孟魯司特治療小鼠嗜酸性粒細胞性胃腸炎療效觀察

王璇，萬代紅，高興娟，趙帥，汪嬌嬌

(煙臺毓璜頂醫院，山東煙臺 264000)

孟魯司特治療小鼠嗜酸性粒細胞性胃腸炎療效觀察

王璇，萬代紅，高興娟，趙帥，汪嬌嬌

(煙臺毓璜頂醫院，山東煙臺 264000)

目的 觀察孟魯司特治療卵清蛋白(OVA)誘導的小鼠嗜酸性粒細胞性胃腸炎 (EG)的療效，并探討其作用機制。方法 40只雌性Balb/c小鼠隨機分為正常對照組8只和OVA處理組32只。OVA處理組小鼠腹腔注射OVA和 Al(OH)3溶液行基礎致敏及強化致敏，繼之OVA灌胃激發胃腸道過敏。造模成功后，將OVA處理組再隨機分為模型組、孟魯司特組、強的松組、強的松+孟魯司特組各8只。模型組及各藥物治療組繼續給予OVA隔日灌胃激發胃腸反應，同時藥物治療組分別給予強的松、孟魯司特及二者聯合灌胃治療。觀察EG小鼠外周血嗜酸性粒細胞(EOS)計數變化，ELISA法檢測小鼠血清IgE水平,HE染色觀察小鼠胃腸黏膜組織病理學變化,免疫組化方法檢測小鼠空腸組織主要堿性蛋白(MBP)表達。結果 模型組小鼠外周血EOS計數、血清IgE水平較正常對照組明顯升高(P均<0.01)；與模型組比較，各藥物治療組小鼠外周血EOS計數、血清IgE水平降低(P均<0.05)。模型組小鼠空腸MBP表達較正常對照組明顯增強，各給藥組空腸MBP表達均較模型組減弱。模型組小鼠胃黏膜變薄、斷裂、下層充血，黏膜上皮細胞近胃腔端腺上皮脫落，有炎癥細胞浸潤。腸組織上皮細胞水腫，并見局灶性壞死、脫落，有大量炎性細胞浸潤。各給藥組小鼠胃腸黏膜各層結構基本正常，僅見輕微充血及炎癥細胞浸潤，上皮細胞結構基本正常。結論 孟魯司特通過降低EG小鼠的外周血EOS計數、IgE水平及空腸組織MBP表達，從而實現對EG的治療作用。

胃腸炎,嗜酸性粒細胞性；白三烯受體拮抗劑，孟魯司特；嗜酸性粒細胞；IgE；主要堿性蛋白；小鼠

嗜酸性粒細胞性胃腸炎 (EG) 是以胃腸道某些部位彌漫性或局限性嗜酸性粒細胞(EOS)異常浸潤為特征的胃腸道疾病。近年來國內外有用白三烯受體拮抗劑孟魯司特成功治療EG的臨床個例報道，但缺乏大樣本的臨床對照研究。2014年5月～2016年1月，本研究通過應用孟魯司特與激素對照治療EG小鼠模型，觀察其療效，為合理應用孟魯司特治療EG提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料 實驗動物：雌性Balb/c小鼠40只，體質量20～22 g，SPF級，購于北京實驗動物研究中心。主要藥物和試劑：卵清蛋白(OVA)、Al(OH)3為Sigma公司產品 ；孟魯司特片(劑量10 mg)為杭州默沙東制藥有限公司饋贈；潑尼松龍片(劑量5 mg)為北京雙鶴藥業股份有限公司生產。ELISA試劑盒、主要堿性蛋白(MBP)免疫組化試劑盒等為福州邁新生物技術開發有限公司產品。

1.2 動物分組及處理 40只小鼠適應性喂養1周后，隨機分為正常對照組8只和OVA處理組32只。第1天OVA處理組小鼠腹腔注射OVA和Al(OH)3溶液(50 μg/mg)一次以基礎致敏，第15天OVA處理組小鼠腹腔注射用生理鹽水配制的OVA溶液(50 μg/mg)一次達強化致敏，第20～24天給予OVA(50 mg)隔日灌胃激發胃腸道過敏，制備EG小鼠模型。正常對照組各時間點給予等劑量磷酸鹽緩沖鹽水處理。造模成功后，將OVA處理組再隨機分為模型組、孟魯司特組、強的松組、強的松+孟魯司特組各8只。第26天起OVA處理各組繼續給予OVA隔日灌胃激發胃腸反應，同時孟魯司特組、強的松組、強的松+孟魯司特組分別給予孟魯司特(1.5 mg/kg)、強的松(3 mg/kg)、強的松聯合孟魯司特灌胃，正常對照組、模型組給予相應體積的生理鹽水連續灌胃。連續給藥2周。

1.3 檢測方法 處理第40天取材，常規計數法檢測小鼠外周血EOS數量，ELISA法檢測小鼠血清IgE水平，HE染色觀察小鼠胃腸黏膜組織病理學變化，采用免疫組化方法檢測小鼠空腸組織MBP表達。小鼠空腸組織MBP表達結果判定方法：從每只動物腸組織切片中隨機抽取1張，在低倍鏡下選取陽性細胞最密的區域，隨機選取10個低倍視野，對染色反應陽性強度、陽性細胞數進行半定量分析。光鏡下觀察空腸組織形態學改變。

2 結果

2.1 五組外周血EOS計數 連續給藥2周后，模型組小鼠血清EOS數量較正常對照組明顯升高(P<0.01)。各給藥組小鼠外周血EOS數量較模型組降低(P均<0.05)。強的松組、孟魯司特組和孟魯司特+強的松組小鼠外周血EOS數量比較差異無統計學意義(P均>0.05)。見圖1。

注： 與正常對照組比較，*P<0.01；與模型組比較，#P<0.05。

圖1 五組外周血EOS計數

2.2 五組血清IgE水平變化 連續給藥2周后，模型組小鼠血清IgE水平較正常對照組明顯升高(P<0.01)。孟魯司特+強的松組、孟魯司特組和強的松組血清IgE水平較模型組均降低(P均<0.05)，各給藥組間血清IgE水平比較差異無統計學意義(P均>0.05)。見圖2。

注： 與正常對照組比較，*P<0.01；與模型組比較，#P<0.05。

圖2 五組血清IgE水平

2.3 五組空腸組織MBP表達變化 正常對照組空腸組織MBP染色強度為±、陽性細胞數為-，模型組為+++、+++，孟魯司特+強的松組、孟魯司特組、強的松組均為+、+。正常對照組小鼠空腸MBP表達弱，模型組小鼠空腸MBP表達明顯增強，各給藥組空腸MBP表達均較模型組減弱。各給藥組空腸MBP表達無差異。

2.4 五組胃腸組織病理變化 藥物治療2周，正常對照組胃腸黏膜結構正常，厚薄均勻、規則、完整，未見水腫、充血及炎癥細胞浸潤，黏膜上皮腺細胞均正常，上皮細胞未見壞死、脫落。模型組胃黏膜變薄、斷裂，下層充血，黏膜上皮細胞近胃腔端腺上皮脫落，有炎癥細胞浸潤。腸組織上皮細胞水腫、并見局灶性壞死、脫落，有大量炎性細胞浸潤。各給藥組小鼠胃、腸黏膜各層結構基本正常，僅見輕微充血及炎癥細胞浸潤，上皮細胞結構基本正常。

3 討論

EG主要特征為胃腸道彌漫性或局限性EOS異常浸潤，臨床可表現為腹痛、惡心、嘔吐、腹瀉等，胃腸道病理檢查可見EOS異常浸潤，血液檢查80%的患者有外周血EOS增多。食物過敏誘發的EG患者血中IgE增高，部分EG患者的胃腸道黏膜中發現有IgE的增高[1]。到目前為止,沒有FDI批準的特異治療EG的藥物，也沒有關于EG治療的隨機前瞻性臨床試驗。因此，EG的治療僅依據治療者的臨床經驗和患者臨床表現的嚴重程度而定。當前EG治療主要是口服糖皮質激素，大多數患者臨床癥狀可改善，組織學檢查也有好轉，外周血EOS正常，但減量后易復發，停藥后復發率為55%[2]。長期應用糖皮質激素會有水電解質紊亂、庫興綜合征、高血糖、生長抑制、骨質疏松、垂體及腎上腺皮質反應低下等不良反應，可影響兒童的生長發育，并且少數還存在糖皮質激素依賴和應用大劑量激素病情仍無改善情況[3]。1999年，Neustrom等[4]首次報道了應用孟魯司特成功治療EG患者，可使其臨床癥狀緩解；內鏡活檢顯示腸道病理組織學完全改善，外周血EOS降低。但應用孟魯司特治療EG的作用機制報道較少。

OVA誘發EG小鼠模型顯示EOS浸潤胃腸道是EG重要的發病機制[5～7]。EOS的浸潤可能造成腺窩增生,上皮細胞壞死和絨毛狀斷裂。激活的嗜酸粒細胞毒性蛋白MBP也可以對腸道黏膜造成損傷。MBP可通過補體和細胞因子受體的參與觸發EOS，可導致廣泛的EOS活性趨化因子的產生。流行病學研究結果還表明，在EG患者的胃腸組織中存在顯著的細胞外MBP沉積[8]。胃腸組織中MBP主要通過毒覃堿M2受體發揮作用,使M2受體功能障礙而增加平滑肌細胞的反應性,又可促使神經軸突壞死,降低胃蠕動和胃排空功能,還可以觸發肥大細胞和嗜堿性細胞脫顆粒,引起組織炎癥反應[9,10]。本研究顯示,孟魯司特、強的松治療均可以顯著改善OVA激發小鼠血液EOS的水平，降低MBP在空腸的表達，表明孟魯司特可通過顯著減少EOS浸潤胃腸組織，進而減少MBP產生而改善EG的胃腸道癥狀。

Foroughi等[11]研究表明在EOS的炎癥反應中，IgE的介導過程起了重要作用，并揭示抗IgE可能是一個潛在治療EOS相關胃腸道疾病的方法。有資料顯示孟魯司特能明顯降低血清IgE水平[12，13]。本研究也證實,OVA激發小鼠血中IgE明顯提高，而用孟魯司特治療可使IgE明顯下降至接近正常水平，且與強的松組比較無統計學差異。上述結果提示孟魯司特可通過抑制IgE介導的炎癥反應起到保護胃腸道的治療作用。本研究顯示，模型組小鼠胃腸病理組織學檢查存在胃腸組織損傷和炎癥細胞浸潤以及廣泛的胃腸黏膜結構紊亂、變薄、斷裂和混濁腫脹。給藥治療后，各治療組胃腸黏膜損傷基本修復。

總之，孟魯司特可使EG小鼠外周血EOS、IgE水平下降，空腸組織MBP表達降低，防止胃腸黏膜損傷。

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煙臺市科技計劃項目(2014WS018)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.01.011

R573.3

A

1002-266X(2017)01-0035-03

2016-11-09)