Th17細胞在宮頸癌患者外周血中的比例及臨床意義

張園，孫榕，馮陽春，黃艷春

(1 新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院，烏魯木齊 830011；2 新疆博州人民醫(yī)院)

Th17細胞在宮頸癌患者外周血中的比例及臨床意義

張園1，孫榕2，馮陽春1，黃艷春1

(1 新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院，烏魯木齊 830011；2 新疆博州人民醫(yī)院)

目的 探討外周血Th17細胞數(shù)量與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。方法 選取宮頸癌初治患者50例(宮頸癌組)，宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)患者25例(CIN組)，成年體檢健康女性25例(對照組)。采用流式細胞術(shù)檢測各組外周血Th17細胞占CD4+T細胞的比例；分析Th17細胞比例與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 宮頸癌組、CIN組和對照組外周血Th17細胞比例分別為(2.02±0.46)%、(1.36±0.31)%、(0.58±0.19)%，組間兩兩比較P均<0.01；外周血Th17細胞比例與宮頸癌患者國際婦產(chǎn)聯(lián)盟(FIGO)分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤均呈正相關(guān)(r分別為0.74、0.43、0.54，P均<0.05)，與組織分化程度無關(guān)(P>0.05)。結(jié)論 宮頸癌患者外周血Th17細胞數(shù)量增多；Th17細胞增多可促進宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。

宮頸癌；Th17細胞；外周血；流式細胞術(shù)

宮頸癌的發(fā)病率在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中居首位，其發(fā)病率和病死率呈逐年升高的趨勢[1,2]。Th17細胞是近年來新發(fā)現(xiàn)的一類輔助性T細胞，因能夠特異性地分泌細胞因子IL-17而得名。IL-17具有強烈的促炎癥作用，能夠招募中性粒細胞并使其活化，其與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系是近些年來腫瘤免疫領(lǐng)域的熱點問題[3]。由于腫瘤類型和實驗動物模型的不同，目前關(guān)于Th17細胞在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用的觀點尚不統(tǒng)一。本研究探討Th17細胞在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用和意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年1～12月在新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院婦科住院的宮頸癌初治患者50例作為宮頸癌組，年齡41～69(54.23±6.99)歲；鱗癌38例，腺癌12例；國際婦產(chǎn)聯(lián)盟(FIGO)分期Ⅰ期11例，Ⅱ期14例，Ⅲ期15例，Ⅳ期10例。另選取同期住院的宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)患者25例(CIN組)，年齡34～67(51.54±5.78)歲；其中CIN Ⅰ級8例，CIN Ⅱ級10例，CIN Ⅲ級7例。選取成年體檢健康女性25例作為對照組，年齡25～61(48.59±6.11)歲。三組年齡具有可比性。所有研究對象無自身免疫性疾病史，無傳染病史以及其他惡性腫瘤。

1.2 外周血Th17細胞比例檢測 采用流式細胞術(shù)。采集研究對象外周靜脈血3 mL，并肝素抗凝。在加入200 μL肝素鈉抗凝全血的無菌試管中，加入等量RPMI 1640培養(yǎng)基(Gibco公司)、含小牛血清(杭州四季青生物公司)混勻，加入2 μL Leukocyte Activation Cocktail(美國BD公司)，37 ℃、5% CO2刺激培養(yǎng)4～6 h(每2 h混勻一次)，加入10 μL CD4-PC5(美國Beckman coulter公司)及同型對照進行細胞表面分子染色，加入溶血素500 μL混勻室溫避光10 min，PBS洗滌棄上清，經(jīng)固定和破膜后(固定破膜劑試劑盒為ebioscience公司)，加入IL-17-PC7抗體(美國BioLegend產(chǎn)品)20 μL及同型對照進行胞內(nèi)抗體染色，室溫孵育30 min，加入500 μL PBS重懸細胞，上機檢測(FC500流式細胞儀，美國Beckman coulter公司)。CD4+IL-17+細胞代表Th17細胞。分析外周血Th17細胞比例與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 各組外周血Th17細胞比例比較 宮頸癌組、CIN組和對照組外周血中Th17細胞比例分別為(2.02±0.46)%、(1.36±0.31)%、(0.58±0.19)%，組間兩兩比較P均<0.01。見插頁Ⅱ圖6。

2.2 外周血Th17細胞比例與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 宮頸癌患者外周血Th17細胞水平與患者FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤有關(guān)(P均<0.05)，與組織分化程度無關(guān)(P>0.05)。Th17細胞比例與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤均呈正相關(guān)(r分別為0.74、0.43和0.54，P均<0.05)。詳見表1。

表1 外周血Th17細胞比例與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

高危型人乳頭瘤病毒(HPV)持續(xù)感染是WHO公認的宮頸癌致病因素之一[4]。多數(shù)情況下HPV感染可通過體液和細胞免疫應(yīng)答被清除，當機體免疫力失調(diào)，不能啟動有效的免疫應(yīng)答時則無法徹底清除HPV感染，導致宮頸癌的發(fā)生[5]，故機體免疫功能的狀態(tài)與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)。Th17細胞是2005年發(fā)現(xiàn)的能特異分泌IL-17的新型CD4+T細胞亞群[6]，近年來成為腫瘤免疫領(lǐng)域研究的熱點。

IL-17細胞因子包括六個同源性家族成員[7]，按其發(fā)現(xiàn)的順序依次命名為IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E(亦稱IL-25)和IL-17F，目前僅IL-17A、IL-25和IL-17F的促炎性因子作用得以確認，IL-17A與IL-17F在功能和數(shù)量上占主導地位，IL-17A是目前研究重點。本研究采用的流式細胞術(shù)抗體亦為抗IL-17A，能反映IL-17細胞因子的表達水平。Th17細胞被認為與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切關(guān)系。Kryczek等[8]研究顯示，卵巢癌患者外周血及癌組織中Th17細胞表達明顯升高，并且通過IL-17和IFN-γ之間的協(xié)同作用，Th17細胞可刺激CXCL9和CXCL10生產(chǎn)招募效應(yīng)T細胞到腫瘤微環(huán)境中。有研究發(fā)現(xiàn)，從黑色素瘤[9]、乳腺癌[10]和結(jié)腸癌[11]的腫瘤浸潤性淋巴細胞(TILs)中發(fā)現(xiàn)Th17細胞升高，提示CD4+Th17細胞增多可能是腫瘤患者的一般特征[12]。鼻咽癌患者外周血及腫瘤組織中Th17細胞明顯多于正常鼻咽組織和健康對照者外周血，說明Th17細胞在鼻咽癌腫瘤微環(huán)境中的高表達可能與巨噬細胞抑制因子有密切關(guān)系[13]。

本研究CIN與宮頸癌患者外周血中Th17細胞數(shù)量均明顯高于對照組，提示Th17細胞在CIN及宮頸癌變的相關(guān)免疫機制中起到一定作用，且可能與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。Kimura等[14]研究發(fā)現(xiàn)，許多腫瘤細胞通過葡萄糖代謝產(chǎn)生大量的乳酸，激活I(lǐng)L-23/IL-17炎性通路，誘發(fā)炎癥，促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者外周血Th17細胞數(shù)量隨臨床分期及分化程度的加重而升高，提示Th17細胞的在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展過程中表現(xiàn)為促腫瘤生長的作用，其數(shù)量在一定程度上反映腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移潛能，可能與宮頸癌生物學行為惡化及不良預(yù)后有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)[15]，腫瘤組織中Thl7細胞增多能增加組織微血管密度，促進腫瘤血管上皮細胞生成。這可能是其促進腫瘤生長及轉(zhuǎn)移的重要機制之一。本研究發(fā)現(xiàn)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤宮頸癌患者Th17表達水平顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管浸潤者，提示Th17細胞數(shù)量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤密切相關(guān)，Th17表達高者更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和(或)脈管浸潤；對于外周血Th17細胞增多的宮頸癌患者術(shù)前應(yīng)高度警惕淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與脈管浸潤可能，需更徹底的手術(shù)治療。

綜上所述，宮頸癌患者外周血Th17細胞數(shù)量與疾病的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系，可作為宮頸癌的臨床分期和判斷患者機體免疫狀態(tài)的指標，對預(yù)測腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能、判斷疾病預(yù)后具有一定意義。

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新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院科研啟動基金項目(腫2014-04)。

黃艷春(E-mail： huangyanchun0619@sohu.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.04.013

R711.74

B

1002-266X(2017)04-0043-03

2016-05-24)