合檢測宮頸上皮及間質細胞的MMP-2、α-SMA表達對CIN Ⅲ與MIC的鑒別診斷有重要意義。

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張廷國(E-mail:ztguo@sdu.edu.cn)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.01.027

R737.33

B

1002-266X(2017)01-0076-03

2016-09-21)