麗格海棠葉片再生體系的建立

王禹，于非，譚巍，劉萬達

(黑龍江省農(nóng)科院園藝分院，哈爾濱150069)

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麗格海棠葉片再生體系的建立

王禹，于非，譚巍，劉萬達

(黑龍江省農(nóng)科院園藝分院，哈爾濱150069)

以麗格海棠品種巴克斯(Barkos)的葉片為外植體，研究光照強度和時間、植物生長調(diào)節(jié)劑對不定芽誘導(dǎo)的影響；植物生長調(diào)節(jié)劑對不定芽增殖的影響；組培苗生根的最佳培養(yǎng)基。結(jié)果表明：麗格海棠葉片的最佳不定芽再生培養(yǎng)基為MS + 1mg/L TDZ + 0.1 mg/L 2,4-D或MS + 1mg/L 6-BA + 0.1mg/L TDZ，給予40d弱光培養(yǎng)可促進不定芽再生，再生率可達88.3%；不定芽最佳增殖培養(yǎng)基為 2mg/L 6-BA +0～0.1 mg/L NAA，組培苗最佳生根培養(yǎng)基為 MS + 0.1～0.3 mg/L IBA。

麗格海棠；不定芽再生；增殖系數(shù)；生根

麗格海棠又名玫瑰海棠，為秋海棠科秋海棠屬的多年生草本花卉[1]，在世界栽培廣泛，是我國近幾年冬春季市場上的主要盆栽花卉。麗格海棠是球根海棠和野生秋海棠的雜交品系[1]，花色艷麗,花形優(yōu)美，花期可長達半年之久，是具有較高的觀賞和經(jīng)濟價值的室內(nèi)花卉，開發(fā)前景極其廣闊[2]。

麗格海棠開花后結(jié)籽少，種子發(fā)芽率很低, 繁殖不易且成本高；莖段扦插成活率與繁殖系數(shù)低, 種質(zhì)退化嚴(yán)重[1-2]。組織培養(yǎng)繁殖系數(shù)高、生長周期短，可在短時間內(nèi)獲得大量無毒苗木，使生產(chǎn)成本降低，為商品化生產(chǎn)提供優(yōu)質(zhì)種苗。本試驗通過研究麗格海棠葉片誘導(dǎo)不定芽、不定芽增殖、組培苗生根的適宜培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，建立麗格海棠離體葉片再生體系，為提高麗格海棠商品化生產(chǎn)效率提供技術(shù)支持。

1 試驗材料

2 實驗內(nèi)容與方法

2.1 不同生長激素對不定芽誘導(dǎo)的影響

將采集的葉片自來水流沖洗20min，置于超凈工作臺中，酒精消毒20s，蒸餾水沖洗2次，0.1%的升汞消毒5min，蒸餾水沖洗2次，沿著主葉脈方向切成1cm×1cm大小的葉片組織，接種到不定芽再生培養(yǎng)基上，生長激素采用TDZ、6-BA、2，4-D。將接種完的葉片置于弱光條件下(不開補光燈)，培養(yǎng)40d，分別調(diào)查不定芽再生情況。

2.2 光照強度及時間對不定芽誘導(dǎo)的影響

不定芽再生培養(yǎng)基采用MS + 1mg/L TDZ + 0.1 mg/L 2,4-D，暗培養(yǎng)10d后光照培養(yǎng)30d；弱光培養(yǎng)10d后光照培養(yǎng)30d；弱光培養(yǎng)20d后光照培養(yǎng)20d；弱光培養(yǎng)40d，分別調(diào)查不定芽再生情況。

2.3 不同生長激素對不定芽增殖的影響

將不定芽從葉片切下，切成直徑不超過2cm的叢狀，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上，生長激素采用6-BA、NAA，分別調(diào)查不定芽增殖情況，每30d繼代1次。

2.4 不同生長激素對組培苗生根的影響

選取3cm高的組培苗，切成直徑不超過1cm的叢狀，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，生長激素采用IBA、NAA，分別調(diào)查組培苗生根情況。

3 結(jié)果與分析

3.1 適宜不定芽誘導(dǎo)生長激素篩選

對于通過直徑為149.2 mm的井眼，設(shè)計理論擴孔直徑為173.4 mm的擴孔鉆頭，其領(lǐng)眼段直徑為120.65 mm，可計算出刀翼擴孔角為58.89°。通過對階梯擴孔段刀翼進行鉆壓分級優(yōu)化，取優(yōu)化鉆壓分配比為0.34，階梯效應(yīng)指數(shù)為1[8,10]，可得一級擴孔直徑為140.87 mm，二級擴孔直徑為173.4 mm。

表1 生長激素對不定芽誘導(dǎo)的影響

從表1得出隨著TDZ濃度的升高不定芽產(chǎn)生速度加快，再生比率也增高，但當(dāng)TDZ濃度達到2 mg/L時，不定芽出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，且隨著濃度升高越來越嚴(yán)重；6-BA和TDZ同時使用，TDZ濃度達到0.2 mg/L時，不定芽出現(xiàn)褐化現(xiàn)象；隨著2,04-D濃度的升高，葉片產(chǎn)生的愈傷越來越多，且不易分化出不定芽。綜合以上因素，麗格海棠葉片的最佳不定芽再生培養(yǎng)基為MS + 1mg/L TDZ + 0.1 mg/L 2,4-D或MS + 1mg/L 6-BA + 0.1mg/L TDZ。

3.2 適宜不定芽誘導(dǎo)光照強度

表2 光照強度對不定芽誘導(dǎo)的影響

從表2得出弱光培養(yǎng)20d后光照培養(yǎng)20d或弱光培養(yǎng)(不開補光燈)40d都有利于誘導(dǎo)麗格海棠不定芽的再生，生產(chǎn)上建議使用40d弱光培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本。

3.3 適宜不定芽增殖生長激素篩選

表3 生長激素對不定芽增殖的影響

從表3得出隨著6-BA濃度的增高不定芽分化速度加快和增殖倍數(shù)提高，但6-BA濃度達到3mg/L時，芽生長勢減弱；隨著NAA濃度的提高易生成根，根生成后不定芽增殖速度減慢，因此，麗格海棠不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基為2mg/L 6-BA + 0～0.1 mg/L NAA，增殖系數(shù)可達5.8。

3.4 適宜組培苗生根生長激素篩選

表4 生長激素對組培苗生根的影響

從表4得出IBA濃度的升高對麗格海棠組培苗生根有促進作用，但IBA濃度達到0.3 mg/L以上，對組培苗生長有抑制作用。因此，組培苗生根可選用0.1～0.3mg/L IBA，可添加0.1mg/L NAA促進組培苗生長。

4 結(jié)論與討論

麗格海棠葉片的最佳不定芽再生培養(yǎng)基為MS + 1mg/L TDZ + 0.1 mg/L 2,4-D或MS + 1mg/L 6-BA + 0.1mg/L TDZ，給予40d弱光培養(yǎng)可促進不定芽再生，再生率可達88.3%；40d后將不定芽從葉片切下，切成直徑不超過2cm的叢狀，接到增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基為 2mg/L 6-BA + 0～0.1 mg/L NAA，增殖系數(shù)可達5.8，根據(jù)實際需要可繼續(xù)增殖，每30d繼代1次；選取長成3cm高的組培苗，切成直徑不超過1cm的叢狀，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基為 MS + 0.1～0.3 mg/L IBA，組培苗生根且長成5cm高時可馴化。

從實驗得出高濃度的細(xì)胞分裂素對不定芽再生和增殖有促進作用，但會導(dǎo)致芽生長不良；高濃度的IBA對麗格海棠組培苗生根及生長有促進作用，但會導(dǎo)致組培苗生長不良，因此，在生產(chǎn)中應(yīng)結(jié)合不定芽和組培苗生長勢而調(diào)節(jié)激素濃度。實驗還得出在不定芽誘導(dǎo)過程中，弱光培養(yǎng)20d后光照培養(yǎng)20d或弱光培養(yǎng)(不開補光燈)40d都有利于誘導(dǎo)麗格海棠不定芽的再生，但生產(chǎn)中應(yīng)以降低生產(chǎn)成本為主，選用40d弱光培養(yǎng)。麗格海棠組培苗葉片和莖較脆，在生根時建議切成叢狀，利于生根和馴化。

[1]張瑞越,季勤,李燕.培養(yǎng)及接種方式對麗格海棠組培快繁的影響[J].淮陰師范學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版),2009,8(3):246-249.

[2]曹福亮,陳穎,桂仁意.麗格海棠組培快繁技術(shù)體系的建立及優(yōu)化[J].林業(yè)科技開發(fā), 2009,23(5):82-84.

[3]任啟闖.麗格海棠離體快繁技術(shù)的研究[D].合肥：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

[4]文錦芬,鄧明華,施衛(wèi)省,等.麗格海棠離體培養(yǎng)植株再生關(guān)鍵技術(shù)的研究[J].昆明理工大學(xué)學(xué)報(理工版),2006(2):111-113+124.

[5]韓超.麗格海棠組織培養(yǎng)技術(shù)體系研究[D].保定：河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2005.

[6]張云峰,李靜,邢宇俊,等.麗格海棠再生體系建立的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007(3):663-664.

[7]達克東,張松,姜璐琰,等.麗格海棠離體葉片培養(yǎng)不定芽發(fā)生和微繁研究[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2002(1):93-95.

[8]耿明清.麗格海棠葉片的組織培養(yǎng)[J].遼寧師專學(xué)報(自然科學(xué)版),2012(1):99-101.

[9]陳林晶,張熹濤,曹玉鳳,等.麗格海棠組織培養(yǎng)技術(shù)的研究[J].北方園藝,2012(22):122-124.

Rieger Bego Leaves the Establishment of Regeneration System

Wang Yu, Yu Fei, Tan Wei,Liu Wanda

(Horticultural Sub-academy of Heilongjiang Academy of Agriculture Sciences, Harbin 150069)

In this experiment, the explants is Rieger Bego (Barkos) of leaves, we study the light intensity and plant growth regulator on influence of the adventitious bud induction; Plant growth regulator effects on adventitious bud proliferation and rooting of tissue culture seedling. The results show that the Rieger Bego optimum adventitious bud of leaves regeneration medium for MS + 1 mg/L TDZ + 0.1 mg/L 2, 4-D or MS + 1 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L TDZ, weak light training can promote in vitro shoot regeneration in 40d, regeneration rate is 88.3%; Best adventitious bud proliferation culture medium for 2 mg/L 6-BA + 0-0.1 mg/L NAA; The best rooting culture medium for MS + 0.1-0.3 mg/L IBA.

Riegerbego; Adventitious bud regeneration; Proliferation coefficient; Rooting culture

圖1 麗格海棠葉片不定芽再生

圖2 麗格海棠不定芽增殖

圖3 麗格海棠組培苗生根

圖4 麗格海棠組培苗

2016-09-11

黑龍江省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新工程項目(ZDO27)

王禹(1982-)，女，碩士研究生, 助理研究員，從事植物組織培養(yǎng)的研究，E-mail:liuwanda1982@126.com。

S682

A

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2017.01.002