標(biāo)本溶血對重氮法測定膽紅素的影響

韋曉星 楊麗珍 楊況甜 韋雪丹 黎宇

摘要：目的 探討標(biāo)本溶血對重氮法測定膽紅素結(jié)果的影響。方法 選取健康者的血標(biāo)本檢測溶血前和溶血后總膽紅素、直接和間接膽紅素的測定值。結(jié)果 溶血時標(biāo)本的總膽紅素測定值與不溶血時的測定值無明顯變化，無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；溶血時標(biāo)本的直接和間接膽紅素測定值與不溶血時的測定值有顯著差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 嚴(yán)重溶血對直接和間接膽紅素的測定結(jié)果影響顯著。

關(guān)鍵詞：溶血；重氮法；測定；總膽紅素；直接膽紅素

Effect of Hemolysis on Heavy Nitrogen Determination of Bilirubin

WEI Xiao-xing1，YANG Li-zhen1，YANG Kuang-tian1，WEI Xue-dan1，LI Yu2

（1.Department of Blood Transfusion ，The Fourth Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Liuzhou 545005，Guangxi，China；2.Department of Clinical Laboratory，The Fourth Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Liuzhou 545005，Guangxi，China）

Abstract：Objective To study the effect of hemolysis on the results of the determination of bilirubin by the method of hemolysis. Methods The blood samples from healthy subjects were selected to detect the total bilirubin， direct and indirect bilirubin before and after hemolysis. Results The total bilirubin hemolysis specimens was no obvious change and determination of hemolysis value was not statistically significant （P>0.05）； hemolysis direct and indirect bilirubin were measured values were significantly different from those determined not hemolysis values were statistically significant （P<0.05）. Conclusion Severe hemolysis has a significant influence on the results of direct and indirect bilirubin.

Key words：Hemolysis； Diazo method； Determination；Total bilirubin； Direct bilirubin

血清膽紅素是用于診斷肝膽疾病和鑒別黃疸性質(zhì)的重要指標(biāo)[1]。但在實際臨床標(biāo)本檢測中，溶血已經(jīng)成為影響其檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的重要原因之一。本文用人造溶血標(biāo)本，對溶血前與溶血后標(biāo)本進(jìn)行檢測，意在分析溶血對膽紅素測定結(jié)果的影響。

1資料與方法

1.1一般材料 選取到我院體檢的健康成年人血清60例，要求體檢者肝腎功能在正常范圍內(nèi)及各項指標(biāo)基本正常，無相關(guān)疾病及藥物使用史。標(biāo)本無黃疸、溶血或高脂血狀態(tài)。

1.2儀器和試劑 羅氏全自動生化分析儀D2400和P800及羅氏配套檢測總膽紅素、直接膽紅素試劑；離心機(jī)為湖南湘儀L-530低速臺式離心機(jī)。

1.3檢驗方法

1.3.1所選取標(biāo)本以3000 r/min離心10 min分離血清，用羅氏全自動生化學(xué)分析儀檢測每份標(biāo)本中總膽紅素、直接和間接膽紅素含量，并記錄好數(shù)據(jù)。

1.3.2用真空注射器反復(fù)抽打標(biāo)本中的血液，使其發(fā)生溶血后離心分離血清，根據(jù)肉眼觀察溶血盡量為嚴(yán)重溶血程度。

1.3.3用羅氏全自動生化分析儀再次檢測溶血后的3組血清膽紅素含量，記錄好數(shù)據(jù)并進(jìn)行對比分析。

以上所有檢驗操作嚴(yán)格按照廠家提供的說明書及科室制定的SOP文件執(zhí)行。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組數(shù)據(jù)比較采用t檢驗。

2結(jié)果

溶血前標(biāo)本的總膽紅素與溶血后的測定值無明顯變化，無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），而溶血后直接和間接膽紅素有顯著異常，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3討論

在正常情況下，血清中的膽紅素大部分是由衰老紅細(xì)胞凋亡破壞所釋放的血紅蛋白分解代謝而來。釋放的血紅蛋白在肝、脾及骨髓等網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞中分解成珠蛋白和血紅素，后者由單核吞噬系統(tǒng)細(xì)胞微粒體血紅素加氧酶的催化，生成一種膽綠素的產(chǎn)物，膽綠素被還原酶還原成未結(jié)合膽紅素即間接膽紅素。在肝臟中，未結(jié)合膽紅素被肝細(xì)胞攝取后，在肝細(xì)胞滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶的催化下，與葡萄糖醛酸結(jié)合生成結(jié)合膽紅素即直接膽紅素。當(dāng)機(jī)體內(nèi)發(fā)生溶血時，紅細(xì)胞被大量破壞，血液中非結(jié)合膽紅素形成增多，而結(jié)合膽紅素變化程度不大。

本文實驗結(jié)果表明標(biāo)本溶血對總膽紅素的測定值無明顯影響，但對直接膽紅素和間接膽紅素的測定結(jié)果影響顯著。其主要原因為在血液標(biāo)本發(fā)生嚴(yán)重溶血時，紅細(xì)胞的血紅素成分進(jìn)入到血清，使得血清顏色變紅，背景變暗，阻礙了儀器比色的光路傳導(dǎo)和透射，降低了儀器光路接收器對檢測光線的接收識別的敏感性和識別力，導(dǎo)致直接膽紅素測定結(jié)果大大偏低，甚至出現(xiàn)負(fù)值。同時，總膽紅素測定值基本無變化，由于間接膽紅素不是直接測定項目，其結(jié)果為總膽紅素值減去直接膽紅素的值換算出來，因此間接膽紅素出現(xiàn)假性增加的結(jié)果。且隨著溶血程度的加重，偏離程度也會加深。再者，血清中的結(jié)合膽紅素可直接與重氮試劑反應(yīng)生成偶氮膽紅素，而非結(jié)合膽紅素需要加速劑方可與重氮試劑反應(yīng)生成偶氮膽紅素。溶血后大量的血紅蛋白可競爭性的抑制直接膽紅素與重氮試劑反應(yīng)而生成的偶氮膽紅素減少，也還可以被亞硝酸氧化為高鐵血紅蛋白干擾吸光度的測定[2]，導(dǎo)致直接膽紅素測定結(jié)果低于真值。此外，當(dāng)血液離體后，其生物活性依然存在，標(biāo)本中單核吞噬系統(tǒng)仍然具有將血紅蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)槲唇Y(jié)合膽紅素的能力[3]，使間接膽紅素升高。

綜上所述，標(biāo)本溶血對膽紅素檢驗結(jié)果的影響較大。如何有效的減少溶血對膽紅素檢測的影響，除了相關(guān)醫(yī)護(hù)人員在標(biāo)本采集、運(yùn)送中避免溶血之外，檢驗人員要做好儀器的定標(biāo)、質(zhì)控及校準(zhǔn)，在接收標(biāo)本或上機(jī)操作中，如發(fā)現(xiàn)標(biāo)本為溶血狀態(tài)，應(yīng)當(dāng)主動與臨床醫(yī)生聯(lián)系，結(jié)合臨床排除體內(nèi)溶血的可能。若不是體內(nèi)溶血，建議重新采集標(biāo)本或備注標(biāo)本溶血并做合理的誤差分析。只有相關(guān)醫(yī)務(wù)人員共同把關(guān)，才能確保標(biāo)本檢測結(jié)果的質(zhì)量，幫助臨床醫(yī)生更好的掌握患者的真實病情及指導(dǎo)用藥。

參考文獻(xiàn)：

[1]李懷玉.人為標(biāo)本溶血對重氮法檢測膽紅素結(jié)果的影響[J].廣西醫(yī)學(xué)，2005，27（3）：369-370.

[2]陳美舟，蔡嘯.常見分析前因素對臨床生化日常檢驗項目的影響[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2012，7：92-93.

[3]科溫主編，胡金麟主譯.病理生理學(xué)手冊[M].第1版.北京：科學(xué)出版社，2002：585.

編輯/丁一