DC-CIK聯合化療對肺癌患者Toll樣受體4及腫瘤標志物的影響

肖懷清 倪一鳴

(浙江大學醫學院附屬第一醫院心胸外科，浙江 杭州 310006)

DC-CIK聯合化療對肺癌患者Toll樣受體4及腫瘤標志物的影響

肖懷清1倪一鳴

(浙江大學醫學院附屬第一醫院心胸外科，浙江 杭州 310006)

目的 探討DC-CIK聯合化療對肺癌患者Toll樣受體(TLR)4及腫瘤標志物的影響。方法 206例肺癌患者根據入院時間先后順序分為觀察組和對照組各103例，對照組采用紫杉醇+順鉑化療，觀察組在對照組的基礎上加用DC-CIK免疫細胞治療，比較兩組患者近期療效、外周血細胞角蛋白19血清片段211(CYFRA211)、外周血單個核細胞最終TLR4 mRNA的表達量、鱗狀細胞癌相關抗原(SCC-Ag)、癌胚抗原(CEA)、癌抗原(CA)125等指標。結果 觀察組緩解率、疾病控制率均明顯高于對照組(62.14% vs 47.57%,89.32% vs 68.93%)(χ2=4.411,12.961；P<0.05)；觀察組TLR4 mRNA表達水平明顯低于對照組(t=4.090,P<0.05)；CYRAR211、SCC-Ag、CEA、CA125等含量均明顯低于對照組(t=13.881,17.416,22.786,8.201；P<0.05)。結論 DC-CIK聯合化療有助于降低肺癌患者血清TLR4表達及腫瘤標志物濃度，提高治療效果。

肺癌；DC-CIK； TLR4；腫瘤標志物

肺癌的病理類型多為鱗癌和小細胞肺癌〔1〕。早期中央型肺癌手術切除效果較好，但是由于肺癌發病隱匿，大多數肺癌在確診時已達中晚期，失去手術機會。紫杉醇+順鉑化療是肺癌化療的經典方案，治療效果較好。Toll樣受體(TLR)4是連接固有免疫及適應性免疫的重要橋梁，表達于多種免疫細胞〔2〕。肺癌患者外周血單個核細胞TLR4 mRNA的表達量與臨床病理相關，DC-CIK對免疫調控有一定的作用〔3〕。本文探討DC-CIK聯合化療對肺癌患者TLR4及類腫瘤標記物的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1月至2014年1月我院胸外科收住的206例確診肺癌的患者為研究對象，根據入院時間先后順序分為觀察組和對照組各103例。觀察組男53例，女50例；年齡45～82〔平均(62.14±5.63)〕歲；病理類型：腺癌35例，鱗癌57例，大細胞癌7例，其他4例。對照組男54例，女49例；年齡46～81〔平均(63.25±5.53)〕歲；病理類型：腺癌37例，鱗癌57例，大細胞癌6例，其他3例。兩組患者性別、年齡、病理類型等資料比較無統計學差異(P<0.05)。

1.2 納入標準與排除標準 納入標準：(1)有咳嗽、咳痰、咯血、胸悶等呼吸系統癥狀，伴或不伴胸內轉移或胸外表現；(2)纖維支氣管鏡或胸膜穿刺病理學檢查提示癌細胞病變；(3)患者所處病情階段宜首選化療；(4)報請醫院倫理委員會批準，所有患者均被告知研究事項且均簽署知情同意書。排除標準：(1)伴有心、肺、肝、腎等嚴重臟器功能不全；(2)肺癌進展晚期，預期壽命<3個月；(3)有糖尿病、甲狀腺功能亢進等嚴重代謝系統疾病；(4)由于各種原因不能使用紫杉醇+順鉑化療的患者；(5)對DC-CIK過敏或不耐受。

1.3 方法 所有患者入院后完善常規檢查，給予全身化療。第1天靜脈滴注紫杉醇135 mg/m2，第2～4天靜脈滴注順鉑40 mg/m2。每21 d重復一個周期，共治療4個周期。化療過程中，針對患者出現的不良反應給予對癥處理，如止吐、止瀉、抗過敏、護肝、護腎等。觀察組加用DC-CIK細胞免疫治療：患者保持清淡飲食，用血液循環機采集患者單個核細胞100 ml，37℃恒溫培育2 h，接下來的6 d內分別加入重組人粒細胞巨噬細胞刺激因子(GM-CSF，廈門特寶生物工程股份有限公司)、白細胞介素-4(IL-4，Peprotech 公司)、重組人干擾素-γ(IFN-γ，上海凱茂生物醫藥有限公司)、鼠抗人CD3單克隆抗體(古巴分子免疫學中心)誘導DC和CIK細胞成熟。在培養14 d后，分2次將DC-CIK細胞回輸給患者。

1.4 觀察指標

1.4.1 TLR4 mRNA表達 采用RT-PCR法檢測 TLR4 mRNA 的表達。提取總RNA進行紫外定量，鑒定 RNA 的質量后進行逆轉錄。使用25 μl PCR 體系，β-actin 為內參，通過擴增TLR4 mRNA 和 β-actin、循環、電泳等程序，最后置于凝膠成像分析儀觀察結果〔4〕。嚴格按各試劑盒說明書進行操作。

1.4.2 腫瘤標記物 化療前、療程結束1 w后采集空腹靜脈血4 ml，3 000 r/min離心10 min(離心半徑3 cm)。取血清，采用日立7600型全自動生化分析儀檢測血清血細胞角蛋白19血清片段211(CYFRA21-1)、癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA125)、鱗狀細胞癌相關抗原(SCC-Ag)等腫瘤標志物含量。采用化學發光法，試劑購自北京晶美生物工程有限公司。

1.4.3 近期療效 治療后，參照WHO“實體瘤療效評價標準(RECIST)”〔5〕評價腫瘤的近期療效。完全緩解(CR)：病變完全消失且維持時間≥4 w；部分緩解(PR)：腫瘤病灶最大徑與最大垂直徑乘積減少>50%，維持時間≥4 w；穩定(SD)：腫瘤病灶兩徑乘積減少<25%或增大<25%；進展(PD):腫瘤病灶兩徑乘積增大>25%或出現新病灶。緩解率為完全緩解、部分緩解占總例數的百分比，疾病控制率為完全緩解、部分緩解、穩定占總例數的百分比。

1.5 統計學方法 應用SPSS21.0軟件，計量資料采用t檢驗，近期療效等計數資料，采用χ2檢驗。

2 結 果

2.1 近期療效比較 觀察組CR 31例，PR 33例，SD 28 PD 11例；對照組CR 24例，PR 25例，SD 22例，PD 32例。觀察組緩解率〔64例(62.14%)〕、疾病控制率〔92例(89.32%)〕均明顯高于對照組〔49例(47.57%)、71例(68.93%)，P<0.05〕。

2.2 TLR4 mRNA表達量 化療前，兩組患者外周血單個核細胞TLR4 mRNA表達無統計學意義(觀察組0.52±0.17，對照組0.51±0.16，P>0.05)；化療后，兩組TLR4 mRNA表達量均明顯下降(P<0.05)，觀察組TLR4 mRNA表達水平(0.37±0.13)明顯低于對照組(0.45±0.15，P<0.05)。

2.3 腫瘤標記物 見表1。治療前，兩組血清CYRAR211、SCC-Ag、CEA、CA125等含量比較無統計學意義(P>0.05)；治療后，兩組上述指標均明顯降低，觀察組CYRAR211、SCC-Ag、CEA、CA125等含量均明顯低于對照組(P<0.05)。

組別CYRAR211SCC-AgCEACA125觀察組治療前9.12±1.248.65±1.3222.14±3.2548.21±5.36治療后3.36±0.521)2)2.45±0.441)2)4.32±0.541)2) 22.36±3.251)2)對照組治療前9.10±1.328.63±1.4522.08±3.4148.20±5.24治療后4.52±0.671)3.53±0.451)6.45±0.781)26.12±3.331)

與治療前比較：1)P<0.05；與對照組比較：2)P<0.05

3 討 論

與很多惡性腫瘤一樣，肺癌的起病非常隱匿，大部分患者出現臨床癥狀時就已經處于中晚期，失去手術機會。一般采用化療、放療、靶向治療等綜合治療〔6〕。肺癌的病理類型復雜，常用的化療方案也較為繁多，但是一直缺乏較為有效的化療方案，五年生存率僅為15%左右〔7〕。

DC-CIK細胞治療是過繼性細胞免疫治療的一種，主要通過注射自體經體外活化擴增的免疫活性細胞而起到免疫調節的作用，保護自身細胞并殺傷腫瘤細胞。DC和CIK細胞都是機體免疫活性最強的細胞，利用這兩種細胞體外免疫培養會起到較好的免疫效果〔8〕。岳愷〔9〕研究報道，與單純化療相比，DC-CIK 聯合化療治療晚期非小細胞肺癌可以提高緩解率，延長生存期。本文研究中觀察組疾病緩解率、疾病控制率均明顯高于對照組，提示DC-CIK細胞聯合化療對肺癌的治療效果明顯優于僅化療治療。TLR是一種特征性的模式識別受體，TLR4是其中最為重要的一種。在體液免疫和細胞免疫中都會有不同程度的表達，TLR4受體mRNA的表達程度越高，說明細胞對自身抗體的免疫抵抗越強〔10〕，化療就更難以發揮效果。本研究中，觀察組治療后TLR4受體mRNA表達顯著低于對照組，說明DC-CIK細胞聯合化療可以減弱免疫抵抗，增強免疫治療的效果。

CYFRA211 是存在于神經內分泌組織中的酵母酶，SCC-Ag是一類腫瘤相關抗原。CEA是具有人類胚胎抗原特異性的酸性糖蛋白。CA125是從生殖源性腫瘤中提取的一類單克隆抗體〔11〕。四種腫瘤標志物在肺癌患者體內呈特異性高表達，聯合檢測四種標志物可以提高對肺癌的診斷效能〔12〕。本文研究中，觀察組四種腫瘤標記物濃度均低于對照組，提示DC-CIK細胞聯合化療可降低肺癌患者血清腫瘤標記物水平。

1 趙 悅，李興德，韓立杰，等.中晚期非小細胞肺癌同步放化療聯合DC-CIK細胞生物治療的療效觀察〔J〕.現代腫瘤醫學，2015;23(3):335-8.

2 Chow SC,Gowing SD,Cools-Lartigue JJ,etal.Gram negative bacteria increase non-small cell lung cancer metastasis via Toll-like receptor 4 activation and mitogen-activated protein kinase phosphorylation 〔J〕.Int J Canner,2015;136(6):1341-50.

3 蔡智慧，張翠英，裴 毅，等.肺癌患者外周血單核細胞CD14 和 Toll 樣受體 4 的表達及意義〔J〕.中國藥物與臨床，2012;12(9):1149.

4 王細勇，杜開齊，張志豪，等.肺癌患者外周血單個核細胞 TLR4 mRNA 的表達及意義〔J〕.浙江實用醫學，2014;19(5)：309-11.

5 Eisenhauer EA,Therasse P,Boqaerts J,etal.New response evaluation criteria in solid tumours:revised RECIST guideline(version 1.1)〔J〕.Eur J Cancer,2009;45(2):228-47.

6 嚴桂英，徐振曄，鄧海濱，等.抗瘤增效方聯合化療對中晚期非小細胞肺癌患者腫瘤標志物影響的隨機對照研究〔J〕.中西醫結合學報，2011;9(5)：525-30.

7 呂 然，張曉慧，馮慶亮，等.吉非替尼聯合自體DC/CIK細胞回輸治療老年局部晚期非小細胞肺癌療效觀察〔J〕.山東醫藥，2015;55(18):72-4.

8 周紅兵，艾 偉，孫 林.紫杉醇脂質體和吉西他濱分別聯合順鉑治療晚期非小細胞肺癌的效果及其與中性粒細胞/淋巴細胞比值的相關性〔J〕.中國醫藥，2015;10(4):468-72.

9 岳 愷.自體免疫細胞聯合TP化療方案對老年晚期非小細胞肺癌患者生存的影響〔J〕.中國老年學雜志，2015;35(16):4563-5.

10 Pang L,Wang J,Jiang Y,etal.Decreased levels of serum cytokeratin 19 fragment CYFRA 21-1 predict objective response to chemotherapy in patients with non-small cell lung cancer〔J〕.Exp Ther Med,2013;6(2):355-60.

11 Lo TC,Hsu FM,Chang CA,etal.Branched α-(1,4)glucans from Lentinula edodes(L10)in combination with radiation enhance cytotoxic effect on human lung adenocarcinoma through the Toll-like receptor 4 mediated induction of THP-1 differentiation/activation〔J〕.J Agric Food Chem,2011;59(22):11997-2005.

12 呂 然，胡榮鵬，馮慶亮，等.自體DC-CIK細胞回輸在MWA聯合化療治療局部晚期腺細胞肺癌中的作用〔J〕.實用腫瘤雜志，2015;30(4):359-63.

〔2015-10-19修回〕

(編輯 袁左鳴)

倪一鳴(1956-)，男，博士生導師，主任醫師，主要從事心胸外科方面研究。

肖懷清(1980-)，男，主治醫師，主要從事肺癌、食管癌、縱隔腫瘤研究。

R736

A

1005-9202(2017)01-0123-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.01.054

1 武警浙江省總隊醫院胸外科