Arl4c在結腸癌中的表達及其臨床意義

訾永宏, 姬 樂, 陳紅梅, 李艷東

(1延安大學附屬醫院普外科， 延安 716099； 2延安職業技術學院護理系； 3西安醫學院第一附屬醫院病理科)

Arl4c在結腸癌中的表達及其臨床意義

訾永宏1, 姬 樂1, 陳紅梅2, 李艷東3

(1延安大學附屬醫院普外科， 延安 716099；2延安職業技術學院護理系；3西安醫學院第一附屬醫院病理科)

目的 探討ADP-核糖基化樣因子4C(ADP-ribosylation factor-like 4C，Arl4c)在結腸癌中的表達以及與臨床病理特征的關系。 方法 收集結腸癌組織標本70例和正常結腸黏膜組織標本70例，采用免疫組織化學方法檢測結腸癌組織及正常結腸黏膜中Arl4c的表達情況，并對其表達進行臨床病理特征分析。 結果 Arl4c在結腸癌組織中陽性表達率為55.7%，而在正常結腸黏膜中為11.4%，差異具有統計學意義(P<0.05)。Arl4c在結腸癌中的表達在不同病理分化程度間差異有統計學意義(P<0.05)，在不同性別、不同年齡、不同臨床分期及有無淋巴結轉移的患者中差異無統計學意義(P>0.05)。 結論 Arl4c在結腸癌中過表達，可能參與了結腸癌的發生發展，將可能成為結腸癌診斷治療的新靶點。

Arl4c； 結腸癌； 靶向治療

ADP-核糖基化樣因子4C(ADP-ribosylation factor-like 4C，Arl4c) 是Arl家族的成員，是ADP-核糖基化因子(ADP-ribosylation factor，Arf)的亞家族成員之一[1]。Arl在細胞內的囊泡運輸和信號轉導過程中具有重要作用，但其在體內的具體功能還沒有進一步的深入研究，近來Arl的生物學功能成為研究的熱點[2,3]。研究顯示Arl4c在肺癌中過表達[2]，關于結腸癌中Arl4c的研究報道較少，本課題對Arl4c在結腸癌中的表達進行研究，期望對結腸癌的診斷治療帶來新的思路，為對Arl4c的進一步研究奠定基礎。

1 材料和方法

1.1 材料

收集延安大學附屬醫院2011-06～2014-03經手術病理檢查的存蠟塊標本，其中結腸腺癌組織標本70例，癌旁正常結腸黏膜標本70例。兔抗人Arl4c抗體購自英國Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學染色 將經多聚甲醛固定、石蠟包埋的組織標本連續切片， 脫蠟、抗原修復，進行免疫組化檢測。免疫組化采用SP法，按照試劑說明書進行，DAB顯色，蘇木素復染，每組染色均用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.2.2 免疫組化結果判定 Arl4c陽性產物呈棕黃色顆粒狀，定位于細胞質，選取10個高倍視野，按照陽性細胞比例：陰性為0分，陽性細胞數<10%為1分，陽性細胞數10%-50%之間為2分，陽性細胞數50%-80%為3分，陽性細胞數>80%為4分；染色強度按著色程度分為：無染色為0分，黃色為弱陽性為1分，淺棕色為2分，棕褐色為3分，總分為2項評分之和，取總分≥4分為陽性表達。

1.3 統計學處理

采用SPSS13.0統計軟件對實驗結果進行統計學分析，采用χ2檢驗及Fisher確切概率法,以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Arl4c在結腸腺癌中的表達

免疫組織化學染色顯示Arl4c主要表達于結腸癌細胞胞質，70例結腸腺癌中Arl4c陽性表達為39例，陽性率為55.7%，而正常結腸黏膜僅8例表達，陽性率11.4%(見圖1，表1)。結果顯示Arl4c在結腸腺癌中的表達明顯高于正常結腸黏膜中的表達，其差異具有統計學意義(P<0.05)。

表1 結腸癌和正常結腸黏膜組織中Arl4c的表達情況 例(%)

Table 1 Expression of Arl4c in colon cancer and normal colon epithelium cases(%)

分組n陽性陰性χ2P結腸腺癌7039(55．7)?31(44．3)30．78<0．01正常結腸黏膜708(11．4)62(88．6)

與正常結腸黏膜相比，*P<0.05

圖1 Arl4c在結腸癌組織及正常結腸黏膜中免疫組織化學的表達Figure 1 Immunohistochemical expression of Arl4c in colon cancer and normal colon epithelium

2.2 結腸癌組織中Arl4c蛋白的表達水平與臨床病理因素的關系

Arl4c在結腸腺癌中的表達在不同性別、不同年齡、不同臨床分期及是否有淋巴結轉移的患者中差異無統計學意義(均P>0.05)，但在不同病理分化程度間差異有統計學意義(P<0.05，見表2)。

3 討論

Arl4c，也稱為Arl7，是含有192個氨基酸的屬于小GTP酶的蛋白[4]。Arl4c是Arf和Arl家族成員中的特殊成員，其特殊性在于其是唯一mRNA表達由肝臟X受體 - 類視黃醇X受體激動劑或人巨噬細胞中的膽固醇負載誘導，Arl4c可能在AI(apoA-I)依賴性膽固醇分泌過程中起作用并且可以通過與微管的相互作用調節細胞內囊泡運輸[5]。Arl4c蛋白在其C-末端含有核定位信號，在細胞膜、細胞質中都可以存在，其功能和定位取決于它們受控的GTP的結合和水解[6]。研究顯示Arl4c可能在膽固醇代謝紊亂中起著重要的角色[7]。

Arl4c與腫瘤的關系及其生物學功能仍然很大程度上未知，Fujii等[2]研究顯示Arl4c在肺癌中高表達，而在正常肺組織中未見表達，認為Arl4c參與肺癌的發生，并且可能用于抑制肺癌細胞增殖和侵襲的新的靶向治療，同時認為Arl4c表達的增加是由于APC、β-連環蛋白及Ras的遺傳改變，使得Wnt和EGF信號通路被活化，促進腫瘤的發生。但是Su等[3]研究顯示高表達Arl4c可以抑制卵巢癌細胞的遷移，但是對腫瘤細胞的增殖沒有影響，并且高表達Arl4c mRNA的卵巢癌患者具有良好的預后。因此Arl4c在不同腫瘤中表達情況不同猶如其龐大的未知的生物學功能一樣值得探討。

表2 Arl4c的表達與臨床病理因素的關系

Table 2 Relationship between Arl4c expression in colon cancer and clinicopathological characteristics

項目n陽性陰性χ2P性別0．035>0．05 男372116 女331815年齡0．875>0．05 ≤60歲341717 >60歲362214分化11．199<0．05 高分化26818 中分化332211 低分化1192臨床分期0．849>0．05 Ⅰ1367 Ⅱ311714 Ⅲ+Ⅳ261610淋巴結轉移0．466>0．05 有21138 無492623

本研究顯示Arl4c在結腸癌中過表達，表達率為55.7%，而在正常結腸黏膜中表達率僅為11.4%。這一結果與Fujii等[2]的研究結果是基本一致的，其研究中正常黏膜不表達。Matsumoto等[8]報道Wnt和生長因子信號傳導誘導Ar14c表達。 Arl4c在結腸癌與正常黏膜中表達的差異為以Arl4c為靶點的結腸癌的靶向治療帶來了期望。

結腸癌是胃腸道常見的腫瘤，嚴重危害著人類生命健康，隨著診斷技術及治療的進步，5年生存率僅為50%。結腸癌的發生是多基因多階段的過程，現代靶向技術的不斷進步，使得對結腸癌相關基因的探討變得更有意義。

本研究顯示Arl4c的表達在結腸癌不同性別、不同年齡、不同臨床分期及有無淋巴結轉移的患者中差異無統計學意義，而在不同病理分化的患者中差異有統計學意義。因此Arl4c過表達可能在結腸癌的發生及早期發展中起到重要作用，提示其可能是有價值的腫瘤治療的新靶點。有研究認為Ar14c是通過Wnt /β-連環蛋白通路參與上皮-間質轉化，這一轉化途徑是腫瘤發生的起始事件[9,10]。Arl4c有太多的未知需要我們去研究，Arl4c在結腸癌發生發展中的作用及機制，需要我們進一步深入研究。

[1] Gillingham A,Munro S.The small G proteins of the Arf family and their regulators[J].Annu Rev Cell Dev Biol,2007,23:579-611.

[2] Fujii S,Matsumoto S,Nojima S,etal.Arl4c expression in colorectal and lung cancers promotes tumorigenesis and may represent a novel therapeutic target[J].Oncogene,2014,12:1-11.

[3] Su D,Katsaros D,Xu SH,etal.ADP-ribosylation factor-like 4C(ARL4C),a novel ovarian cancer metastasis suppressor,identified by integrated genomics[J].Am J Transl Res,2015,7(2):242-256.

[4] Burd C,Strochlic T,SR GS.Arf-like GT-Pases:not so Arf-like after all[J].Trends Cell Biol,2004,14:687-694.

[5] Wei SM,Xie CG,Abe Y,etal.ADP-ribo-sylation factor like 7(ARL7) interacts with alpha-tubulin and modulates intracellular vesicular transport[J].Biochem Biophys Res Commun,2009,384:352-356.

[6] Hofmann I,Thompson A,Sanderson C,etal.The Arl4 family of small G proteins can recruit the cytohesin Arf6 exchange factors to the plasma membrane[J].Curr Biol,2007,17:711-716.

[7] Sun D,Zhang J,Xie JH,etal.MiR-26 controls LXR-dependent cholesterol efflux by targeting ABCA1 and ARL7[J].FEBS Letters,2012,586:1472-1479.

[8] Matsumoto S,Fujii S,Sato A,etal.A combination of Wnt and growth factor signaling induces Arl4c expression to form epithelial tubular structures[J].EMBO J,2014,33:702-718.

[9] Gujral TS,Chan M,Peshkin L,etal.A noncanonical Frizzled2 pathway regulates epithelial-mesenchymal transition and metastasis[J].Cell,2014,159:844-856.

[10] Arend RC,Londono-Joshi AI,Straughn JM Jr,etal.The Wnt/beta-catenin pathway in ovarian cancer:a review[J].Gynecol Oncol,2013,131:772-779.

Expression of Arl4c in colon cancer and its clinical pathological significance

ZI Yonghong1,JI Le1,CHEN Hongmei2,LI Yandong3

(1DepartmentofGeneralSurgery,AffiliatedHospitalofMedicalCollege,Yan’anUniversity,Yan’an716099,China;2DepartmentofNursing,Yan’anVocationalandTechnicalCollege;3DepartmentofPathology,FirstAffiliatedHospital,Xi’anMedicalUniversity)

ObjectiveTo explore the expression of Arl4c in colon cancer and its relationship with clinical pathological parameter of colon cancer.MethodsA total of 70 cases of colon cancer and 70 cases of normal colon epithelium were collected. The expression of Arl4c was measured by immnohistochemistry. The relationship between the expression of Arl4c and the clinical pathological parameter of colon cancer was analyzed.ResultsThe positive expression rate of Arl4c in colon cancer tissues was 55.7%, significantly higher than that in normal colon epithelium(P<0.05).Positive expression of Arl4c was correlated with the differentiation(P<0.05),but not correlated with gender, age, stage and lymph node metastasis(P>0.05).ConclusionArl4c is overexpressed in colon cancer,and it may be involved in colon cancer progression, and is considered as an attractive target for novel anticancer therapy.Key words: Arl4c； colon cancer； target therapy

陜西省教育廳科研計劃基金資助項目(12JK0765)

訾永宏, 男，1982-02生，本科，主治醫師，E-mail：ziyonghong2016@163.com

2016-10-25

R735.35

A

1007-6611(2017)01-0044-03

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.01.010